Dieses Protokoll kann Wissenschaftlern helfen, Ergebnisse nach Gesichtsnervenverletzungen und Methoden zur Verbesserung der Regeneration über viele verschiedene Parameter hinweg zu untersuchen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass die Anatomie der Ratte einen einfachen Zugang zum Gesichtsnerv ermöglicht und ihre große Skala es uns ermöglicht, alle relevanten Verletzungsmuster zu studieren. Die Anwendung dieser Technik erstreckt sich auf die Rehabilitation der Patienten nach Einer Gesichtsnervenverletzung.
Als regeneratives Potential liefert die Ratte ein reproduzierbares und prägnantes Versuchsmodell. Und diese Methode kann Einblick in chirurgische und medizinische Therapien für Gesichtsnervenparese oder Lähmungen geben. Und es ist auf andere Kopf- und Nackenmodelle oder andere periphere Nerven übertragbar.
Die Bedienung unter dem Mikroskop mit beiden Händen kann eine Herausforderung sein. Ich empfehle, die binokulare Version unter dem Mikroskop zu üben, bevor ich eine Gesichtsnervensektion versuche. Nach der Bestätigung eines Mangels an Reaktion auf Zehenkneifen, Tragen Sie Salbe auf die Augen der Ratte und rasieren Sie den chirurgischen Bereich.
Legen Sie eine Methode zur Rattenidentifikation fest und legen Sie eine Gazerolle unter den Hals. Desinfizieren Sie die exponierte Haut mit drei abwechselnden Chlorhexidin- und 70%Ethanol-Peelings und stellen Sie die Ratte unter ein Stereomikroskop. Manipulieren Sie das ipsilaterale Ohr in vorder-posteriorer Richtung, um die natürliche Faltung der postauricularen Haut zu bestimmen.
Verwenden Sie eine Klinge der Zahl 15, um einen Zwei- bis Drei-Millimeter-Schnitt in der postauricularen Falte zu machen. Die Planung und Platzierung des Schnittes sind die wichtigsten Schritte, um eine zuverlässige Identifizierung des Gesichtsnervs bei gleichzeitiger Minimierung der Wundgröße zu gewährleisten. Sezieren Sie stumpf durch die sofortige subkutane Faszien und platzieren Sie einen Mikro-Weitlaner-Retraktor, um die Gewebeexposition zu verbessern.
Identifizieren Sie den vorderen Gturastric Muskel, während er sich in einer schlechteren bis überlegenen Richtung in Richtung seiner Einfügung entlang der Schädelbasis bewegt. Verteilen Sie sich sanft durch den Muskelbauch entlang der Muskel-Einfügemarke, um die Sehne des vorderen Digastric-Bauchs zu offenbaren. Die Sehne erscheint als filmy weißer Prozess, der vom Muskel mit einer festen Einfügung auf die Schädelbasis ausgeht.
Nach der Identifizierung des vorderen Digastric Muskels und seiner Sehne, passen Sie den Weitlaner Retraktor an, um den Muskelbauch weiter zurückzuziehen. Der exponierte Bereich ist der dreidimensionale Raum, in dem der Hauptstamm des Gesichtsnervs liegt. Sezieren Sie entlang des Nervs in einer unterlegenen Richtung distal vom Ausgang des Stylomastoid Foramen.
Um ein Zerquetschungsmuster zu induzieren, verwenden Sie die Zange des glatten Juweliers, um den Nerv mit konstantem und reproduzierbarem Druck 30 Sekunden lang fest zu erfassen und zu komprimieren, um eine angemessene Zerkleinerungsverletzung zu gewährleisten. Für eine einfache Transektion greifen Sie das unmittelbare Epineurium, das den Nerv mit feinverzahnten Zangen überlagert, und verwenden Sie scharfe Mikroscheren, um den Nerv an der gewünschten Stelle mit einem einzigen Schnitt sauber zu transkribieren. Verwenden Sie für ein Nervenspaltmodell verstellbare Bremssättel, um die gewünschte Nervenspaltlänge festzulegen, um ähnliche Verletzungsmuster zwischen Tieren zu gewährleisten und den Nerv zu transsektieren, wie soeben gezeigt.
Nachdem die experimentelle Verletzung abgegeben wurde, bewässern Sie die Wunde mit steriler Herzwäsche und trocknen Sie das Gewebe mit steriler Gaze. vor dem Schließen des Hautschnitts gemäß den institutionellen Richtlinien. Hier wird eine Live-Bildgebung des Hauptstammes des Gesichtsnervs mit einer Quetschverletzung von etwa zwei bis drei Millimetern distal bis zum Astpunkt der ersten PES bei einer erwachsenen transgenen Thy1-GFP-Ratte gezeigt.
Die Beurteilung der allmählichen Rückkehr der Fluoreszenz nach einer, zwei, drei und vier Wochen nach der Verletzung kann als Marker für die Überwachung der Nervenregeneration bei diesen transgenen Tieren verwendet werden. Histomorphometrische Analysen können verwendet werden, um Querschnittsbilder der marginalen Unterkieferteilung zu erhalten, die eine Quantifizierung des axonalen Durchmessers, der Menge an Schmutz, der Nervenfaser, des Nervenanteils und der Dichtemessungen ermöglichen. Es ist wichtig, die Platzierung des Retraktors bei Bedarf regelmäßig anzupassen, um sicherzustellen, dass die relevanten anatomischen Nerven bei der Identifizierung des Gesichtsnervs sichtbar sind.
Nach diesem Verfahren können die relevanten Nerven und Muskeln für die immunhistochemische Analyse geerntet werden, um den Regenerationsgrad im Vergleich zu anderen experimentellen Gruppen zu beurteilen. Nach seiner Entwicklung hat diese Technik den Weg für Forscher bei der Untersuchung der funktionellen Ergebnisse nach Gesichtsnervenverletzungen geebnet. Insbesondere, wie das Phänomen der Synkinese zu wirken.
