Nuestros datos indican que los algogens reducen los comportamientos de rayado, pero el efecto de la capsaicina en los comportamientos de rayado sigue sin estar claro. Por lo tanto, una medición simultánea de cada cantidad de dolor es importante. El método tradicional proporciona información solo para la picazón o las sensaciones de dolor, pero el modelo de inyección de mejillas proporciona información para la picazón y el dolor, por separado y simultáneamente.
La inyección de la mejilla puede ser difícil al principio, ya que se necesita práctica para discriminar los comportamientos de rascado, limpieza y aseo. La demostración en vídeo de la inyección y el análisis del comportamiento puede ser útil para dominar las técnicas. Para un experimento de inyección de mejillas, el día antes de la evaluación, afeite el pelaje en la mejilla de cada ratón con cortapelos y monte una cámara de video con una velocidad de fotogramas de 30 a 60 fotogramas por segundo en un trípode, en un ambiente de temperatura, humedad y sonido controlado.
Coloque cuatro jaulas debajo de la cámara en la orientación indicada y coloque las pantallas entre cada jaula para evitar que los ratones se vean entre sí. Un día después del afeitado, coloque un ratón en cada jaula de grabación durante una hora para aclimatar a los animales a las condiciones de grabación. Si se va a utilizar un tratamiento tópico, aplíquelo en este momento.
Mientras los animales se aclimatan, cargue la sustancia de prueba de interés en una jeringa de 0,5 mililitros equipada con una aguja de calibre 29 o 30 por ratón. Al final del período de aclimatación, inicie la grabación de vídeo antes de la inyección. A continuación, inyecte una solución de 10 microlitros de la sustancia de ensayo intradérmicamente en la mejilla afeitada del animal despierto.
A continuación, devuelva los ratones inyectados a sus respectivas jaulas y continúe la grabación de vídeo durante 30 minutos. Al final del experimento, cargue el vídeo en un programa de software de edición de vídeo adecuado. Cuenta cada vez que un ratón levanta una pata trasera hacia la mejilla y se rasca varias veces durante uno o unos segundos antes de colocar la pierna hacia abajo como una pelea de rasguño.
Los ratones usan una sola pata delantera para limpiar, y ambas patas delanteras para el aseo, pero solo los comportamientos de limpieza se cuentan como comportamientos relacionados con el dolor. Para un experimento de inyección de cuello, un día antes del experimento, afeita el pelaje en la nuca de cada ratón con cortapelos. Un día después del afeitado, aclimate a los ratones en las jaulas de grabación durante una hora antes de inyectar 10 microlitros de la sustancia de ensayo de interés intradérgicamente en el cuello afeitado, en condiciones de despertar.
Devuelva a los animales inyectados a sus jaulas de grabación y grabe los comportamientos del ratón durante 30 minutos. A continuación, cuente los combates de rascado en el cuello y cualquier comportamiento de limpieza de la cara como acaba de demostrar. En el modelo de inyección de cuello, la histamina induce fuertes comportamientos de rascado, mientras que el vehículo induce arañazos leves.
En el modelo de inyección de mejillas, la capsaicina no induce comportamientos de rascado, pero induce comportamientos de limpieza, que se cree que están relacionados con el dolor. Después de la inyección en la mejilla, la histamina induce principalmente comportamientos de rascado con comportamientos de limpieza débiles. La aplicación de un reactivo antihistamínico inhibe el rascado, lo que sugiere que los comportamientos de rascado inducidos por histamina son causados por la reacción de histamina en los receptores de histamina.
En este experimento, la aplicación de un mediador de picazón indujo arañazos, pero no comportamientos de limpieza, lo que indica que el mediador probado actúa como un pruritogen, pero no un algogen en ratones, similar a sus efectos en humanos. Este método permite distinguir la picazón y las sensaciones de dolor con un solo procedimiento. Se puede hacer un análisis de comportamiento detallado centrándose en la picazón o la sensación del dolor.
Los comportamientos de picazón y dolor otorgan diferentes respuestas. Además, estas técnicas no son difíciles. El procedimiento de inyección y observación de la mejilla puede permitir que varios de nuestros compañeros de entrenamiento dominen.
Apreciamos la introducción del modelo de inyección de mejillas por el profesor LaMotte en la Universidad de Yale.
