L'impatto corticale controllato è facile da standardizzare tra soggetti ed esperimenti e consente l'applicazione dell'intero spettro di lesioni cerebrali traumatiche a regioni del cervello definite con precisione. A dimostrare questa procedura è Mecca Islam, un tecnico di ricerca nel mio laboratorio. Questa tecnica rimane la forma più coerente e riproducibile di indurre lesioni cerebrali traumatiche nei roditori.
Prima di iniziare la procedura, collegare il dispositivo di impatto al telaio operativo stereotassico. Se il dispositivo di azionamento con i parametri biomeccanici desiderati per la velocità sperimentale appropriata e il tempo di pozzo. Indossare nuovi dispositivi di protezione individuale e guanti sterili e confermare la mancanza di risposta al dito del piedi nel mouse sperimentale anestetizzato.
Usa i tosaerba per radere la pelliccia per il sito chirurgico e applicare un unguento agli occhi dell'animale. Quindi posizionare il mouse in sala operatoria e predire la pelle rasata con tre scrub chirurgici sequenziali a base di iodio e alcol. Per indurre una lesione cerebrale corticale controllata, utilizzare prima un bisturi per fare un'incisione di un centimetro lungo la linea mediana del cuoio capelluto per esporre il cranio.
Ritrarre il cuoio capelluto dal sito operativo e identificare le suture sagittali e coronali sul cranio esposto. Per eseguire una craniectomia, equipaggiare un microdrill con una punta di perforazione trephine di cinque millimetri per attivare il trapano alla massima velocità e applicare il bit perpendicolare al cranio due millimetri a sinistra della sutura sagittale e due millimetri rostrali alla sutura coronale con una leggera pressione uniforme. Una leggera doti si sentirà quando il trapano penetra nel cranio.
Utilizzare pini e un piccolo ago ipodermico calibro per rimuovere il lembo osseo, esponendo completamente il dura mater sottostante e ruotando la punta del dispositivo di impatto nel campo operativo. Fissare le ossa temporali bilaterali tra le barre dell'orecchio in miniatura del telaio stereotassico e bloccare gli incisivi all'interno del morsetto incisivo per creare una presa stabile a tre punti sulla testa del mouse. Abbassare la punta fino a quando non viene a contatto con la dura mater esposta.
Il sensore di contatto dello strumento renderà un tono udibile per avvisare che il contatto è stato effettuato. Ritrarre la punta di impatto dal punto zero e abbassare la posizione dell'impatto sul telaio stereotassico per impostare la profondità di impatto desiderata. Quindi attivo il dispositivo di impatto sul dispositivo di azionamento prima di ruotare il dispositivo di nuovo fuori dal campo per consentire all'animale di essere rimosso dal telaio.
Immediatamente dopo la lesione, applicare la pressione diretta di un applicatore sterile con punta di cotone sul cranio e sulla superficie corticale ferita per controllare eventuali emorragie e utilizzare un applicatore fresco per asciugare il cranio. Chiudere il cuoio capelluto sopra la craniectomia secondo le tecniche standard e somministrare analgesia postoperatoria. Quindi posizionare l'animale nella posizione di recupero del decubito laterale in una gabbia pulita pre-riscaldata con monitoraggio fino alla piena recumbency e misurare il peso corporeo ogni tre giorni durante il corso dell'esperimento.
La somministrazione della lesione come dimostrato provoca un'emorragia intraparenchimica e subaracnoidea subdurale. La valutazione istologica delle sezioni del tessuto cerebrale per lesioni cerebrali traumatiche dopo gravi lesioni rivela una significativa perdita corticale e ippocampale ipsilaterale, nonché edema e distorsione contralaterale. L'imaging MR di cervelli gravemente feriti dimostra anche una progressiva perdita di tessuto e la sostituzione con liquido cerebra-spinale.
L'impatto corticale controllato induce una lesione affidabile e coerente in grado di produrre una vasta gamma di lesioni cerebrali clinicamente applicabili. Il nostro metodo di impatto corticale controllato genera un modello murino di grave lesione cerebrale traumatica per l'analisi comportamentale e di imaging e produce tessuti per l'analisi molecolare e cellulare.
