Nossos dados indicam que os algogens reduzem os comportamentos de arranhões, mas o efeito da capsaicina nos comportamentos de arranhões permanece incerto. Portanto, uma medição simultânea de cada quantidade de dor é importante. O método tradicional fornece informações apenas para sensação de coceira ou dor, mas o modelo de injeção da bochecha fornece informações para coceira e dor, separadamente e simultaneamente.
A injeção na bochecha pode ser difícil no início, pois é preciso prática para discriminar os comportamentos de arranhões, limpeza e limpeza. A demonstração em vídeo da injeção e análise comportamental pode ser útil para dominar as técnicas. Para um experimento de injeção de bochecha, no dia anterior à avaliação, raspe a pele na bochecha de cada rato com cortadores de cabelo, e monte uma câmera de vídeo com uma taxa de quadro de 30 a 60 quadros por segundo em um tripé, em um ambiente de temperatura, umidade e controlado pelo som.
Coloque quatro gaiolas sob a câmera na orientação indicada, e coloque telas entre cada gaiola para evitar que os ratos se vejam. Um dia após a barba, coloque um rato em cada gaiola de gravação por uma hora para aclimatar os animais às condições de gravação. Se um tratamento tópico for usado, aplique-o neste momento.
Enquanto os animais estão aclimatando, carregue a substância de teste de interesse em uma seringa de 0,5 mililitro equipada com uma agulha de calibre 29 ou 30 por rato. No final do período de aclimatação, inicie a gravação de vídeo antes da injeção. Em seguida, injete uma solução de 10 microliter da substância de teste intradermicamente na bochecha raspada do animal acordado.
Em seguida, devolva os ratos injetados para suas respectivas gaiolas e continue a gravação de vídeo por 30 minutos. No final do experimento, carregue o vídeo em um programa de software de edição de vídeo adequado. Conte cada vez que um rato levanta uma perna traseira em direção à bochecha e arranha várias vezes ao longo de um ou alguns segundos antes de colocar a perna para baixo como uma luta de arranhão.
Os camundongos usam um único foreleg para limpar, e ambos os forelegs para o preparo, mas apenas comportamentos de limpeza são contados como comportamentos relacionados à dor. Para um experimento de injeção de pescoço, um dia antes do experimento, raspe a pele na nuca de cada rato com cortadores de cabelo. Um dia após a barba, aclimar os ratos nas gaiolas de gravação por uma hora antes de injetar 10 microliters da substância de teste de interesse intradermicamente no pescoço raspado, em condições acordadas.
Devolva os animais injetados para suas gaiolas de gravação e grave os comportamentos do rato por 30 minutos. Em seguida, conte as crises de arranhão no pescoço e qualquer comportamento de limpeza facial como apenas demonstrado. No modelo de injeção do pescoço, a histamina induz fortes comportamentos de coçar, enquanto o veículo induz arranhões leves.
No modelo de injeção na bochecha, a capsaicina não induz comportamentos de coçar, mas induz comportamentos de limpeza, que são considerados relacionados à dor. Após a injeção na bochecha, a histamina induz principalmente comportamentos de arranhões com comportamentos fracos de limpeza. A aplicação de um reagente anti-histamina inibe arranhões, sugerindo que comportamentos de arranhões induzidos por histamina são causados pela reação de histamina nos receptores de histamina.
Neste experimento, a aplicação de um mediador de coceira induziu arranhões, mas não limpando comportamentos, indicando que o mediador testado age como um pruritogênio, mas não um algogen em camundongos, semelhante aos seus efeitos em humanos. Este método permite que as sensações de coceira e dor sejam facilmente e claramente distinguidas com um procedimento. Uma análise detalhada do comportamento pode ser feita focando-se na coceira ou sensação de dor.
Coceira e comportamentos de dor concedem respostas diferentes. Além disso, essas técnicas não são difíceis. O procedimento de injeção e observação da bochecha pode deixar vários de nossos colegas de treinamento dominarem.
Agradecemos a introdução do modelo de injeção de bochechas pelo Professor LaMotte na Universidade de Yale.
