Этот протокол может помочь ученым изучить результаты после травмы лицевого нерва и методы для улучшения регенерации по многим различным параметрам. Основным преимуществом этой техники является то, что анатомия крысы позволяет легко получить доступ к лицевому нерву, и его большой масштаб позволяет нам изучить все соответствующие модели травмы. Применение этого метода распространяется на реабилитацию пациентов после травмы лицевого нерва.
В качестве регенеративного потенциала крыса обеспечивает воспроизводимую и краткую экспериментальную модель. И этот метод может обеспечить понимание хирургической и медицинской терапии для лицевого нерва парез или паралич. И это переводится на другие модели головы и шеи или других периферических нервов.
Работа под микроскопом с помощью обеих рук может быть сложной задачей. Я рекомендую практиковать использование бинокулярной версии под микроскопом, прежде чем пытаться вскрытия лицевого нерва. После подтверждения отсутствия реакции на щепотку ноги, нанесите мазь на глаза крысы и побрить хирургическую область.
Установить метод идентификации крыс и поместить рулон марли под шею. Дезинфицировать открытые кожи с тремя чередующихся хлоргексидина и 70% этанол скрабы и поместить крысу под стерео микроскопом. Манипулируйте ипсилатеральным ухом в передне-заднем направлении, чтобы определить естественную складывание послеоперационной кожи.
Используйте лезвие номер 15, чтобы сделать разрез длиной от двух до трех миллиметров в послеоперационной складке. Планирование и размещение разреза являются наиболее важными шагами для обеспечения надежной идентификации лицевого нерва при минимизации размера раны. Тупо вскрыть через немедленно подкожной фасции и место микро-Weitlaner ретрактор для повышения воздействия тканей.
Определите переднюю digastric мышцу по мере того как она перемещает в более низко-к-превосходном направлении к своей вставке вдоль основания черепа. Распространение мягко через мышечный живот вдоль точки вставки мышцы, чтобы выявить сухожилие передней digastric живота. Сухожилие будет отображаться как фильмивный белый процесс, исходящий из мышцы с твердой вставкой на основание черепа.
После выявления передней дигострической мышцы и сухожилия, отрегулируйте ретрактор Weitlaner для дальнейшего втягивать мышечный живот. Открытой областью является трехмерное пространство, в котором находится основной ствол лицевого нерва. Рассекаете вдоль нерва в низшем направлении distally от выхода стиломастоида foramen.
Чтобы вызвать давку травмы картины, использовать гладкой поверхности forceи ювелира твердо схватить и сжать нерв применения постоянного и воспроизводимого давления в течение 30 секунд, чтобы обеспечить соответствующую травму раздавить. Для простой трансекции, понять немедленное эпиневризии overlying нерва с тонкозубыми типсами, и использовать острые микросциссоры, чтобы чисто трансектировать нерв в нужной точке с одного разреза. Для модели разрыва нерва, используйте регулируемые calipers для того чтобы установить пожеланную длину зазора нерва нерва для того чтобы обеспечить подобные картины ушиба между животными и transect нерв как как раз продемонстрировано.
После того, как экспериментальная травма была доставлена, орошать рану стерильным солевым раствором и высушить ткань стерильной марлей. перед закрытием разреза кожи в соответствии с институциональными руководящими принципами. Здесь показана живая визуализация основного ствола лицевого нерва с травмой раздавить примерно два-три миллиметра дистал к точке ветви первого PES у взрослой трансгенной крысы Thy1-GFP.
Оценка постепенного возвращения флуоресценции в течение одной, двух, трех и четырех недель после травмы может быть использована в качестве маркера для мониторинга регенерации нервов у этих трансгенных животных. Гистоморфометрический анализ может быть использован для получения поперечных изображений маргинального мидибулярного деления, позволяющего количественно оценить аксональный диаметр, количество мусора, нервное волокно, процент нервных и плотность измерений. Важно часто корректировать размещение ретрактора по мере необходимости, чтобы убедиться, что соответствующие анатомические нервы видны при определении лицевого нерва.
После этой процедуры соответствующие нервы и мышцы могут быть собраны для иммуногистохимического анализа для оценки степени регенерации по сравнению с другими экспериментальными группами. После его развития, этот метод проложил путь для исследователей в изучении функциональных результатов после травмы лицевого нерва. В частности, как подать в действие явление синкинеза.
