La administración crónica de isoproterenol a través de una bomba osmótica se ha utilizado ampliamente para recapitular los cambios en la insuficiencia cardíaca avanzada en ratones. Este método es simple y requiere menos experiencia quirúrgica que otros modelos, como LAD y TAC. Demostrando el procedimiento estará el Dr. Vincent Ren, un científico de investigación del laboratorio del Dr.Yibin Wang.
Después de pesar y registrar el peso corporal de cada ratón, calcule la cantidad y concentración apropiadas de isoproterenol para cada animal, y disuelva el isoproterenol en 120 microlitros de cloruro de sodio estéril al 0,9%. Mezclar bien durante un minuto para solubilizar completamente el isoproterenol, y pesar y registrar el peso de una bomba osmótica vacía, junto con y sin su moderador de flujo, por ratón. Coloque un tubo de llenado de calibre 27 y puntas contundentes provisto de las bombas osmóticas y cargue una jeringa de un mililitro con 120 microlitros de la solución isoproterenol por ratón.
Sosteniendo una bomba en posición vertical, inserte el tubo de llenado a través de la abertura de la bomba en la parte superior hasta que la punta del tubo de llenado se sitúe cerca de la parte inferior del depósito de la bomba, y presione lentamente el émbolo de la jeringa hasta que la solución isoproterenol se llene hasta la abertura de la bomba. Cuando la bomba haya sido cargada, retire cuidadosamente el tubo de llenado y limpie el exceso de solución. Inserte hacia atrás el moderador de flujo para cerrar la bomba y limpie cualquier solución sobrante.
A continuación, vuelva a pesar la bomba para confirmar que se ha llenado más del 90% del volumen del depósito. Coloque el ratón en la posición supina sobre una almohadilla calentada y retire el aire de la parte inferior del abdomen. Para la implantación quirúrgica de bombas osmóticas, confirme la falta de respuesta al pellizco del dedo del dedo del dedo en un ratón anestesiado, y aplique ung ón en los ojos del animal.
Limpie la piel expuesta con un desinfectante adecuado y haga una incisión de la piel de una línea media de un centímetro. Usa un par de tijeras de punta contundente para diseccionar cuidadosamente la piel de las paredes peritoneales subyacentes, y usa fórceps para alejar las paredes peritoneales del intestino subyacente. Utilice tijeras finas para cortar un agujero de 0,8 centímetros en la pared peritoneal e inserte el extremo del moderador de flujo de la bomba osmótica primero en la cavidad peritoneal.
Cuando la bomba esté en su lugar, utilice suturas absorbibles 5-0 de forma interrumpida para cerrar el agujero en la pared peritoneal, y utilice suturas no absorbibles 6-0 para cerrar la piel. A continuación, coloque el ratón en una incubadora dedicada con monitoreo hasta la recumbencia completa antes de devolver el animal a su jaula de origen. Aquí, se presenta un resumen de los cambios semanales basados en los parámetros ecocardiográficos seleccionados y el tiempo esperado para el desarrollo del modelo.
Aunque se observan variaciones entre las cepas del ratón, en promedio, el espesor de la pared interventricular del tabique al final de la diásola final y el acortamiento fraccional aumentan en la primera semana, pero disminuyen en puntos de tiempo posteriores. El diámetro interno ventricular izquierdo al final de la diástole y la masa ventricular izquierda aumentan durante un período de tres semanas. Además, los corazones de ratón demuestran dimensiones visiblemente más grandes de la cámara ventricular izquierda bajo isoproterenol, así como mayores cantidades de fibrosis en relación con los controles tratados con solución salina.
Es fundamental mantener un ambiente quirúrgico estéril durante la cirugía de supervivencia para minimizar la infección postoperatoria y la morbilidad. La creación exitosa del modelo se puede evaluar in vivo mediante ecocardiografía serial para hipertrofia, dilatación y disfunción, así como ex vivo a través de la evaluación histológica y molecular del tejido cardíaco cosechado. Hemos aplicado este método a más de 100 cepas de ratones endogámicos para evaluar los rasgos de remodelación cardíaca debido a la estimulación beta-adrenérgica crónica.
Los resultados se publican y están fácilmente disponibles.
