このプロトコルは、科学者が顔面神経損傷後の結果と、多くの異なるパラメータ間の再生を改善する方法を研究するのに役立ちます。この技術の主な利点は、ラットの解剖学が顔面神経への容易なアクセスを可能にし、その大規模な我々は関連する傷害パターンのすべてを研究することができるということです。この技術の応用は、顔面神経損傷後の患者のリハビリテーションに向けて広がる。
再生電位として、ラットは再現性と簡潔な実験モデルを提供します。そして、この方法は、顔面神経麻痺または麻痺のための外科的および医学的療法への洞察を提供することができる。そして、それは他の頭頸部モデルまたは他の末梢神経に翻訳可能です。
両手を使って顕微鏡で操作するのは難しいかもしれません。顔面神経解剖を試みる前に、顕微鏡で双眼鏡版を使って練習することをお勧めします。足指ピンチに対する応答の欠如を確認した後、ラットの目に軟膏を塗布し、外科的領域を剃る。
ラットの識別方法を確立し、首の下にガーゼのロールを配置します。3つの交互のクロルヘキシジンと70%エタノールスクラブで露出した皮膚を消毒し、ラットをステレオ顕微鏡の下に置きます。前後方向にイプシラテリアを操作して、心房後皮膚の自然な折り畳みを決定します。
15本の刃を使って、耳下垂の折り目に2~3ミリメートルの切開を行います。切開の計画と配置は、傷のサイズを最小限に抑えながら顔面神経の確実な同定を確保するための最も重要なステップです。即時皮下筋膜を通して鈍く解剖し、組織暴露を高めるためにマイクロワイトラナーレトラクタを置く。
頭蓋骨の基部に沿って挿入に向かって劣った方向から優れた方向に移動する前の筋を識別します。筋肉挿入点に沿って筋肉の腹を通して穏やかに広がり、前部筋の腱を明らかにする。腱は、頭蓋骨の基部に固体挿入を持つ筋肉から発せられるフィルム状の白いプロセスとして表示されます。
前部筋と腱を同定した後、さらに筋肉の腹を引っ込めるためにワイトラナーレトラクターを調整します。露出した領域は顔面神経の主幹が横たわっている三次元空間である。左口の口腔の出口から遠位方向に神経に沿って解剖する。
クラッシュ傷害パターンを誘発するには、滑らかな表面のジュエラーの鉗子を使用して、一定かつ再現可能な圧力を適用する神経を30秒間しっかりとつかんで圧縮し、適切なクラッシュ傷害を確実にします。簡単なトランセクションの場合は、細かい歯の鉗子で神経の上に直接エピニューリウムをつかみ、鋭利なマイクロシザーを使用して、1回の切り口で所望のポイントで神経をきれいにトランセクトします。神経ギャップモデルの場合、調整可能なキャリパーを使用して、所望の神経神経ギャップ長を設定して、動物間の同様の傷害パターンを確保し、単に実証したように神経をトランセクトします。
実験的な傷害が送達された後、滅菌生理的な状態で創傷を灌漑し、滅菌ガーゼで組織を乾燥させる。制度的ガイドラインに従って皮膚切開を閉じる前に。ここで、顔面神経の主幹の生撮像は、成人トランスジェニックThy1-GFPラットにおける第1PESの分岐点に約2〜3ミリメートル遠位のクラッシュ傷害を伴って示されている。
傷害後1、2、3、および4週間での蛍光の徐々な復帰の評価は、これらのトランスジェニック動物における神経再生をモニタリングするためのマーカーとして使用することができる。ヒストモルフォメトリクス解析を使用して、軸索直径、破片の量、神経線維、神経の割合、および密度測定を定量化できる、限界下顎除算の断面画像を得ることができます。顔面神経を識別する際に、関連する解剖神経が見えるように、必要に応じてレトラクタの配置を頻繁に調整することが重要です。
この手順に従って、関連する神経および筋肉を免疫組織化学分析のために採取し、他の実験群に対する再生の程度を評価することができる。その開発に続いて、この技術は、顔の神経損傷後の機能的な結果を研究する研究者のための道を開きました。具体的には、シンキネシスの現象に影響を与える方法。
