Это может быть сложной задачей для передачи и обездвижить плодовых мушек. Используя эти методы и инструменты, вы можете сделать рутинную передачу мух и иммобилизацию проще. Материалы, необходимые для производства этих инструментов являются недорогими и легко получить.
Консультационные и учебные или исследовательские лаборатории могут сделать их с легкостью. Перед началом этой процедуры, используйте электрический раздвигающий утюг, чтобы сделать отверстие в центрах двух подключаемых губок, которые больше, чем внутренний диаметр флаконов, которые будут использоваться для передачи мух. Затем используйте острый нож, чтобы разрезать один миллиметр микропипетт кончик поперечно пополам и сократить 1,5 сантиметра от кончика второго одномиллиметрового микропипетта кончика.
Клей кусочки двух наконечников пипетки вместе с цельным клеем. Затем вставьте удлиненный наконечник микропипета в одну губку и вставьте воронку в другую губку, и крышка пипетки советы с отдельными 100-микролитер микроцентрифуг трубки. Для подготовки микродиссекции иглы, выберите насекомых булавки, которые соответствуют диаметрам свинца заправки эргономичных механических карандашей, и использовать пару плоскогубцев, чтобы отрезать одноглазые концы булавки.
Затем файл разрезы плоские, и заменить свинца в карандаши с измененными булавками. Чтобы подготовить drosophila яйцо сбора случае, использовать оснастки резак сократить мягко-пластиковые 500-миллилитровый напиток бутылку примерно 2 / 3 вниз по бутылке, и использовать ленту для обеспечения полоса карточной бумаги вокруг 60-миллиметрового диаметра яблочного сока пластины. Для передачи взрослых мух между флаконами, тщательно проверьте стебель воронки в пробке воронки и кончик пипетки в кончике пробки.
Нажмите вниз мух в первом флаконе, и заменить вилку с наконечником пробки. Подключите второй флакон с пробкой воронки, и поместите первый флакон над вторым флаконом так, что пипетка-наконечник конца кончика пробки вставляется в воронку открытия пробки воронки. Стучите края первого флакона, чтобы мухи выскользнуть из кончика пипетки и через стебель воронки во второй флакон.
Если какая-либо старая пища в первом флаконе становится менее компактной и падает, когда флакон инвертирован, инвертировать второй флакон над первым флаконом, и позволить мухам ползти во второй флакон. Когда нужное количество мух было передано, отделить наконечник пробки от пробки воронки, и заменить наконечник пробки с оригинальной вилкой. Затем замените пробку воронки во втором флаконе соответствующей вилкой.
Для взрослых плодовых мух иммобилизации путем охлаждения, место refreezable пакет со льдом, который был охлажден при температуре минус 80 градусов по Цельсию, по крайней мере 24 часов, при комнатной температуре, и охладить пустой флакон в дробленый лед. Через 20 минут слегка смочите кусок несептической медицинской марли, то есть немного меньше охлажденной ледяной упаковки, с проточной водой. Поместите марлю на поверхность пакета со льдом так, чтобы марля тесно цеплялась за поверхность упаковки.
Затем используйте кусок абсорбющей бумаги, чтобы вытереть воду из охлажденного, пустого флакона, и передать взрослых мух, которые должны быть обездвижены во флакон. Когда все мухи были переданы, покрыть охлажденный флакон, и стучать флакон против дробленого льда два-три раза, чтобы коснуться всех мух на дно флакона. Мухи сразу же станут обездвиженными.
Поместите флакон обратно на лед в течение одной минуты, прежде чем налить мух на марлю, покрывающую пакет со льдом. Затем используйте кисть, чтобы распределить перекрывающихся мух. Для изучения обездвиженых мух под стерео микроскопом снимите сценические зажимы с рассеченного микроскопа и накройте сцену куском пластиковой пленки.
Поместите пакет со льдом на сцену и включите холодный источник света микроскопа по мере его наличия. Затем сосредоточьтесь на стерео микроскопе и переместите пакет со льдом до тех пор, пока не будут хорошо видны охлажденные мухи. После просмотра мух, передать каждую муху, на крыло, в новую культуру флакон.
Для микроволновой жертвы взрослых мух для подсчета, сортировки или отбрасывания, передачи взрослых мух интерес в пустой флакон, и покрыть флакон с чашкой Петри. Затем инвертировать флакон внутри микроволновой печи, и тепло флакон при стандартной температуре в течение 80 секунд. Мертвые мухи упадут в чашку Петри.
Надев защитные рабочие перчатки, вылейте мух на белую бумажную карточку и перенесите карту под стерео микроскоп для обследования и/или подсчета с помощью ранее подготовленных игл микропересмешки. Мухи могут быть отброшены в конце экзамена. Для бутылочной формы клетки сбора яиц передачи, вставьте модифицированные бутылки клетки сбора яиц в тарелку яблочного сока.
Используйте полоску парафиновой пленки, чтобы запечатать соединение вокруг двух компонентов. Далее подключите клетку с пробкой воронки, и инвертировать культуру флакон на пробку. Затем добавьте мух в клетку, через пробку воронки, прежде чем подключить клетку с культурой флакон пробки.
Чтобы изменить пищу, перенесите мух на пустой флакон перед заменой яблочного сока пластины с новой тарелкой. Затем перенесите мух из флакона обратно в клетку. В конце сбора яиц перенесите мух в пустой флакон перед передачей мух в несколько новых культурных флаконов.
Используя этот модифицированный метод обезболивания холода, мухи держатся неподвижными на пакете со льдом, а медицинская марля, которая поглощает конденсирующую воду, удерживает мух сухими и позволяет легко фенотипировать или обрабатывать охлажденных мух. При комнатной температуре 25 градусов по Цельсию температура поверхности охлажденного, жесткого ледяного покрова резко возрастает, от минус 19 градусов по Цельсию до минус двух градусов по Цельсию, в течение 20 минут, быстро достигая плато, безопасного как для старых, так и для новоиспеченных мух. Микроволновое диэлектрикое отопление является более быстрым и удобным агентом для убийства взрослых мух по сравнению с чрезмерной эфиризации или глубокой заморозки.
Подобно чрезмерно эфиризированным мухам, микроволновые мухи расширяют крылья под прямым углом от тела. Как правило, туши мух, убитые микроволновой пролетом, значительно легче по весу, чем те, которые погибают от эфира или замерзания, но жара не искажает форму тела, а туши не становятся хрустящими или тургидными. Не забудьте выжать как можно больше воды из увлажненной марли, как это возможно, прежде чем нажать его на пакет со льдом, и убедитесь, что марля тесно цепляется за пакет со льдом.
Важно также, чтобы вытереть сгущенную воду с охлажденной, пустой флакон, прежде чем передать мух во флакон.
