Un cultivo de explantes de cola 3-D para estudiar la segmentación de vertebrados en el pez cebra

3-D explantes de cola de pez cebra nos permiten explotar la transparencia de los embriones de pez cebra en toda su extensión durante el desarrollo de somita y la segmentación de vertebrados. Llene un tanque de apareamiento vacío con agua del sistema de peces. Limpie el colador con agua del sistema.

Levante las barreras entre las parejas de apareamiento. Mueva selectivamente el par de peces en el tanque de agua dulce. Recoger embriones en el colador a través de transferencias de agua con un tanque vacío.

Enjuague los embriones recogidos con agua del sistema de peces y voltee una placa de Petri. Herramientas de disección etanol-esmalte. Haga dos capas de cintas en diapositivas.

Corte los lados horizontales de las cámaras profundas. Cortes de cámara completos con lados verticales. Retire la cinta de la superficie de la cámara.

Vierta medios de cultivo celular en un tubo. Mezclar cloruro de calcio 2,8 milimolares de concentración final. Añadir solución antibiótica.

Medios de disección alícuota en un tubo separado. Complemente el suero bovino fetal para hacer el medio de cultivo de tejidos. Des-corrinato de embriones con agujas.

Enjuague los embriones en un plato de agua dulce y colótelos para explantarlos. Estabilizar el embrión con aguja y empezar a des-yugo. Recorte los tejidos sobrantes.

Transfiera los explantes al cubrebocas. Aplanar el tejido y chupar el exceso de medios con pipeta. Coloque el cubrebocas en el medio de crecimiento que contiene la cámara deslizante.

Coloque el tejido explantado en una toallita de tejido. Aplicar aceite de inmersión al objetivo. Monte la cámara de portaobjetos en el microscopio.

Ajuste los canales láser para la adquisición de imágenes. Compruebe los límites de la capa z de la muestra. Configuración de imágenes de tiempo y capas z.

El sistema de explante de cola 3-D mantiene intacta la integración celular con el brote de cola y el exceso de elongación como embriones enteros. También es posible detener el exceso de elongación activando químicamente la superficie con colágeno tipo uno. El sistema de explantes de cola de pez cebra 3-D nos permite explotar la transparencia de los embriones de pez cebra al permitirnos tomar imágenes de microscopía de alta resolución y casi objetivas.

Además de eso, nos permite desacoplar el exceso de elongación de la señalización de morfógenos y también controlar las fuentes de señalización de morfógenos con métodos de disección simples.