El impacto cortical controlado es fácil de estandarizar entre sujetos y experimentos y permite la aplicación de todo el espectro de lesiones cerebrales traumáticas a regiones definidas con precisión del cerebro. Demostrando este procedimiento está La Meca Islam, un técnico de investigación en mi laboratorio. Esta técnica sigue siendo la forma más consistente y reproducible de inducir lesiones cerebrales traumáticas en roedores.
Antes de comenzar el procedimiento, conecte el dispositivo impactante al cuadro de funcionamiento estereotaxico. Se el dispositivo de accionamiento con los parámetros biomecánicos deseados para la velocidad experimental adecuada y el tiempo de pozo. Ponte nuevo equipo de protección personal y guantes estériles y confirma la falta de respuesta al pellizco del dedo del dedo del ratón experimental anestesiado.
Use pinzas para afeitar el pelaje para el sitio quirúrgico y aplicar ung ón en los ojos del animal. A continuación, coloque el ratón en el quirófano y prepare la piel afeitada con tres exfoliantes quirúrgicos secuenciales a base de yodo y alcohol. Para inducir una lesión cerebral traumática cortical controlada, primero usa un bisturí para hacer una incisión de un centímetro a lo largo de la línea media del cuero cabelludo para exponer el cráneo.
Retirar el cuero cabelludo del sitio operativo e identificar las suturas sagitales y coronal en el cráneo expuesto. Para realizar una craniectomía, equipe un microdrill con una broca de trephine de cinco milímetros para activar el taladro a la máxima velocidad y aplique la broca perpendicular al cráneo dos milímetros a la izquierda de la sutura sagital y dos milímetros rosados a la sutura coronal con una presión uniforme suave. Una ligera da se sentirá cuando el taladro penetra en el cráneo.
Utilice fórceps y una aguja hipodérmica de pequeño calibre para extraer la solapa ósea, exponiendo completamente la duramadre subyacente y gire la punta del impactador en el campo operativo. Asegure los huesos temporales bilaterales entre las barras de oído en miniatura del marco estereotaxico y bloquee los incisivos dentro de la abrazadera incisiva para crear una sujeción estable de tres puntos en la cabeza del ratón. Baje la punta hasta que entre en contacto con la dura mater expuesta.
El sensor de contacto del instrumento hará un tono audible para alertar de que se ha realizado contacto. Retirar la punta impactante desde el punto cero y bajar la posición del impactador en el marco estereotaxico para establecer la profundidad de impacto deseada. A continuación, active el impactador en el dispositivo de accionamiento antes de volver a girar el dispositivo fuera del campo para permitir que el animal sea retirado del marco.
Inmediatamente después de la lesión, aplique la presión directa de un aplicador con punta de algodón estéril en el cráneo y la superficie cortical lesionada para controlar cualquier sangrado y utilice un aplicador fresco para secar el cráneo. Cierre el cuero cabelludo sobre la craniectomía de acuerdo con las técnicas estándar y administre analgesia postoperatoria. A continuación, coloque al animal en la posición de recuperación de los decúbitos laterales en una jaula limpia precalientada con monitoreo hasta la recumbencia completa y mida el peso corporal cada tres días a lo largo del experimento.
La entrega de la lesión como se demuestra resulta en una hemorragia intraparenquimal y subaracnoidea subdural. La evaluación histológica de las secciones del tejido cerebral por lesión cerebral traumática después de una lesión grave revela una pérdida cortical y hipocampal ipsilateral significativa, así como un edema y distorsión contralaterales. Las imágenes por RMN de cerebros gravemente lesionados también demuestran la pérdida progresiva de tejido y el reemplazo por el líquido cefalorraquídeo.
El impacto cortical controlado induce una lesión confiable y consistente que es capaz de producir una amplia gama de lesiones cerebrales clínicamente aplicables. Nuestro método de impacto cortical controlado genera un modelo murino de lesión cerebral traumática grave para el análisis conductual y por imágenes y produce tejido para el análisis molecular y celular.
