Para comenzar, transfiera las plantas de papa infectadas con el virus a una cámara de crecimiento mantenida a 22 grados centígrados. Elija una planta para observación y use cinta adhesiva para inmovilizar completamente la segunda hoja inoculada. A continuación, conecte el microscopio digital a la computadora e inicie el software de captura de imágenes.
Coloca la hoja bajo el microscopio. A continuación, utilice el dial para enfocar la superficie de la hoja. Para ajustar la configuración de la cámara, haga clic en el botón de configuración.
Ahora establece el brillo en 64, el contraste en 14 y el tono en cero. A continuación, ajusta el balance de blancos, luego establece la saturación en 47, la nitidez en cero y la gamma en cinco. Haga clic en el icono de captura de imagen y seleccione la opción de video de lapso de tiempo.
A continuación, configure la captura de imágenes cada 15 minutos durante un total de 24 horas. Presione el botón de inicio para comenzar la captura de imágenes. Para guardar las imágenes capturadas, seleccione todas las imágenes y haga clic en el icono Guardar.
Ahora elija las opciones de exportación, luego establezca los puntos por pulgada al máximo. Una vez guardadas, elimine todas las imágenes del programa. Para editar las imágenes, inicie un software de edición como ImageJ.
Haga clic en archivo, luego seleccione importar y elija secuencia de imágenes para importar las secuencias de tiempo de imágenes desde un solo campo de visión. Pegue la ruta del directorio de imágenes guardadas y presione OK. Una vez completada la conversión, ImageJ iniciará automáticamente un reproductor de vídeo interno que mostrará el vídeo terminado.
Haga clic en el archivo, luego guárdelo como y seleccione el formato AVI para exportar el archivo de video. Cuando se abra una pequeña ventana, establezca la velocidad de fotogramas en 0,3 FPS y, a continuación, pulse OK para guardar el vídeo como un archivo AVI. Se utilizaron plantas de papa inoculadas de tres a cuatro semanas de edad con al menos tres o cuatro hojas completamente desarrolladas para el análisis microscópico digital.
La misma área en la hoja inoculada se observó a intervalos de 15 minutos para determinar la ocurrencia de la lesión y su expansión en el tiempo. A las 14 horas de observación, no se apreciaba ninguna lesión. Unos 90 minutos después, se registró una lesión visible.
La lesión comenzó a expandirse dos horas más tarde y continuó expandiéndose durante las siguientes ocho horas y media.
