Generación de ratas hipoparatiroideas mediante paratiroidectomía asistida por nanopartículas de carbono

El objetivo general de este protocolo es generar un modelo de hipoparatiroidismo adquirido en ratas que sea fácil de establecer, de carácter estable e inofensivo para las glándulas tiroides. La principal ventaja de este modelo es la eliminación precisa de las glándulas paratiroides con la ayuda de nanopartículas de carbono. Esperamos que el modelo pueda ayudar a resolver algunas preguntas en el campo del hipoparatiroidismo.

Por ejemplo, el uso preoperatorio de calcio y vitamina D para reducir el riesgo de hipocalcemia post-tiroidectomía. Este método puede proporcionar información sobre cómo el recambio óseo se ve afectado por los análogos de PTH y cómo los análogos de PTH afectan al cuerpo en el uso a largo plazo. Aquellos que realizan esta técnica por primera vez pueden tener dificultades para micromanipular bajo el microscopio estéreo.

Algo de práctica bajo el microscopio estereoscópico puede ser útil. Para comenzar, coloque la rata anestesiada en posición supina y afeite el pelaje de la región ventral del cuello. Después de hacer una incisión como se describe en el manuscrito, localice los lóbulos de la glándula tiroides.

Usando una jeringa de 10 microlitros equipada con una aguja cónica de calibre 30, inyecte un microlitro de la suspensión de nanopartículas de carbono en la porción mesial de la membrana de la glándula tiroides. Después de cinco minutos, riegue la región con solución salina para limpiar cualquier suspensión adicional. Asegúrese de que las glándulas tiroides se hayan vuelto negras y observe la glándula paratiroides sin teñir.

Corte las glándulas paratiroides sin teñir con un par de pinzas y tijeras de microcirugía, y luego cierre la incisión con una sutura horizontal interrumpida del colchón. Después de la cirugía, coloque las ratas en una manta eléctrica termostática a 37 grados centígrados para mantener su temperatura corporal. Después de siete días, extraiga 10 microlitros de sangre con la vena de la cola.

Mida el calcio sérico, el fósforo inorgánico sérico y la hormona paratiroidea sérica utilizando kits comerciales. Las ratas paratiroidectomía mostraron hipocalcemia e hiperfosfatemia estables durante el período de observación de cuatro semanas. La hormona paratiroidea sérica no se detectó en las ratas paratiroidectomía siete días después de la operación.

La urea sérica y la creatinina fueron comparables entre los grupos de paratiroidectomía simulada y paratiroidectomía después de siete días después de la operación. Se observaron niveles reducidos de iones de calcio urinario y fosfato inorgánico dos semanas después de la operación. No se observaron diferencias significativas en el peso corporal entre los grupos de paratiroidectomía y simulado durante 28 días.

El telopéptido C sérico disminuyó significativamente en ratas paratiroidectomías. No hubo diferencias significativas en los niveles séricos de osteocalcina. Sin embargo, la inyección en suspensión de nanopartículas es lo más importante y una inyección exitosa es fundamental para la identificación y la eliminación actual de las glándulas paratiroides.

Otros métodos incluyen la cirugía guiada por fluorescencia, la inyección de toxina difteriana de ratones transgénicos PTHcre-iDTR y la paratiroidectomía estéril que podría ayudar a responder preguntas en el campo del hipertiroidismo.