꿀벌에서 두뇌 Homogenate에서 Phospholipase C 활동의 탐지

이 방법은 다른 뇌 영역에서 PLC 활동이 꿀벌의 뇌 기능에 관여하는지 여부와 방법과 같은 신경 과학 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 연구원이 이 프로토콜만 기본적인 조작만 필요하기 때문에 표준 실험실 시설을 사용하여 실험을 쉽게 수정할 수 있다는 것입니다. 먼저 꿀벌을 얼음 위에 꿀벌이 들어 있는 50ml 튜브를 30분 간 놓고 꿀벌을 마취시합니다. 다음으로, 치과 왁스 조각을 반으로 접어 서 서 해부 단계를 준비 하 고 플라스틱 접시에 배치 합니다. 쌍안경 현미경의 밑에, 몸에서 꿀벌의 머리를 분리하기 위하여 핀셋을 사용합니다. 그런 다음, 치과 왁스에 머리를 고정하고 상향 위치에 머리의 내부를 유지하기 위해 각 안테나의 바닥에 곤충 핀을 삽입합니다. 다음으로, 그것을 덮기 위해 머리 위에 충분한 식염수 용액을 붓습니다. 핀셋을 사용하면 안테나가 제거됩니다. 그런 다음 메스를 사용하여 안테나의 기지 근처에서 수평 절단을 하고 복합 눈의 경계에서 세로 절단을 합니다. 머리 의 상단에 수평 컷을 확인하고 뇌를 통해 창을 열 수있는 큐티클을 제거합니다. 다음으로 핀셋을 사용하여 뇌의 내부 표면에서 소과 기관에서 망막 눈을 제거합니다. 그런 다음, 핀셋을 눈 표기 아래에 직접 삽입하여 복합 눈과 망막 눈의 큐티클 사이의 결합 조직을 제거합니다. 그 후, 화합물 눈의 큐티클과 망막 눈을 제거합니다. 다음으로 핀셋을 사용하여 뇌의 내부 표면에서 남은 기관체를 조심스럽게 제거합니다. 그런 다음 뇌와 조직 주위의 결합 조직을 잘라 헤드 캡슐에서 뇌를 해부합니다. 핀셋을 사용하여 뇌의 후방 표면에서 기관지 껍질을 벗깁니다. 그런 다음 메스를 사용하여 수직 엽 옆에 있는 버섯 몸이나 MB및 기타 뇌 영역 사이의 연결을 잘라냅니다. 해부된 MB와 남은 뇌 조직을 1.5ml 튜브에 넣고 드라이 아이스로 빠르게 얼립니다. 첫째, 냉동 뇌 조직에 균질화 완충제 10ml를 추가합니다. 1.5ml 튜브의 조직을 수동으로 균질화하기 위해 플라스틱 페셀을 사용합니다. 그 후, 균질화된 조직 용액을 제비의 다음 조직으로 옮기고 균질화 과정을 반복한다. 그런 다음 30을 추가합니다.