El documento informó la identificación de quimioatrayente de rizobacterias en exudados radiculares utilizando un ensayo de quimiotaxis mejorado. Los accionamientos radiculares de implantes de quimiotaxis son importantes para la colonización de raíces para el crecimiento de las plantas, la promoción de las bacterias rizobias y para proporcionar las facciones útiles de las interacciones planta-microbio. Se utilizaron muchos métodos para analizar la quimiotaxis bacteriana.
Por ejemplo, el método de la placa de natación, el método tipo Cappilary, el dispositivo de deslizamiento microfluídico. El ciclo de experimento del método de la placa de natación fue largo. Se lanzó el error experimental del método tipo Cappilary, el dispositivo de deslizamiento microfluídico es costoso de experimentar.
Establecimos un método sencillo para identificar rápidamente el quimioatrayente que podría inducir el movimiento quimiotáctico de las bacterias promotoras del crecimiento de la rizosfera utilizando portaobjetos de vidrio estériles sin pasos complicados. El método redujo el error del conteo de placas y acortó el ciclo de experimento. Con respecto a la identificación de una sustancia quimioatrayente, el nuevo método podría ahorrar 2-3 días y también reducir el costo de los materiales experimentales.
Distribuir aleatoriamente las semillas de arroz en la cámara de cultivo surge durante una semana y agregar agua estéril dos veces. Seleccione las plántulas de arroz de tamaño similar y plante en un medio líquido de 50 mililitros de Ms. Incubar durante 48 horas a 22 grados centígrados y condiciones sépticas.
Los exudados de raíz de arroz se liberarán en el medio Ms. El análisis de espectrometría de masas por cromatografía líquida se realizó mediante el sistema UHPLC. Prepare la solución acuosa quimioatrayente para asegurarse de que sea estéril.
Filtre la solución quimioatrayente con un filtro de bacterias de 0,22 micrómetros. La solución acuosa quimioatrayente fue la única sustancia obtenida de los estudios LCMS disuelta en agua. Se utilizó la solución de ácido Citrix como ejemplo.
Todas las acciones deben realizarse por el lado de la lámpara. Marque la posición media de la diapositiva de vidrio en un intervalo de 1 centímetro. Asegúrese de que el portaobjetos de vidrio esté esterilizado varias veces en la llama.
En la solución quimioatrayente de 30 microlitros a la izquierda del portaobjetos de vidrio, asegúrese de que las bacterias se cultivaron hasta la etapa logarítmica. Agregue la solución de bacterias de 30 microlitros a la derecha del portaobjetos de vidrio. Esterilizar el bucle de inoculación varias veces en la llama usando el bucle de inoculación para conectar la solución acuosa quimioatrayente a la solución de bacterias y mantenerla a temperatura ambiente durante 20 minutos en un banco limpio.
Después de 20 minutos, desconecte la línea de conexión con papel de filtro. Asegúrese de que el tubo centrifugado de 1,5 mililitros sea estéril. Recoja la solución acuosa quimioatrayente a la izquierda del portaobjetos de vidrio.
Transfiera la solución al tubo centrifugado estéril de 1,5 mililitros. Agregue el volumen apropiado del tinte frontal de la celda al tubo centrifugado. Después de 2 minutos, recoja los líquidos no detectables para el conteo de bacterias y la observación microscópica con una cámara de conteo de sangre.
Determine el número de microorganismos viables atraídos utilizando una ecuación siguiente. Un RCI más alto indica una fuerte reacción al quimioatrayente. Los resultados indicaron que el ácido cítrico y el ácido cafeico tienen los índices de quimiotaxis más altos.
Los nuevos resultados del método de ensayo de quimiotaxis escribieron que la concentración bacteriana de lata de los experimentos de ácido cítrico, ácido cafeico y galactosa fue significativamente mayor que la del grupo de control y el control positivo. El ácido cítrico escribió la quimiotaxis más fuerte. Los resultados experimentales estuvieron de acuerdo con los resultados de los métodos tradicionales.
Este protocolo de video se puede presentar como un recurso valioso para la aclaración de las interacciones planta-microbio.
