Proporcionamos un protocolo para establecer hemorragia masiva del pontine en una rata. Este modelo es fácil de establecer, repetible y altamente exitoso. La inyección destilada del método autólogo de la rata se podía utilizar para hacer hemorragia en regiones unas de los del cerebro.
Las personas que quieran probar estas técnicas deben aprender a usar un marco estereotáxico y estar familiarizadas con la anatomía pontina. Comience colocando una cortina quirúrgica sobre el ratón. Haga una incisión con un bisturí a lo largo de la línea media marcada.
Use un hisopo de algodón para eliminar cualquier sangre potencial. Luego coloque un pedazo de tórceps a cada lado de la solapa del cuero cabelludo para exponer el cráneo. Sumerja un hisopo de algodón en solución salina al 0,9% y retire suavemente los tejidos conectivos del hueso del cráneo.
Utilice un rotulador para marcar el punto central del bregma como punto de origen. Realice una craneotomía usando un micro taladro, procediendo cuidadosamente. Cuando haya terminado, retire el micro taladro del marco estereotáxico.
Coloque una jeringa Hamilton de 100 microlitras en el soporte estereotáxico. Encienda el interruptor de la bomba de inyección. Haga clic en el botón de inhalación rápida.
A continuación, aspirar la solución de heparina a 100 microlitros y drenar por completo. Aplique clorhexidina y exfoliante quirúrgico al 75% de alcohol a todo el cuento desde la raíz hasta la punta al menos tres veces para desinfectar la piel, suavizar la córnea y dilatar la vena de la cola para aumentar la tasa de éxito de la inyección. Conecte una acupuntura del cuero cabelludo a una jeringa de un mililitro, luego inserte la acupuntura del cuero cabelludo en una vena lateral de la cola a tres centímetros de la punta de la cola y tome 150 microlitros de sangre.
Retire la acupuntura del cuero cabelludo de la jeringa de un mililitro y transfiera la sangre a un tubo. Trabajar rápidamente para prevenir la coagulación de la sangre. Cambiar los guantes quirúrgicos.
Seleccione el modo de retirada. Ajuste el volumen a 100 microlitros y establezca la velocidad en 200 microlitros por minuto. Haga clic en el botón de correr y aspire 100 microlitros de sangre en la jeringa hamilton.
Cambie al modo de infusión y establezca la velocidad en un microlitro por minuto. Avance la jeringa hasta que la punta alcance 9,2 milímetros por debajo de la superficie del cerebro e inyecte los primeros 10 microlitros de sangre. Haga clic en el botón ejecutar.
Detenga la inyección y deje la jeringa en su posición durante 20 minutos para evitar que la sangre fluya hacia el espacio subaracnoideo. Retraiga la jeringa hasta que la punta llegue a nueve milímetros por debajo de la superficie del cerebro, luego reinicie la inyección a la misma velocidad de un microlitro por minuto hasta que la sangre residual se haya inyectado por completo. Deje la jeringa en su posición durante 10 minutos para evitar el reflujo de la sangre.
Retire la jeringa del cerebro lentamente. Luego use cemento óseo para cubrir el orificio de la craneotomía. Cuando el cemento se seca sutura la herida con un filamento de sutura de cuatro cero poliamidas.
Después de coser tres o cuatro puntos de sutura atar 2 uno-uno nudos quirúrgicos estándar. Observe a la rata cada 15 minutos hasta que se recupere completamente de la anestesia, luego devuélvala a la jaula original con una almohadilla térmica debajo. Proporcione a la rata acceso gratuito a alimentos y agua.
Un total de 25 animales fueron utilizados para el control 30 microlitro, 60 microlitro, y 100 inyecciones de sangre del microlitro. Las pruebas del comportamiento fueron conducidas en los días uno, tres, siete y 14 después de cirugía. La hemorragia de Pontine causó déficits neurológicos como reflejo córneo disminuido y dar vueltas.
La inyección de 100 microlitros de sangre también indujo el myotonia. La exploración de MRI fue realizada 24 horas después de la cirugía. En los grupos de inyección de sangre, la hemorragia se detectó como un borde hypointense con un ISO a un núcleo ligeramente hiperintenso en la parte de Basiler de los estanques.
El volumen de hemorragia aumentó con el volumen de la inyección. Las ratas fueron sacrificadas en 24 horas y 14 días después de la cirugía. Y se hicieron secciones de dos milímetros de espesor.
La hemorragia fue detectada rodeando el sitio de la inyección y distribuyendo en la base de las charcas. Había un edema leve alrededor de la hemorragia en el grupo de inyección de sangre del microlitro 100. Algunas de las ratas fueron sacrificadas tres días después de la cirugía y las secciones de parafina fueron hechas para ÉL que manchaba.
Los resultados mostraron que en los grupos de inyección de sangre las células inflamatorias enriquecidas en la zona de la hemorragia del para la hemoglobina seguía contenida con los glóbulos rojos intactos. Al intentar este protocolo, asegúrese de recordar la posición de inyección. Este método se puede utilizar para inducir una hemorragia en cualquier región cerebral específica.
