Pode ser desafiador transferir e imobilizar moscas frutíferas. Usando essas técnicas e ferramentas, você pode facilitar a transferência e a imobilização de moscas de rotina. Os materiais necessários para fazer essas ferramentas são baratos e fáceis de obter.
O laboratório de consultoria e ensino ou pesquisa pode torná-los com facilidade. Antes de iniciar este procedimento, use um ferro de sodlering elétrico para fazer um furo nos centros de dois plugues de esponja que são maiores do que o diâmetro interno dos frascos que serão usados para transferir as moscas. Em seguida, use uma faca afiada para cortar uma ponta de micropipette de um milímetro transversalmente ao meio e cortar 1,5 centímetros da ponta de uma segunda ponta de micropipette de um milímetro.
Cole as peças das duas pontas de pipeta junto com um adesivo para todos os fins. Em seguida, insira a ponta de micropipette alongada em um plugue de esponja, e insira um funil no outro plugue de esponja, e tampe as pontas da pipeta com tubos individuais de microcentrífa de 100 microliter. Para preparar as agulhas de microdisseção, selecione pinos de inseto que combinem com os diâmetros das recargas de chumbo de lápis mecânicos ergonômicos e use um alicate para cortar as extremidades de um olho só dos pinos.
Em seguida, coloque os cortes plano e substitua o chumbo nos lápis pelos pinos modificados. Para preparar uma caixa de coleta de ovos Drosophila, use um cortador de encaixe para cortar uma garrafa de bebida de plástico macio de 500 mililitros aproximadamente 2/3 abaixo da garrafa, e use fita para fixar uma tira de papel de cartão em torno de uma placa de suco de maçã de 60 milímetros de diâmetro. Para transferir as moscas adultas entre frascos, verifique cuidadosamente a haste do funil na rolha do funil e a ponta da pipeta na rolha de ponta.
Bata nas moscas no primeiro frasco e substitua o plugue por uma rolha de ponta. Conecte o segundo frasco com uma rolha de funil, e coloque o primeiro frasco sobre o segundo frasco de tal forma que a ponta da ponta da pipeta da rolha de ponta seja inserida na abertura do funil da rolha do funil. Bata a borda do primeiro frasco para permitir que as moscas deslizem para fora da ponta pipeta e através da haste do funil para o segundo frasco.
Se qualquer alimento velho no primeiro frasco se tornar menos compacto e cair quando o frasco é invertido, inverta o segundo frasco sobre o primeiro frasco, e permita que as moscas es arrastem até o segundo frasco. Quando o número desejado de moscas tiver sido transferido, separe a rolha de ponta da rolha do funil e substitua a rolha de ponta pelo plugue original. Em seguida, substitua a rolha do funil no segundo frasco por um plugue apropriado.
Para a imobilização da mosca de frutas adultas por frio, coloque uma bolsa de gelo recongelável, que foi resfriada a menos 80 graus Celsius por pelo menos 24 horas, em temperatura ambiente, e esfrie um frasco vazio em gelo esmagado. 20 minutos depois, umedeça ligeiramente um pedaço de gaze médica não asséptica, que é ligeiramente menor do que a bolsa de gelo gelada, com água corrente. Coloque a gaze sobre a superfície da bolsa de gelo para que a gaze se agarre perto da superfície da embalagem.
Em seguida, use um pedaço de papel absorvente para limpar a água do frasco refrigerado e vazio, e transfira as moscas adultas que precisam ser imobilizadas para o frasco. Quando todas as moscas tiverem sido transferidas, cubra o frasco resfriado, e bata o frasco contra o gelo esmagado duas a três vezes para tocar todas as moscas até o fundo do frasco. As moscas se tornarão imediatamente imobilizadas.
Coloque o frasco de volta no gelo por um minuto antes de despejar as moscas na gaze que cobre a bolsa de gelo. Em seguida, use um pincel para espalhar as moscas sobrepostas. Para examinar as moscas imobilizadas sob um microscópio estéreo, remova os clipes de palco do microscópio dissecando e cubra o palco com um pedaço de filme plástico.
Coloque a bolsa de gelo no palco e ligue a fonte de luz fria do microscópio conforme disponível. Em seguida, concentre o microscópio estéreo, e mova a bolsa de gelo até que as moscas geladas possam ser vistas claramente. Depois de ver as moscas, transfira cada mosca, pela asa, para um novo frasco de cultura.
Para sacrificar o micro-ondas, o adulto voa para contar, classificar ou descartar, transferir as moscas adultas de interesse para um frasco vazio, e cobrir o frasco com uma placa de Petri. Em seguida, inverta o frasco dentro de um micro-ondas, e aqueça o frasco em temperatura padrão por 80 segundos. As moscas mortas cairão na placa de Petri.
Usando luvas de trabalho de proteção, despeje as moscas em um branco, cartão de papel, e transfira o cartão sob um microscópio estéreo para exame e/ou contando com as agulhas de microdisseção previamente preparadas. As moscas podem ser descartadas no final do exame. Para a transferência da gaiola de coleta de ovos em forma de garrafa, insira a garrafa de gaiola de coleta de ovos modificadas no prato de suco de maçã.
Use uma tira de filme de parafina para selar a articulação em torno dos dois componentes. Em seguida, tampe a gaiola com uma rolha de funil, e inverta o frasco de cultura na rolha. Em seguida, adicione as moscas à gaiola, através da rolha do funil, antes de conectar a gaiola com a rolha de frasco de cultura.
Para mudar a comida, transfira as moscas para um frasco vazio antes de substituir o prato de suco de maçã por um novo prato. Então transfira as moscas do frasco de volta para a gaiola. No final da coleta de ovos, transfira as moscas para um frasco vazio antes de transferir as moscas para vários frascos de cultura.
Usando este método de anestesia de frio modificado, as moscas são mantidas imóveis na bolsa de gelo, e a gaze médica que absorve a água condensadora mantém as moscas secas e permite fenotismo ou manuseio das moscas geladas com facilidade. A temperatura ambiente de 25 graus Celsius, a temperatura da superfície de uma bolsa de gelo fria e dura aumenta drasticamente, de menos 19 graus Celsius para menos dois graus Celsius, dentro de 20 minutos, atingindo rapidamente um platô que é seguro para moscas velhas e recém-eclodidas. O aquecimento dielétrico de micro-ondas é um agente mais rápido e conveniente para matar moscas adultas em comparação com o excesso de etherização ou congelamento profundo.
Semelhante às moscas superetherizadas, moscas micro-ondas estendem suas asas em ângulos retos do corpo. Geralmente, carcaças de moscas mortas por microwaving são significativamente mais leves em peso do que aquelas mortas por éter ou congelamento, mas o calor não distorce a forma do corpo, e as carcaças não se tornam nítidas ou turvas. Certifique-se de espremer o máximo de água possível da gaze umedeçada antes de pressioná-la sobre a bolsa de gelo, e para ter certeza de que a gaze se agarra perto da bolsa de gelo.
Também é importante limpar a água condensada do frasco refrigerado e vazio antes de transferir moscas para o frasco.
