Preparo de Amostras para Criotomografia In Situ de Células de Mamíferos

O objetivo desta pesquisa é desenvolver uma metodologia de preparo de amostras que seja acessível e reprodutível de forma confiável. Ao conseguir isso, o poder da tomografia crio-eletrônica celular direta pode ser usado para responder a uma ampla variedade de questões biológicas. Os desafios da preparação do grid são extensos.

As células não se ligam facilmente às grades, e a manipulação pode resultar em danos à camada de carbono, resultando na perda de áreas de grade passíveis de imagem. Além disso, a prevalência de protrusões celulares finas é reduzida sem atenção às condições adequadas de preparo da amostra. Os protocolos atuais normalmente exigem equipamentos especializados para resolver os principais gargalos da semeadura, como micropadrões e suportes impressos em 3D para fixação e manipulação de células, respectivamente.

Esse protocolo fornece soluções com maior acessibilidade, mantendo a flexibilidade para que essas ferramentas especializadas sejam usadas para aplicações downstream.