El objetivo general de este procedimiento es separar las células foliculares y los ocitos en folicular ovárico del pez cebra. El folicular es la unidad básica del ovario, que consiste en los ovocitos y las células foliculares circundantes. Es la herramienta amplia para separar tanto la célula folicular como los compartimentos exteriores para políticas de investigación bien investigadas, incluida la captura primaria de células foliculares y aumentos de la expresión génica, toda la saturación y la fertilización in vitro.
Recientemente, el pez cebra se ha convertido en un potente modelo de Nissan, que estudia un control del ya desarrollo. Aquí, presentamos un método simple, por lo que separa las células foliculares y los ocitos de folicular de pez cebra que facilitará las investigaciones del ya desarrollo en el pez cebra El comercial, ninguna masa o los dos separados sobre las células foliculares y todos los lados de los giros el están utilizando post que tiene un laberinto, lento y tenía un alto daño al exterior. Aquí, hemos establecido un método simple a dos compartimentos separados usando o parcialmente gafas Tamela tasa bajo un arrecife puro.
Nuestro alcance metro, tanto fuera como las células foliculares se pueden fabricar fácilmente escribiendo el capilar de vidrio tirado. En primer lugar, preparar un capilar de vidrio poeta. Golpeó la cabeza del capilar de vidrio en el quemador de alcohol.
Utilice cuatro lados para estirar el capilar de vidrio hasta el diámetro de la tarjeta rave. En segundo lugar, diseccionar que sobresalen de los peces hembra adultos, aislar los folículos ováricos del ovario. Finalmente usa un capilar de vidrio polinizado para separar la célula folicular y el Oocito de los folículos ováricos.
Prepare el capilar de vidrio, un recipiente afilado, un cortador amplio, un quemador de alcohol y un fórceps. Acuéstese el quemador de alcohol, lleve a casa un vaso de capilar y caliente un extremo capilar de vidrio en el fuego del quemador de alcohol. Utilice un fórceps para sostener otro extremo del capilar de vidrio, estresar el capilar de vidrio rápida y suavemente.
Ponga los residuos de vidrio en el recipiente de objetos punzantes. Utilice el amplio cortador Gretch en la piscina con vidrio. A continuación, romper por los fórceps suavemente para hacer una apertura suave de la mirada del puerto quemar rápidamente el extremo del capilar de vidrio en el quemador de alcohol varias veces y frotar el extremo abierto por un amplio cortador cuidadosamente.
Tome cómo la pecera del sistema de agua cultivada. Y ahora las hembras adultas al colocar peces en el agua helada durante al menos dos a cinco minutos hasta que los peces detengan el movimiento de Gill. Saque el pescado de la caja de hielo y retire el cuerpo restante de peces de agua por toalla, coloque un pez en la placa de sección D con cuatro juegos.
Los peces fueron decapitados sirviendo acordes de Spang usando sus tijeras afiladas para asegurar la muerte. Utilice tijeras diseccionantes para cortar de la siguiente manera. Diseccionar desde el corte de Chloe a las branquias a lo largo de la línea media del abdomen, cortado de la orilla de la Chloe, cortado de la punta anterior al lado dorsal.
Retire suavemente la piel y los músculos de un lado del cuerpo, exponga los órganos internos y tome un ovario entero sano con cuatro pasos. Los ovarios fueron colocados suavemente inmediatamente en los 100 milímetros de cultivo, plato contenedor 60%L 50 mediana. Envió un microscopio diseccionador con óptica de luz transmitida basada en el tamaño y la morfología de folículos ováricos de diferentes etapas.
Aísle estos folículos ováricos manualmente usando una cerveza de cuatro juegos. Recoger los folículos ováricos aislados y ponerlos en otro plato cultivado que contiene 60%L 50 medio, folículos ováricos aislados agradables se utilizarán para separar las células foliculares y Oocitos. A continuación, establezca un dispositivo para la separación.
Utilice un tubo de plástico de 30 centímetros. Un extremo está conectado con una punta de pipeta de un mililitro con un elemento de filtro. Otro extremo está conectado con una punta de pipeta de 200 microlitros.
Bajo el microscopio diseccionar, utilice la boca para controlar el flujo de aire para dejar que el defectuoso se mueva a la piscina con capilar de vidrio y luego sople la locura sale del capilar de vidrio. Durante este proceso, las células foliculares y los ocitos de folículos ováricos se pueden separar. Este es un proceso de separación para un folículo escénico maduro.
Durante el proceso de inhalación, la capa celular folicular se separa del Oocito, lo hace después de soplar la célula folicular y se puede separar el Oocito. Este es un folículo de etapa terrestre completa. Podemos ver que la capa folicular de la célula está separada del Oocito.
Este método también se puede aplicar en los folículos ováricos en etapa temprana. Este es un folículo en el escenario medio de Latella Genesis. Este es un folículo en la etapa temprana de vatella Génesis.
Este es un folículo en una etapa pre-vatalla Génesis. Desde esta imagen, puede ver el proceso de separación. El panel uno muestra un folículo intacto en un panel de escenario completamente crecido.
El panel dos muestra la angulación de este folículo en capilar de vidrio tirado. El panel tres muestra que el folicular fue soplado del capilar de vidrio tirado. El panel cuatro indica la separación exitosa F denuded Oocyte y célula folicular.
Incluso este método, separación de células foliculares en Oocito se puede realizar en diferentes folículos escénicos. Investigue si las células foliculares fueron separadas de los folículos intactos. Intacto un folículo y está separado Oocito de diferentes etapas de folículos desde la etapa de BV hasta la etapa FG fueron teñidos con DAPI.
El núcleo de las células foliculares puede ser manchado por DAPI. La señal azul de DAPI se observó en folículos intactos, pero no oocitos denostados en estos folículos de etapa diferente. Para confirmar aún más la clara separación, los folículos intactos y los oocitos separados estaban destripando a las secciones histológicas.
Dapi afirmando resultados mostraron que las células foliculares fueron claramente removidas y denostadas Oocitos. Usando este método, se encontró que los ocitos denostados separados de los folículos escénicos adultos completos se sometieron a la maduración espontánea de Oocitos. sin ningún tratamiento después de cuatro horas de incubación.
Después de la activación por agua, estos ocitos maduros pueden someterse a la expansión completa del coral. Este resultado indica el bajo daño al Oocito utilizando este método. Por lo tanto, esta mostaza se puede utilizar para obtener el oocito denuded para estudiar la ración madura de Oocyte de peces cebra.
La capa folicular de material a folículos se puede eliminar mediante un tubo de vidrio capilar. Estos pueden ser fertilizados y descender a la etapa de eclosión. Los resultados sugieren que este método se puede utilizar para la fertilización in vitro en peces cebra.
Aquí describimos un método novedoso para la separación rápida y fácil de células foliculares y oocitos de folículos ováricos de peces cebra. Este método tiene varias ventajas significativas, metodologías anuladas. La principal de ellas es aumentar en gran medida la facilidad de separación, ya que sólo se requiere una manipulación única y externa.
La mayor facilidad de separación aumenta la disponibilidad de este método a aquellos investigadores no expertos en microdissección. En segundo lugar, este método se puede utilizar para separar la célula folicular y el oocito de folículos ováricos y las etapas tempranas del desarrollo, incluyendo PV, etapa EBV MV, dicha separación no se puede realizar en folículo en etapa temprana utilizando metodologías actuales. En tercer lugar, este nuevo método conduce a menos daño a los omacitos.
Los ocitos denostados separados por este método pueden someterse a la maduración de Oocitos y pueden ser fertilizados. Además, este método también se puede aplicar en otros peces.
