L'obiettivo generale di questa procedura è imitare la condizione umana di restenosi dopo la terapia di rivascolarizzazione nei topi per studiare i meccanismi molecolari coinvolti nella risposta alle lesioni. I principali vantaggi di queste tecniche sono che è altamente riproducibile e facilmente eseguibile, consentendo al ricercatore con un'esperienza anche minima di applicare il metodo in piccoli modelli animali. A dimostrare la procedura sarà Adelina Curaj, postdoc del mio laboratorio.
Per indurre l'iperlipidemia, nutrire da sei a otto settimane da 18 a 20 grammi Topi knockout Apoe una dieta aterogenica una settimana prima della procedura chirurgica e fino all'analisi della placca aterosclerotica. Il giorno dell'intervento, dopo aver confermato una mancanza di risposta al dito del piedi, radere il topo anestetizzato nella regione del collo ventrale e disinfettare la pelle esposta con Betadine. Fare un'incisione cutanea di un centimetro nella regione mediana del collo sulla trachea e separare i due corpi grassi per ottenere una visione completa della regione tracheale.
Usando un riavvolgitore per tenere aperto lo strato muscolare, esporre l'arteria carotide e utilizzare forcep curve affilate per separare l'arteria dal nervo vago e dalla vena giugulare fino a quando l'area di biforcazione dell'arteria carotide interna ed esterna è visibile. Liberamente, posizionare una sutura di seta lunga sette centimetri e lunga 0-5 sotto l'arteria carotide prossimale all'arco aortico, seguita da una sutura di seta lunga 1,5 centimetri 0-7 vagamente posizionata intorno all'arteria carotide esterna vicino al punto di biforcazione e da un anello di sutura di seta lungo 1,5 centimetri il più distale possibile dalla biforcazione. Posizionare un'altra sutura di seta aperta lunga 1,5 centimetri 0-7 sotto l'arteria carotide interna.
Quindi posizionare l'animale con la testa a ore sei. Immediatamente, chiudere saldamente gli anelli di sutura sull'arteria carotide interna e la sutura distale sull'arteria carotide esterna. Usa le forcep emostat per tirare sulle estremità della sutura 0-5 per fermare il flusso sanguigno attraverso la comune arteria carotide.
Utilizzando piccole forbici, fare una piccola arteriotomia della metà del diametro del vaso distale all'arteria carotide esterna tra i due anelli e inserire un filo guida flessibile lucidato alcool da 14 pollici inumidito con una goccia di cloruro di sodio dello 0,9% nell'arteria carotide comune attraverso l'incisione. Per evitare l'eruzione arteriosa durante l'incisione Y, utilizzare un filo guida accuratamente lucidato. Ottenere la denudazione endoteliale passando il filo lungo il vaso ruotando tre volte, quindi chiudere saldamente l'anello prossimale sull'arteria carotide esterna e tagliare le suture attorno alle arterie carotidi comuni ed interne per ripristinare il flusso sanguigno.
Quindi, rimuovere i retrattiri e riportare lo strato muscolare e i due corpi grassi nella posizione fisiologica. Chiudere la pelle con clip metalliche, quindi lasciare che il mouse si riprenda sul lato sinistro sotto una luce infrarossa con monitoraggio fino a quando non è completamente reclinato. La formazione neointima può essere valutata usando la colorazione Movat.
La dimensione totale della placca, che può variare tra 70.000 e 100.000 micron al quadrato, a seconda dell'abilità del chirurgo, può quindi essere calcolata per ogni campione utilizzando il software appropriato. La placca sviluppata assomiglia alla restenosi istantanea, che consiste prevalentemente di cellule muscolari lisce proliferate e migrate dal mezzo. Il contenuto liscio delle cellule muscolari rappresenta circa il 30-40% della placca, mentre i macrofagi trovati all'interno del neointima del vaso ferito covano dal 15 al 25% del numero totale di cellule.
La remotelializzazione raggiunge in genere l'80-90% dopo tre settimane e dovrebbe essere quasi completa dopo quattro settimane. Per tracciare la crescita della placca durante il suo sviluppo, l'analisi può essere ripetuta in più punti di tempo dopo la lesione del filo a seconda della domanda sperimentale. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere completata in 15 minuti se viene eseguita correttamente.
Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare che l'area chirurgica deve essere costantemente idratata per prevenire l'essiccazione e facilitare la manipolazione del filo.
