Puede ser difícil transferir e inmovilizar moscas de la fruta. Usando estas técnicas y herramientas, puede facilitar la transferencia rutinaria de moscas y la inmovilización. Los materiales necesarios para fabricar estas herramientas son baratos y fáciles de obtener.
Asesoramiento y enseñanza o laboratorio de investigación puede hacerlos con facilidad. Antes de comenzar este procedimiento, utilice un hierro de sodlering eléctrico para hacer un agujero en los centros de dos tapones de esponja que son más grandes que el diámetro interno de los viales que se utilizarán para transferir las moscas. A continuación, utilice un cuchillo afilado para cortar una punta de micropipeta de un milímetro transversalmente por la mitad y para cortar 1,5 centímetros de la punta de una segunda punta de micropipeta de un milímetro.
Pegue las piezas de las dos puntas de pipeta junto con un adhesivo multiusos. A continuación, inserte la punta de micropipeta alargada en un tapón de esponja e inserte un embudo en el otro tapón de esponja, y tape las puntas de la pipeta con tubos individuales de microcentrífuga de 100 microlitros. Para preparar las agujas de microdisección, seleccione los pasadores de insectos que coincidan con los diámetros de las recargas de plomo de los lápices mecánicos ergonómicos, y utilice un par de alicates para cortar los extremos de un solo ojo de los pasadores.
A continuación, presente los cortes planos y reemplace el plomo de los lápices por los pines modificados. Para preparar una caja de recolección de huevos Drosophila, utilice un cortador de presión para cortar una botella de bebida de plástico suave de 500 mililitros aproximadamente 2/3 por la botella, y use cinta adhesiva para asegurar una tira de papel de tarjeta alrededor de una placa de jugo de manzana de 60 milímetros de diámetro. Para transferir las moscas adultas entre viales, compruebe cuidadosamente el tallo del embudo en el tapón del embudo y la punta de la pipeta en el tapón de la punta.
Puntee hacia abajo las moscas en el primer vial y reemplace el enchufe con un tapón de punta. Enchufe el segundo vial con un tapón de embudo y coloque el primer vial sobre el segundo vial de forma que el extremo de la punta de la pipeta del tapón de la punta se inserte en la abertura del embudo del tapón del embudo. Golpee el borde del primer vial para permitir que las moscas salgan de la punta de la pipeta y a través del tallo del embudo en el segundo vial.
Si algún alimento viejo en el primer vial se vuelve menos compacto y cae cuando se invierte el vial, invierta el segundo vial sobre el primer vial y permita que las moscas se arrastren hacia el segundo vial. Cuando se haya transferido el número deseado de moscas, separe el tapón de la punta del tapón del embudo y reemplace el tapón de la punta por el enchufe original. A continuación, sustituya el tapón del embudo en el segundo vial por un tapón adecuado.
Para la inmovilización de la mosca de la fruta adulta por enfriamiento, coloque una bolsa de hielo refreezable, que se ha enfriado a menos 80 grados Celsius durante al menos 24 horas, a temperatura ambiente, y enfríe un vial vacío en hielo triturado. 20 minutos más tarde, humedezca ligeramente un trozo de gasa médica no aséptica, que es ligeramente más pequeña que la bolsa de hielo refrigerada, con agua corriente. Coloque la gasa sobre la superficie de la bolsa de hielo para que la gasa se aferre estrechamente a la superficie del paquete.
A continuación, utilice un pedazo de papel absorbente para limpiar el agua del vial frío y vacío, y transfiera las moscas adultas que necesitan ser inmovilizadas en el vial. Cuando todas las moscas hayan sido transferidas, cubra el vial refrigerado y golpee el vial contra el hielo triturado de dos a tres veces para golpear todas las moscas en el fondo del vial. Las moscas se inmovilizarán inmediatamente.
Vuelva a colocar el vial sobre hielo durante un minuto antes de verter las moscas sobre la gasa que cubre la bolsa de hielo. A continuación, utilice un pincel para esparcir las moscas superpuestas. Para examinar las moscas inmovilizadas bajo un microscopio estéreo, retire los clips de escenario del microscopio de disección y cubra el escenario con una pieza de película de plástico.
Coloque la bolsa de hielo en el escenario y encienda la fuente de luz fría del microscopio según esté disponible. A continuación, enfoque el microscopio estéreo, y mover la bolsa de hielo hasta que las moscas frías se pueden ver claramente. Después de ver las moscas, transfiera cada mosca, por el ala, a un nuevo vial de cultivo.
Para sacrificar en microondas las moscas adultas para contar, clasificar o desechar, transfiera las moscas adultas de interés a un vial vacío y cubra el vial con una placa Petri. A continuación, invierta el vial dentro de un microondas y caliente el vial a temperatura estándar durante 80 segundos. Las moscas muertas caerán en el plato de Petri.
Usar guantes de trabajo protectores, verter las moscas sobre una tarjeta blanca de papel y transferir la tarjeta bajo un microscopio estéreo para su examen y/o contar con las agujas de microdisección previamente preparadas. Las moscas se pueden desechar al final del examen. Para la transferencia de la jaula de recogida de huevos en forma de botella, inserte la botella de jaula de recolección de huevos modificada en el plato de jugo de manzana.
Utilice una tira de película de parafina para sellar la junta alrededor de los dos componentes. A continuación, enchufe la jaula con un tapón de embudo e invierta el vial de cultivo en el tapón. A continuación, agregue las moscas a la jaula, a través del tapón del embudo, antes de tapar la jaula con el tapón del vial de cultivo.
Para cambiar el alimento, transfiera las moscas a un vial vacío antes de reemplazar el plato de jugo de manzana con un plato nuevo. A continuación, transfiera las moscas del vial de vuelta a la jaula. Al final de la recolección de huevos, transfiera las moscas a un vial vacío antes de transferir las moscas a varios viales de cultivo nuevos.
Usando este método de anestesia enfriada modificado, las moscas se mantienen inmóviles en la bolsa de hielo, y la gasa médica que absorbe el agua condensadora mantiene las moscas secas y permite fenotipado o manipulación de las moscas frías con facilidad. A una temperatura ambiente de 25 grados centígrados, la temperatura de la superficie de una bolsa de hielo duro refrigerada aumenta dramáticamente, de menos 19 grados centígrados a menos dos grados centígrados, en 20 minutos, llegando rápidamente a una meseta que es segura para las moscas viejas y recién rayadas. El calentamiento dieléctrico de microondas es un agente más rápido y conveniente para matar moscas adultas en comparación con el sobre-eterizing o congelación profunda.
Al igual que las moscas sobreterizadas, las moscas microondas extienden sus alas en ángulo recto desde el cuerpo. Generalmente, las canales de mosca muertas por microwaving son significativamente más ligeras en peso que las que mueren por éter o congelación, pero el calor no distorsiona la forma del cuerpo, y las canales no se vuelven crujientes o turgidas. Asegúrese de exprimir la mayor cantidad de agua de la gasa humedecida como sea posible antes de presionarla en la bolsa de hielo, y para asegurarse de que la gasa se adhiere estrechamente a la bolsa de hielo.
También es importante limpiar el agua condensada del vial frío y vacío antes de transferir las moscas al vial.
