Questo protocollo può aiutare gli scienziati a studiare i risultati dopo la lesione del nervo facciale e i metodi per migliorare la rigenerazione in molti parametri diversi. Il vantaggio principale di questa tecnica è che l'anatomia del ratto consente un facile accesso al nervo facciale e la sua larga scala ci consente di studiare tutti i modelli di lesioni pertinenti. Le applicazioni di questa tecnica si estendono verso la riabilitazione dei pazienti dopo la lesione del nervo facciale.
Come potenziale rigenerativo il ratto fornisce un modello sperimentale riproducibile e conciso. E questo metodo può fornire informazioni sulle terapie chirurgiche e mediche per la paresi o la paralisi del nervo facciale. Ed è traducibile ad altri modelli di testa e collo o ad altri nervi periferici.
Operare al microscopio usando entrambe le mani può essere impegnativo. Consiglio di esercitarmi usando la versione binoculare al microscopio prima di tentare una dissezione del nervo facciale. Dopo aver confermato una mancanza di risposta al dito del dito, applicare un unguento agli occhi del topo e radere l'area chirurgica.
Stabilire un metodo per l'identificazione del ratto e posizionare un rotolo di garza sotto il collo. Disinfettare la pelle esposta con tre clorexidina alternata e scrub al 70% di etanolo e posizionare il topo al microscopio stereo. Manipolare l'orecchio ipsilaterale in direzione anteriore-posteriore per determinare la piegatura naturale della pelle postauricolare.
Utilizzare una lama numero 15 per fare un'incisione da due a tre millimetri nella piega postauricolare. La pianificazione e il posizionamento dell'incisione sono i passaggi più critici per garantire un'identificazione affidabile del nervo facciale riducendo al minimo le dimensioni della ferita. Sezionare senza mezzi termini attraverso l'immediata fascia sottocutanea e posizionare un retrattore micro-Weitlaner per migliorare l'esposizione dei tessuti.
Identificare il muscolo digastrico anteriore mentre viaggia in una direzione inferiore a superiore verso il suo inserimento lungo la base del cranio. Stendere delicatamente attraverso la pancia muscolare lungo il punto di inserimento muscolare per rivelare il tendine della pancia digastrica anteriore. Il tendine apparirà come un processo bianco filmoso che emana dal muscolo con un solido inserimento sulla base del cranio.
Dopo l'identificazione del muscolo digastrico anteriore e del tendine, regolare il riavvolgitore Weitlaner per ritrarre ulteriormente la pancia muscolare. La regione esposta è lo spazio tridimensionale in cui si trova il tronco principale del nervo facciale. Sezionare lungo il nervo in una direzione inferiore distally dall'uscita del forame stilomastoide.
Per indurre un modello di lesione da schiacciamento, utilizzare le forcep del gioielliere a superficie liscia per afferrare e comprimere saldamente il nervo applicando una pressione costante e riproducibile per 30 secondi per garantire un'adeguata lesione da schiacciamento. Per una semplice trasezione, afferrare l'epineurium immediato sovrascrivere il nervo con forcep a denti fini e utilizzare microscissori affilati per traslizionare cleanmente il nervo nel punto desiderato con un singolo taglio. Per un modello di gap nervoso, utilizzare pinze regolabili per impostare la lunghezza dello spazio nervoso desiderata per garantire modelli di lesioni simili tra gli animali e trasenare il nervo come appena dimostrato.
Dopo che la lesione sperimentale è stata consegnata, irrigare la ferita con soluzione salina sterile e asciugare il tessuto con garza sterile. prima di chiudere l'incisione cutanea secondo le linee guida istituzionali. Qui, viene mostrata l'imaging dal vivo del tronco principale del nervo facciale con una lesione da schiacciamento di circa due o tre millimetri distale al punto di ramo del primo PES in un ratto Transgenico 1-GFP adulto.
La valutazione del ritorno graduale della fluorescenza a una, due, tre e quattro settimane dopo la lesione può essere utilizzata come marcatore per monitorare la rigenerazione nervosa in questi animali transgenici. L'analisi istomorfometrica può essere usata per ottenere immagini della sezione trasversale della divisione mandibolare marginale permettendo la quantificazione del diametro assonale, della quantità di detriti, della fibra nervosa, della percentuale di nervo e delle misurazioni della densità. È importante regolare frequentemente il posizionamento del riavvolgitore in base alle esigenze per garantire che i nervi anatomici pertinenti siano visibili quando si identifica il nervo facciale.
Seguendo questa procedura i nervi e i muscoli rilevanti possono essere raccolti per l'analisi immunoistochimica per valutare il grado di rigenerazione rispetto ad altri gruppi sperimentali. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha spianato la strada ai ricercatori nello studio dei risultati funzionali dopo la lesione del nervo facciale. Nello specifico, come effettuare il fenomeno della sintasi.
