この方法は、末梢神経障害の幹細胞ベースの治療に関する重要な質問に答えるのに役立ちます, 特に馬再発喉頭神経障害のための.この技術の主な利点は、幹細胞の収穫が最小限の侵襲性であり、注射方法が他の末梢神経障害にも転移できることである。この技術の意味は、幹細胞が注射前に目的の他の細胞に分化することができるので、他の細胞タイプの他の研究にも及ぶ。
この方法の視覚的なデモンストレーションは、喉頭運動のビデオ内視鏡的制御および神経刺激技術の操作が学ぶのが難しい可能性があるため、非常に重要です。腕上筋の長頭のサンプル部位を目視検査と触診により、肘の点と肩の点の間の正中線について特定する。電気バリカンを使用して約2センチメートルの面積を剃り、露出した皮膚に1分間ポリヨウ化液体石鹸とアルコール圧縮からなる外科スクラブを適用します。
25ゲージ針を用いて、2%リドカイン溶液の1ミリリットルを、分解された領域の中心に皮下注射する。清潔な抗菌ハンドソープで消毒し、滅菌手袋を着用した後、使い捨ての滅菌ドレープに半自動14ゲージ生検針を置き、スプリング機構を引っ張って針を武装します。ロックされた位置にカニューレとオブチュレーターを組み立ててトロチャーを形成し、鈍感化した皮膚を垂直にトロチャーを導入し、約1.5センチメートルを下敷筋組織に入れる。
その後、トロチャーを取り出し、無菌ドレープの上にオブチュレータを置きます。カニューレを通して針を導入します。次に、針の先端が三頭筋の頭の真ん中に入るまで、皮膚切開部を通して針とカニューレを筋肉に導入する。
次に、生検針を解放し、針とカニューレを一緒に筋肉から引き出し、カニューレから針を取り出します。片方の手で針を持ちながら、検体が生検針の先端に見えるまで、片手でスプリングを引っ張ります。助手の助けを借りて、サンプル培地を含むサンプルチューブを開き、19ゲージの皮下注射針を使用して、生検針からサンプリング媒体に小さな筋肉片を移します。
ねじキャップでチューブを閉じ、チューブを 2 回軽く傾けてサンプルが媒体に浮かんでいるようにします。次に生検針を再武装し、皮膚切開を通してカニューレを再導入し、約20ミリグラムの筋肉組織が獲得されるまでさらに2〜3個のサンプルを採取する。細胞を注入するために、細胞懸濁液を室温に温めた後、1ミリリットルの細胞を2ミリリットルのシリンジに吸引し、馬が完全な鎮静を示すヘッドダウン位置にあることを確認する。
次に、左喉頭領域の上に20センチメートルの領域をクリップし、露出した領域にポリヨウ化石鹸とアルコールの外科的スクラブを適用します。馬の左ナレを通って鼻咽頭に向かって柔軟な標準的なビデオ内視鏡を配置し、アーリテノイド軟骨および喉頭蓋の両方の全容が得られるまで内視鏡の位置を調節する。刺激注射針を神経刺激器の負極に接続します。
細胞懸濁液を含むシリンジを注入ラインに接続し、チューブをプレフィルしてシステムから空気を洗い流します。神経刺激剤の正極を、露出した皮膚の領域に貼り付けられる電極パッチに接続します。チューブのプレフィルド体積に等しい無菌生理食液の体積を持つ注射器をロードし、喉頭の後方面に向かって刺激注射針を導入し、1つのヘルツ刺激モードで神経刺激装置を開始し、喉頭の後部側面に近づくと2つのミリアンペアの電流を得る。
針を、反復喉頭神経に向かってそっと動かします。左のアロイテノイド軟骨の外反運動が見えなければすぐに、針を所定の位置に保ちながら、動きが消えるまで電流を減らす。0.5ミリアンペアで運動応答の損失が観察された場合、針の位置を維持し、自家幹細胞の1ミリリットルを注入し、その後に準備された生理食塩水の全容を続ける。
神経への距離は運動応答を生成する電流によって制御され、針の小さな動きが突然応答の損失を生じる可能性があるため、このプロセス中に針を安定した位置に維持します。次に針と内視鏡を取り外し、馬が監視して回復できるようにします。これまでの研究では、サンプリング中またはサンプリング後に有害反応は認められず、幹細胞の刺激または注入中または注射後に炎症が認められていません。
また、喉頭機能の注射前スコアと、幹細胞注射後1日目、7日目、28日目に得られたスコアとの間に差は一切なく測定されている。この手順を試みる間、幹細胞の収集手順は非侵襲的であり、短期間で膨大な数の自家間葉系幹細胞の培養が可能であることを覚えておくことが重要です。この手順に従って、他の方法は、事前分化細胞の注入のような、シュワン細胞が神経の決定に寄与する可能性が高いかどうかについての追加の質問に答えるために行うことができる。
その開発後、この技術は、再生医療の研究者が馬の再発喉頭神経障害における幹細胞の使用を探求する道を開いた。
