この手順の全体的な目標は、マウスの再血管化療法後の脳炎の人間の状態を模倣し、傷害応答に関与する分子機構を研究することです。これらの技術の主な利点は、再現性が高く、簡単に行われ、最小限の経験を持つ研究者が小さな動物モデルにこの方法を適用できるようにすることです。手順を実証することは、私の研究室のポスドクであるアデリーナ・クラジです。
高脂血症を誘導するには、6〜8週齢の18〜20グラムのアポエノックアウトマウスを外科的処置の1週間前およびアテローム硬化性プラーク分析までアテロ症状の食事を与える。手術当日、足指ピンチに対する反応の欠如を確認した後、腹側頸部領域で麻酔マウスを剃り、露出した皮膚をベタジンで消毒する。気管の上に首の中央値領域に1センチメートルの皮膚切開を行い、気管領域の完全なビューを得るために2つの脂肪体を分離します。
1つのレトラクターを使用して筋肉層を開いたままにし、頸動脈を露出させ、鋭い湾曲した鉗子を使用して、内部および外的頸動脈の分岐領域が見えるまで迷走神経および頸静脈から動脈を分離する。大動脈に近い頸動脈の下に長さ0〜5シルク縫合糸を7センチメートル置き、次に分岐点に近い外頸動脈の周りに長さ0〜7センチメートルのシルク縫合糸を緩く配置し、1つは長さ0-7シルク縫合ループを可能な限り遠位に置いた。内部頸動脈の下に長さ0〜7シルク縫合糸を開いて1.5センチメートルにします。
その後、6時の位置に頭で動物を配置します。直ちに、内部頸動脈の縫合ループと外頸動脈の遠位縫合糸をしっかりと閉じる。一般的な頸動脈を通る血流を停止するために0-5縫合糸の端を引っ張るために止血鉗子を使用してください。
小さいはさみを使用して、2つのループ間の外的頸動脈に遠位の血管直径の半分の小さな動脈切開術を行い、切開を介して一般的な頸動脈に0.9%の塩化ナトリウムを滴下して湿らせた14インチのアルコール研磨フレキシブルガイドワイヤーを挿入する。Y-切開時の動脈の噴火を避けるために、慎重に磨かれたガイドワイヤーを使用してください。3回回転しながら血管に沿ってワイヤーを通過させることで内皮性の否定を得て、次に外的頸動脈の近位ループをしっかりと閉じ、一般的および内部の頸動脈の周りの縫合糸を切断して血流を回復させる。
次に、リトラクタを取り除き、筋肉層と2つの脂肪体を生理学的位置に戻します。金属クリップで皮膚を閉じ、マウスが完全にリカンベントされるまで監視して赤外線の下で左側に回復させます。ネオインティマの形成は、Movat染色を使用して評価することができる。
総プラークサイズは、外科医のスキルに応じて70,000と100,000ミクロンの2乗の間で変化し得る、適切なソフトウェアを使用して各サンプルについて計算することができる。開発されたプラークは、主に増殖し、培地から滑らかな筋肉細胞で構成されるインスタント残り質化に似ています。平滑筋細胞の含有量は、プラークの約30〜40%を表し、負傷した血管のネオインティマ内で見つかったマクロファージは、総細胞数の15〜25%を占める。
再血管化は、通常、3週間後に80〜90%に達し、4週間後にほぼ完了する必要があります。その開発中にプラークの成長を追跡するために、分析は、実験の質問に応じて、ワイヤ損傷後の複数の時点で繰り返すことができます。一度習得すると、この技術は、それが正常に実行されている場合、15分で完了することができます。
この手順を試みる間、乾燥を防ぎ、ワイヤー操作を容易にするために外科領域は常に水分補給されるべきであることを覚えておくことが重要です。
