Rilevamento di attività della fosfolipasi C in omogeneato del cervello dall'ape

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo delle neuroscienze come se e come le attività PLC in diverse regioni cerebrali sono coinvolte nella funzione cerebrale dell'ape. Il vantaggio principale di questa tecnica è che i ricercatori possono facilmente preformare un esperimento con le strutture di laboratorio standard in quanto questo protocollo richiede solo manipolazioni di base. Per iniziare, posizionare un tubo da 50 ml contenente api da miele sul ghiaccio per 30 minuti per anestetizzare le api. Successivamente, preparare la fase di dissezione piegando un pezzo di cera dentale a metà e posizionandolo in un piatto di plastica. Al microscopio binoculare, usa le pinzette per separare la testa dell'ape dal suo corpo. Quindi, fissare la testa sulla cera dentale e inserire spilli per insetti alla base di ogni antenna per tenere l'interno della testa in posizione verso l'alto. Quindi, versare abbastanza soluzione salina sopra la testa per coprirlo. Usando le pinzette rimuovere l'antenna. Dopo questo, usa un bisturi per fare un taglio orizzontale vicino alle basi dell'antenna e un taglio longitudinale al bordo degli occhi composti. Fai un taglio orizzontale nella parte superiore della testa e rimuovi la cuticola per aprire una finestra sul cervello. Successivamente, utilizzare una pinzetta per rimuovere l'occhio della retina dall'ossicolo e il trache dalla superficie interna del cervello. Quindi, inserire le pinzette direttamente sotto la cuticola oculare per rimuovere il tessuto connettivo tra la cuticola degli occhi composti e l'occhio retin. Successivamente, rimuovere la cuticola e l'occhio retin degli occhi composti. Quindi, utilizzare le pinzette per rimuovere con cura il trache rimanente dalla superficie interna del cervello. Quindi, tagliare il tessuto connettivo tra il cervello e intorno ai tessuti e sezionare il cervello dalla capsula della testa. Usando le pinzette, staccare il trache dalla superficie posteriore del cervello. Quindi usa un bisturi per tagliare la connessione tra i corpi dei funghi o gli MB e altre regioni cerebrali accanto ai lobi verticali. Posizionare gli MB sezionati e tutti i tessuti cerebrali rimanenti in tubi da 1,5 ml e congelarli rapidamente con ghiaccio secco. In primo luogo, aggiungere 10 ml di tampone di omogeneizzazione al tessuto cerebrale congelato. Utilizzare una peselle di plastica per omogeneizzare manualmente il tessuto nel tubo da 1,5 ml. Successivamente, trasferire la soluzione di tessuto omogeneizzato al tessuto successivo nel lotto e ripetere il processo di omogeneizzazione. Quindi, aggiungi 30