Detección de actividad de fosfolipasa C en el homogeneizado de cerebro de la abeja

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la neurociencia, como si y cómo las actividades del PLC en diferentes regiones del cerebro están involucrados en la función cerebral de la abeja melífera. La principal ventaja de esta técnica es que los investigadores pueden preformar fácilmente un experimento con las instalaciones de laboratorio estándar, ya que este protocolo requiere sólo manipulaciones básicas. Para comenzar, coloque un tubo de 50 ml que contenga abejas en hielo durante 30 minutos para anestesiar a las abejas. A continuación, prepare la etapa de disección doblando un trozo de cera dental por la mitad y colocándola en un plato de plástico. Bajo un microscopio binocular, usa pinzas para separar la cabeza de la abeja de su cuerpo. A continuación, fije la cabeza en la cera dental e inserte los pasadores de insectos en la base de cada antena para mantener el interior de la cabeza en una posición ascendente. A continuación, vierta suficiente solución salina sobre la cabeza para cubrirla. El uso de pinzas retire la antena. Después de esto, utilice un bisturí para hacer un corte horizontal cerca de las bases de la antena y un corte longitudinal en el borde de los ojos compuestos. Haga un corte horizontal en la parte superior de la cabeza y retire la cutícula para abrir una ventana sobre el cerebro. A continuación, usa pinzas para extraer el ojo de retin de la osícula y la tráquea de la superficie interior del cerebro. Luego, inserte las pinzas directamente debajo de la cutícula ocular para eliminar el tejido conectivo entre la cutícula de los ojos compuestos y el ojo retin. Después de eso, retire la cutícula y el ojo de retin de los ojos compuestos. A continuación, utilice las pinzas para eliminar cuidadosamente la tráquea restante de la superficie interior del cerebro. Luego, corta el tejido conectivo entre el cerebro y alrededor de los tejidos y disecciona el cerebro de la cápsula de la cabeza. Usando las pinzas, pela la tráquea de la superficie posterior del cerebro. Luego usa un bisturí para cortar la conexión entre los cuerpos de setas o MBs y otras regiones cerebrales junto a los lóbulos verticales. Coloque los MB diseccionados y los tejidos cerebrales restantes en tubos de 1,5 ml y congénelos rápidamente con hielo seco. Primero, agregue 10 ml de tampón de homogeneización al tejido cerebral congelado. Utilice una peselle de plástico para homogeneizar manualmente el tejido en el tubo de 1,5 ml. Después de esto, transferir la solución de tejido homogeneizado al siguiente tejido en el lote y repetir el proceso de homogeneización. A continuación, agregue 30