Определение активности фосфолипазы C в мозг огневки от пчелы

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области неврологии, такие как ли и как PLC деятельности в различных областях мозга участвуют в функции мозга медоносных пчел. Основным преимуществом этого метода является то, что исследователи могут легко предварительно провести эксперимент со стандартными лабораторными помещениями, так как этот протокол требует только базовых манипуляций. Для начала поместите 50 мл трубки, содержащей медоносных пчел на льду в течение 30 минут, чтобы анестезировать пчел. Затем подготовьтесь к этапу вскрытия, сложив кусок зубного воска пополам и поместив его в пластиковую тарелку. Под бинокулярным микроскопом используйте пинцет, чтобы отделить голову пчелы от ее тела. Затем зафиксните голову на зубном воске и вставьте булавки насекомых у основания каждой антенны, чтобы удерживать внутреннюю часть головы в восходящем положении. Далее, залить достаточно солевого раствора над головой, чтобы покрыть его. С помощью пинцета удалить антенну. После этого используйте скальпель, чтобы сделать горизонтальный разрез вблизи основания антенны и продольный разрез на границе сложных глаз. Сделать горизонтальный разрез в верхней части головы и удалить кутикулу, чтобы открыть окно над мозгом. Далее используйте пинцет, чтобы удалить ретин глаз из ококлы и трахе с внутренней поверхности мозга. Затем вставьте пинцет прямо под кутикулу глаза, чтобы удалить соединительной ткани между кутикулой сложных глаз и ретин глаза. После этого удалите кутикулу и отретин глаза сложных глаз. Затем используйте пинцет, чтобы тщательно удалить оставшийся траш с внутренней поверхности мозга. Затем вырежьте соединительной ткани между мозгом и вокруг тканей и вскрыть мозг из головы капсулы. Используя пинцет, очистить траш от задней поверхности мозга. Затем используйте скальпель, чтобы сократить связь между грибными телами или МБ и другими областями мозга рядом с вертикальными долями. Поместите вскрытые MBs и любые оставшиеся ткани мозга в 1,5 мл труб и заморозить их быстро с сухим льдом. Во-первых, добавьте 10 мл буфера гомогенизации в замороженную ткань мозга. Используйте пластиковую песель, чтобы вручную гомогенизировать ткани в 1,5 мл трубки. После этого перенесите раствор гомогенизированной ткани в следующую ткань в партии и повторите процесс гомогенизации. Затем добавьте 30