Este modelo de hemorragia subaracnoidea nos ayuda a comprender mejor los mecanismos fisiopatológicos y las consecuencias. Se espera que esto resulte en la generación de terapias, reduciendo la carga de la enfermedad en los pacientes afectados. La principal ventaja de esta técnica es su alta reproducibilidad, ya que se inyecta una cantidad fija de sangre.
Además, se asemeja a una hemorragia subaracnoidea humana en parámetros clave. Para hacer la sonda ICP, queme un extremo de una pieza de 20 milímetros de tubo de polietileno, haciendo una placa circular y manteniendo el lumen abierto. Luego deslice un anillo de tubo de silicona de un milímetro sobre el tubo de polietileno antes de conectar una pieza de tubo de silicona de 10 milímetros al extremo del tubo de polietileno.
Luego, anestesiar, intubar y cateterizar una rata Sprague Dawley antes de colocarla en un marco estereotáxico. Después de la administración de anestesia local, hacer una incisión cutánea de ocho milímetros caudalmente desde la punción con aguja en la línea media. Bajo un microscopio de disección, diseccione todos los músculos sin rodeos en capas para identificar la membrana atlantooccipital.
Luego use el retractor del brazo para restringir la musculatura del cuello, colocando el retractor caudalmente si es necesario. Después de comprobar que la sonda ICP estéril está conectada al transductor ICP, enjuague la sonda ICP con solución salina, asegurándose de que no haya burbujas de aire en la sonda. Con una aguja de calibre 23, incise la membrana atlantooccipital, haciendo un orificio para persuadir suavemente a la sonda ICP a través de la membrana.
Tire de la sonda ligeramente y asegúrese de que muestre una curva pulsante que oscile entre cero y cinco milímetros de mercurio. Si no es así, retire la sonda, vuelva a verificar la conexión al transductor y confirme el flujo a través del lumen. En el área donde la membrana atlantooccipital se envuelve alrededor de la sonda, aplique dos gotas de pegamento de tejido.
Luego, mueva el tubo de silicona de un milímetro hacia adelante hacia la membrana, antes de aplicar pegamento adicional para minimizar el riesgo de desplazamiento de la sonda ICP. Una vez que la sonda ICP esté pegada, retire el retractor. Luego, usando una sutura 4-0 de monofilamento no reabsorbible, coloque una sutura horizontal de colchón en el extremo caudal de la incisión y una sutura interrumpida simple en el extremo cefálico.
Para colocar la sonda láser-doppler, haga una incisión caudal de 15 milímetros en la línea media, comenzando justo antes de los ojos. Después de extraer el tejido conectivo y los músculos con fórceps, use el extremo de un hisopo de algodón estéril como rougine para identificar el bregma y las suturas coronales. Después de colocar el retractor armado, coloque una aguja espinal de calibre 25 en el marco estereotáxico exactamente en el bregma y anote la posición.
A continuación, retire la aguja del bregma. Mueva el marco anteriormente 6,5 milímetros. Luego reemplace la aguja en la línea media para marcar el lado de la perforación.
Perfore hasta que la duramadre se identifique debajo del hueso. Con fórceps rectos, retire suavemente los fragmentos óseos. Luego llene la cavidad con cera ósea.
A continuación, de tres a cuatro milímetros laterales a la derecha de la bregma y justo antes de la sutura coronal para el láser-doppler, perfore otro agujero. Teniendo cuidado de no penetrar la duramadre. Busque los vasos donde el láser-doppler puede medir el flujo sanguíneo.
Coloque el doppler láser y verifique los valores. Se requiere un valor mínimo de 100 unidades de flujo. Si los valores siguen siendo aceptables después de retirar el microscopio, agregue una gota de pegamento para fijar la sonda.
Vuelva a comprobar para confirmar si el valor es superior a 80 unidades de flujo. Para inducir hemorragia subaracnoidea, inserte la aguja suavemente a través del cráneo en la línea media entre los hemisferios hasta que se sienta resistencia debido a la base del cráneo. Retraiga la aguja un milímetro para asegurar la colocación correcta justo antes del quiasma óptico.
Para garantizar el resultado más homogéneo al inyectar la sangre, gire la aguja 90 grados en el sentido de las agujas del reloj, de modo que la punta de la aguja apunte hacia la derecha. Luego retire el estilete. Después de un equilibrio de 15 minutos, ajuste el nivel de anestesia para obtener una presión arterial media en el rango de 80 a 100 milímetros de mercurio.
Luego realice un análisis de gases en sangre para confirmar que el pH, la presión parcial de dióxido de carbono y la presión parcial de oxígeno están dentro de los parámetros fisiológicos. Luego, usando una jeringa de un mililitro con una aguja roma de calibre 23, extraiga 500 microlitros de sangre del catéter de cola. Para evitar la inyección de aire, llene el espacio muerto de la cámara de la aguja espinal con sangre.
Después de ajustar el volumen de sangre en la jeringa a 300 microlitros, conecte la jeringa a la aguja espinal. Luego, agarrando firmemente alrededor de la jeringa, inyecte la sangre manualmente para superar la presión arterial media. Observe un aumento pronunciado en la presión intracerebral y una caída pronunciada concurrente en el flujo sanguíneo cerebral.
30 minutos después de la inducción de la hemorragia subaracnoidea, retire la aguja y la sonda láser-doppler. Y llenar las cavidades con cera ósea. Usando una sutura 4-0 de monofilamento no reabsorbible, cierre la incisión con dos suturas horizontales de colchón.
Para utilizar la sonda ICP para inyecciones en la cisterna magna, retire el tubo de silicona e inserte un adaptador de puerto de pasador en el tubo de polietileno. Para realizar una administración intratecal mientras el animal está despierto, coloque un inyector de puerto de pasador en una jeringa de precisión. Luego administre el tratamiento a través del adaptador del puerto pin.
Si no es necesario realizar administraciones intratecales, cortar la sutura interrumpida simple. Luego, usando tijeras, acorte la sonda ICP tanto como sea posible y pegue el extremo para evitar fugas de líquido cefalorraquídeo. Cerrar la incisión con una sutura 4-0 de monofilamento no absorbible.
En la evaluación de la función motora sensorial gruesa utilizando la prueba del polo giratorio, las ratas con hemorragia subaracnoidea inducida experimentalmente se desempeñaron significativamente peor 24 y 48 horas después de la cirugía en comparación con los animales simulados. La sensibilidad a la endotelina-1, un agonista de la familia de receptores de endotelina-1, aumentó significativamente dos días después de la hemorragia subaracnoidea en las arterias basilar y media del cerebro de las ratas experimentales en comparación con las de los controles simulados. Ambas arterias de las ratas experimentales también mostraron un aumento similar en la sensibilidad a la 5-carboxamidotryptamine, un agonista de la familia de receptores de 5-hidroxitriptamina.
Después del procedimiento, se pueden realizar pruebas neuroconductuales, así como análisis de tejidos, incluida la inmunohistoquímica, la PCR y el analizador Western Blotting, para analizar las consecuencias y los mecanismos.
