Este método puede ayudar a responder preguntas clave sobre el tratamiento basado en células madre de las neuropatías periféricas, particularmente para la neuropatía laríngea renuente equina. Las principales ventajas de esta técnica son que la cosecha de células madre es mínimamente invasiva, y que el método de inyección también se puede transferir a otras neuropatías periféricas. Las implicaciones de esta técnica se extienden a otros estudios de otros tipos de células, ya que las células madre se pueden diferenciar en otras células de interés antes de la inyección.
La demostración visual de este método es crítica, ya que el control endoscópico de vídeo de los movimientos laríngeos y la manipulación de las técnicas de estimulación nerviosa pueden ser difíciles de aprender. Identificar el sitio de la muestra en la cabeza larga del músculo del tríceps por inspección visual y palpación, sobre la línea media entre el punto del codo y el punto del hombro. Utilice pinzas eléctricas para afeitar un área de aproximadamente dos por dos centímetros, y aplique un exfoliante quirúrgico que consiste en jabón líquido de poli yoduro y compresas de alcohol durante un minuto a la piel expuesta.
Con una aguja de calibre 25, inyecte por vía subcutánea un mililitro de solución de lidocaína al 2% en el centro del área desinfectado. Después de desinfectar con jabón de manos antibacteriano limpio y poner guantes estériles, coloque una aguja de biopsia de calibre 14 semiautomática en una cortina estéril desechable y tire del mecanismo de resorte para armar la aguja. Montar una cánula y obturador en la posición bloqueada para formar un trochar, e introducir el trochar perpendicularmente a través de la piel desensibilizada, aproximadamente 1,5 centímetros en el tejido muscular de colocación inferior.
A continuación, retire el trochar y coloque el obturador sobre una cortina estéril. Introducir la aguja a través de la cánula. A continuación, introduzca la aguja y la cánula a través de la incisión de la piel en el músculo, hasta que la punta de la aguja esté en el centro de la cabeza larga del músculo tríceps.
Luego suelte la aguja de la biopsia, tire de la aguja y la cánula del músculo juntas, y retire la aguja de la cánula. Tire del muelle con una mano mientras sostiene la aguja con la otra mano, hasta que la muestra se haga visible en la punta de la aguja de la biopsia. Con la ayuda de un asistente, abra un tubo de muestra que contenga el medio de muestra y utilice una aguja hipodérmica de calibre 19 para transferir la pequeña pieza muscular de la aguja de la biopsia al medio de muestreo.
Cierre el tubo con la tapa del tornillo e incline suavemente el tubo dos veces para asegurarse de que la muestra está flotando en el medio. Luego vuelva a armar la aguja de la biopsia y vuelva a introducir la cánula a través de la incisión de la piel para recoger de dos a tres muestras más hasta que se hayan adquirido aproximadamente 20 miligramos de tejido muscular. Para inyectar las células, después de calentar la suspensión celular a temperatura ambiente, aspirar un mililitro de células en una jeringa de dos mililitros y confirmar que el caballo está en la posición de cabeza hacia abajo que es indicativo de sedación completa.
A continuación, recorte un área de veinte por diez centímetros sobre la región laríngea izquierda y aplique un exfoliante quirúrgico de jabón de poli-yoduro y alcohol a la región expuesta. Coloque un video endoscopio estándar flexible a través de la nare izquierda del caballo hacia la nasofaringe, ajustando la posición del endoscopio hasta obtener una vista completa de los cartílagos arytenoides y la epiglotis. Conecte la aguja de inyección de estimulación al electrodo negativo del estimulador nervioso.
Conecte la jeringa que contiene la suspensión celular a la línea de inyección y rellene previamente el tubo para eliminar el aire del sistema. Conecte el electrodo positivo del estimulador nervioso a un parche de electrodo que se pegará al área de la piel expuesta. Cargue una jeringa con un volumen de solución salina estéril igual al volumen precargado del tubo, e introduzca la aguja de inyección de estimulación hacia el aspecto dorsolateral de la laringe, iniciando el estimulador nervioso en el modo de estimulación de un hercio, con una corriente de dos miliamperios al acercarse al aspecto lateral dorsal de la laringe.
Mueva suavemente la aguja hacia el nervio laríngeo recurrente. Tan pronto como el movimiento de abducción del cartílago arytenoid izquierdo sea visible, reduzca la corriente, hasta que el movimiento desaparezca, manteniendo la aguja en su lugar. Cuando se observe una pérdida de respuesta motora a 0,5 miliamperios, mantenga la posición de la aguja e inyecte un mililitro de las células madre autólodas, seguido de todo el volumen de solución salina pre-preparada.
Mantener la aguja en una posición estable durante este proceso, ya que la distancia a los nervios es controlada por las corrientes que produce una respuesta motora y pequeños movimientos de la aguja pueden producir una pérdida repentina de respuesta. A continuación, retire la aguja y el endoscopio, y deje que el caballo se recupere con monitoreo. En estudios anteriores, no se han observado reacciones adversas durante o después del muestreo, ni se ha observado ninguna inflamación durante o después de la estimulación o la inyección de las células madre.
Además, no hay diferencias entre las puntuaciones previas a la inyección de las funciones laríngeas, y las puntuaciones obtenidas en los días uno, siete y 28 después de la inyección de células madre se han medido. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que el procedimiento de recolección de células madre no es invasivo y permite el cultivo de un gran número de células madre mesenquimales autóloticas en un corto período de tiempo. Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como la inyección de células pre-diferenciadas, para responder preguntas adicionales sobre si las células Schwann son más propensas a contribuir a la determinación de los nervios.
Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores de la medicina regenerativa exploraran el uso de células madre en la neuropatía laríngea renuente equina.
