Este protocolo puede ayudar a los científicos a estudiar los resultados después de una lesión del nervio facial y métodos para mejorar la regeneración a través de muchos parámetros diferentes. La principal ventaja de esta técnica es que la anatomía de la rata permite un fácil acceso al nervio facial, y su gran escala nos permite estudiar todos los patrones de lesión relevantes. Las aplicaciones de esta técnica se extienden hacia la rehabilitación de los pacientes después de una lesión del nervio facial.
Como potencial regenerativo, la rata proporciona un modelo experimental reproducible y conciso. Y este método puede proporcionar información sobre terapias quirúrgicas y médicas para paresia o parálisis de nervios faciales. Y es traducible a otros modelos de cabeza y cuello u otros nervios periféricos.
Operar bajo un microscopio con ambas manos puede ser un desafío. Recomiendo practicar usando la versión binocular bajo el microscopio antes de intentar una disección del nervio facial. Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco del dedo del dedo del de la cabeza, aplicar ung mento en los ojos de la rata y afeitar el área quirúrgica.
Establecer un método para la identificación de ratas y colocar un rollo de gasa debajo del cuello. Desinfectar la piel expuesta con tres exfoliantes de clorhexidina alterna y 70% de etanol y colocar la rata bajo un microscopio estéreo. Manipular el oído ipsilateral en una dirección anterior-posterior para determinar el plegado natural de la piel postauricular.
Utilice una hoja número 15 para hacer una incisión de dos a tres milímetros en el pliegue postauricular. La planificación y la colocación de la incisión son los pasos más críticos para garantizar una identificación fiable del nervio facial y minimizar el tamaño de la herida. Diseccionar con descontento a través de la fascia subcutánea inmediata y colocar un retractor micro-Weitlaner para mejorar la exposición al tejido.
Identifique el músculo gástrico anterior a medida que viaja en una dirección inferior a superior hacia su inserción a lo largo de la base del cráneo. Se extiende suavemente a través del vientre muscular a lo largo del punto de inserción muscular para revelar el tendón del vientre lístric anterior. El tendón aparecerá como un proceso blanco filmado que emana del músculo con una inserción sólida en la base del cráneo.
Después de la identificación del músculo ritocuestric anterior y su tendón, ajuste el retractor Weitlaner para retraer aún más el vientre muscular. La región expuesta es el espacio tridimensional en el que se encuentra el tronco principal del nervio facial. Diseccionar a lo largo del nervio en una dirección inferior distalmente desde la salida del foramen estilomasmoide.
Para inducir un patrón de lesión por aplastamiento, utilice los fórceps del joyero de superficie lisa para agarrar y comprimir firmemente el nervio aplicando presión constante y reproducible durante 30 segundos para asegurar una lesión de aplastamiento adecuada. Para una simple transección, agarre el epineurio inmediato sobrelying el nervio con fórceps de dientes finos, y utilice microscisores agudos para transecto limpiamente el nervio en el punto deseado con un solo corte. Para un modelo de separación nerviosa, utilice pinzas ajustables para establecer la longitud deseada de la brecha del nervio nervioso para asegurar patrones de lesiones similares entre los animales y transecte el nervio como se acaba de demostrar.
Después de la lesión experimental ha sido entregada, irrigar la herida con solución salina estéril y secar el tejido con gasa estéril. antes de cerrar la incisión cutánea de acuerdo con las pautas institucionales. Aquí, se muestran imágenes en vivo del tronco principal del nervio facial con una lesión por aplastamiento aproximadamente de dos a tres milímetros de distal hasta el punto de rama de la primera PES en una rata Thy1-GFP transgénica adulta.
La evaluación del retorno gradual de la fluorescencia a una, dos, tres y cuatro semanas después de la lesión se puede utilizar como marcador para monitorear la regeneración nerviosa en estos animales transgénicos. El análisis histomorfométrico se puede utilizar para obtener imágenes transversales de la división mandibular marginal que permiten cuantificar el diámetro axonal, la cantidad de desechos, la fibra nerviosa, el porcentaje de nervio y las mediciones de densidad. Es importante ajustar con frecuencia la colocación del retractor según sea necesario para asegurarse de que los nervios anatómicos relevantes son visibles al identificar el nervio facial.
Después de este procedimiento, los nervios y músculos relevantes se pueden cosechar para el análisis inmunohistoquímico para evaluar el grado de regeneración en relación con otros grupos experimentales. Después de su desarrollo, esta técnica ha allanado el camino para los investigadores en el estudio de los resultados funcionales después de la lesión del nervio facial. Específicamente, cómo hacer el fenómeno de la sinquinesis.
