Muestreo y análisis de señales de olor animal

El papel desempeñado por el olor en la comunicación animal está actualmente subestimado y, por lo tanto, poco estudiado. En particular, se sabe muy poco sobre los cambios químicos que sustentan las señales olfativas en animales, incluidos los seres humanos. Y esto se debe también a los desafíos metodológicos, registrando y cuantificando los compuestos químicos de olores utilizados por los animales para comunicarse.

Hay varios desafíos potenciales cuando se trabaja con mezclas químicas altamente complejas y estos incluyen también al tomar muestras y analizar las muestras de olores. Estamos llevando a cabo el análisis de los olores utilizados por los animales con el fin de entender cómo pueden ser utilizados por ellos cuando se comunican entre sí. Combinamos citoquímica con endocrinología bioecología y citología para mejorar nuestra comprensión del papel desempeñado por el olor en la comunicación animal.

Para nuestra metodología actual en Wolverhampton, hemos adoptado la técnica de la microestructura de fase sólida Headspace junto con la espectrometría de masas cromatografía de gases, construida sobre y una metodología invisible de la se utilizan en el pasado. Los olores de muestra se recogen de una de las siguientes maneras. Uno, los olores espontáneamente lanzados de la muestra de temas habituados del estudio.

Por ejemplo, los primates del zoológico recogen las secreciones del olor de la glándula del olor por la marca del olor en el papel de filtro estéril o las muestras de orina directamente en los frascos. Dos, después de entrenar a los sujetos del estudio mediante el uso de refuerzo positivo recoger las secreciones de olor frotando la mirada de olor con hisopos de algodón estériles. Tres, después de la sedación de los sujetos del estudio recoger las secreciones de olor frotando las glándulas olfativas con hisopos de algodón estériles, por muestras en estériles 10 mililitro tornillo tapado, viales de vidrio transparente y sello con tapas rematadas de tornillo que incorporan P T F E sector de silicona.

Guarde inmediatamente los viales a menos 20 grados Centígrados. Tenga en cuenta que es vital que se use equipo de protección personal limpio, como guantes de nitrilo, durante el muestreo. Los guantes de cambio con frecuencia evitan el contacto directo de la piel con muestras y viales.

Se prefiere utilizar viales nuevos. Sin embargo, en el caso de viales usados, es vital pre-limpiar los viales, y luego usar el mismo protocolo. Tome espacios en blanco ambientales cada vez que se recogen marcas de olor.

Haga esto exponiendo un papel de filtro no utilizado o un hisopo de algodón y viales al medio ambiente mientras se realiza el muestreo. Las muestras se preparan en el campo. Para un olor marcado papel de filtro cortar un cuadrado aproximado de 10 milímetros del papel y colocar en un tornillo de 10 mililitros rematado vial de espacio de la cabeza.

Para un hisopo, corte la cabeza del hisopo en el extremo del eje del hisopo y colóquelo en un vial de espacio de la cabeza. Después de que cada muestra haya sido preparada desechar o limpiar la cuchilla de uso para cortar el medio de muestreo, con una toallita antibacteriana adecuada y o alcohol y secar bien. Guarde todas las muestras a menos 20 grados centígrados.

Tenga en cuenta que las muestras deben almacenarse a menos 20 grados centígrados, sin embargo, en el almacén de campo a la temperatura más baja posible y transferirse a menos 20 grados celsius en la primera oportunidad. Antes del análisis, retire las muestras del congelador y permita caminar naturalmente a temperatura ambiente durante al menos una hora. Configure los métodos analíticos en el GCMS de la siguiente manera para las condiciones de análisis de SPMS, siga las instrucciones del fabricante para acondicionar las fibras SBME antes del primer uso.

Es vital que el conjunto SBME esté instalado correctamente en el muestreador automático y que esté alineado con la unidad de acondicionamiento de fibra de las bandejas del muestreador automático y el puerto de entrada GC. La alineación incorrecta podría resultar en daños o destrucción de la fibra Sbme. Asegúrese de que el suministro de gas de la percha a la unidad de acondicionamiento de fibra esté encendido.

Para mejorar la consistencia entre el tiempo de retención de la muestra, el método analítico es el tiempo de retención bloqueado agregar los viales de muestra a la bandeja del muestreador automático colocar un vial de espacio de cabeza vacío para actuar como un sistema en blanco en la primera posición de la bandeja del muestreador automático. Coloque el espacio en blanco ambiental en la segunda posición y, a continuación, coloque todas las muestras restantes para su análisis en las posiciones posteriores de la bandeja del muestreador automático. Cree una secuencia analítica para analizar cada muestra dentro de la bandeja de muestras.

En la pantalla de inicio del cazador de masas, seleccione la secuencia para la barra de menús y, a continuación, cargue la secuencia en el menú desplegable. Se mostrará una tabla de secuencia en blanco para completar la tabla de secuencia para todos los espacios en blanco y muestras insertando la información adecuada guardar como tabla de secuencia completada. Tenga en cuenta que la información exacta de la tabla de secuencia dependerá del formato de los laboratorios de la tabla.

La información mínima normalmente incluiría el nombre de muestra de tipo de muestra, la ubicación del archivo y el método analítico de número y la ubicación del archivo de datos y la asignación de nombre de un nombre de archivo de datos que coincida con el nombre de muestra que se ha actualizado en el procesamiento de datos futuro. Se pueden agregar muestras adicionales a la secuencia durante el análisis. Ejecute la secuencia seleccionando la secuencia en la barra de menús y, a continuación, ejecute la secuencia.

Después del análisis, las muestras se devolvieron al congelador lo antes posible. Tenga en cuenta que puede ser posible volver a analizar las muestras. Pero cabe señalar que algunos componentes volátiles pueden haber sido totalmente extraídos durante el análisis inicial y algunos compuestos pueden haber sufrido descomposición térmica y bacteriana a 40 grados Centígrados.

Por lo tanto, el resultado en cromatograma puede no ser completamente representativo de la marca de olor original. El análisis inicial de datos incluye la integración de cromatogramas para obtener datos de tiempo de retención y área de pico junto con la identificación tentativa de picos utilizando software de estación de leva y bases de datos espectrales de masa de nido. El análisis de datos se puede llevar a cabo manualmente o a través de un método semiautomatizado.

Si se utiliza el método semiautomatizado, a veces es beneficioso realizar un grado de análisis manual de datos para verificar las identificaciones tentativas. Para iniciar el análisis de datos, abra el archivo de datos haciendo clic en el archivo apropiado en la barra de navegación de la izquierda. El cromatograma de iones total TIC se mostrará en la ventana superior de la pantalla de análisis de datos.

Para integrar el TIC utilizando el integrador RTE, primero seleccione el cromatograma en la barra de menús y luego seleccione integrador en el menú desplegable, se abre un cuadro emergente y elija el integrador RTE. Vuelva al menú cromatograma y ahora seleccione integrar. Para ajustar los parámetros de integración de modo que se integren los picos o a más de tres veces el ruido de línea de base, seleccione de nuevo cromatograma en la barra de menús y, a continuación, los parámetros de integración de MS Signal en el menú desplegable.

En el cuadro emergente, ajuste el área de pico mínima según corresponda 1.0 produce resultados aceptables en nuestros ejemplos. Para identificar los picos y generar un informe de resumen, seleccione exportar informes en la barra de menús y, a continuación, library search results report to XLS. Tenga en cuenta que las bibliotecas espectrales que se buscarán junto con el número de coincidencias de biblioteca que se mostrarán deben estar preestablecidas dentro del software antes de que se pueda realizar una búsqueda en la biblioteca.

El informe de hoja de cálculo resultante contiene datos de integración para cada pico y una coincidencia de biblioteca espectral tentativa para asignar la identidad. Normalmente, la calidad de la biblioteca o la coincidencia de la biblioteca debe ser mayor que 80 para aceptar la identificación provisional. Guarde la hoja de cálculo.

Para identificar un pico directamente desde el TIC, elija el pico de interés. Si el pico es pequeño, acerque dibujando un cuadro alrededor del pico, manteniendo presionado el botón izquierdo del mouse, estire el cuadro sobre el pico y suelte el botón del mouse. Coloque la línea del cursor para que esté en el punto más alto del pico o justo después.

Haga doble clic, el botón derecho del ratón y el espectro de masa para el pico aparecerán en la ventana baja de la pantalla de análisis de datos. Para buscar en una biblioteca espectral, mueva el cursor a cualquier lugar de la ventana espectral y haga doble clic en el botón derecho del ratón, los resultados de la búsqueda de la biblioteca aparecerán en una nueva ventana. Para eliminar el ruido de fondo de un espectro de interés primero, haga doble clic en el botón derecho del ratón en el pico en cuestión y luego haga clic en el botón derecho del ratón en un área sin picos inmediatamente delante del pico de interés, haga clic en el botón restar en la cinta de menú o seleccione cromatograma para la barra de menús y luego reste espectros del menú desplegable.

El espectro restado se mostrará en la ventana inferior de la pantalla de análisis de datos y mostrará un guión junto a los datos de escaneo en el encabezado de la ventana. Siguiendo este protocolo, identificamos tentativamente un total de 32 compuestos químicos volátiles del análisis de 14 marcas genitales del olor lanzadas espontáneamente en papel de filtro por los lémures ruffed rojos y comparamos perfiles del olor con las características del signaler naturalmente que ocurren compuestos volátiles tales como hidrocarburos, terpenos, alcoholes del turpin y cetonas estaban presentes dentro de estos perfiles e incluyen los compuestos que habían sido encontrados previamente para actuar como hormonas de sexo y señales a la aptitud en otras especies animales. Los compuestos que se han identificado provisionalmente se enumeran en el cuadro uno.

Los cromatogramas representativos uno de un control y otro de una marca de olor de Lima se muestran en la figura uno. El número y la abundancia relativa de los componentes variaron de una muestra a otra entre los diferentes sujetos del estudio. Sin embargo, seis compuestos etiquetados A a F en el cromatograma estaban presentes en todas las muestras.

Estos compuestos fueron respectivamente curvas a la altura de la isla de E uno hexanal paracrystal seis paramentha dos ocho tinte uno dos pineno cuatro y pentodecano. Los resultados de este estudio sugirieron que los lémures rojos con volantes usan el marcado enviado para transmitir información sobre el sexo y la edad femenina con un marcado sin genitales que juega un papel en la comunicación socio sexual. Otro resultado representativo que seguía el uso de este protocolo era nuestro estudio del anuncio de la fertilidad por los babuinos olivas femeninos.

Identificamos un total de 74 compuestos volátiles del análisis de 395 muestras vaginales del olor del babuino femenino. Estos incluían una gama de compuestos volátiles olorosos naturales como cetonas, alcoholes, aldehídos, terpenos, ácidos grasos volátiles e hidrocarburos. Los cromatogramas típicos que se utilizan para comparar muestras de olor vaginal de troll en blanco y babuino hembra de períodos fértiles y no fértiles se muestran en la figura dos.

Examinamos las relaciones entre los perfiles vaginales del olor y la receptividad sexual de babuinos femeninos. Nuestros resultados mostraron que la cantidad total de olor vaginal difiere con la fertilidad, lo que sugiere que el olor podría desempeñar un papel en la señalización de la fertilidad del babuino femenino. También encontramos diferencias en el olor vaginal entre los tipos de grupo, pero no pudimos distinguir los efectos de la composición del grupo, la impaciencia de la edad femenina.

Son las ventajas combinadas del muestreo y uso del GCMS. Por lo tanto, el uso de la micro extracción de fase sólida del espacio de la cabeza permite analizar una amplia gama de muestras diferentes utilizando GCMS. Podemos separar los componentes de estas marcas complejas y luego identificar cada uno de esos componentes individuales usando el espectrómetro de masas.

Y luego, toda la técnica combinada es muy poderosa y nos da mucha información sobre estas marcas de olor, que en el pasado habría habido mucha extracción de preparación de muestras requerida para poder obtener los resultados.