Para começar, transfira as plantas de batata infectadas pelo vírus para uma câmara de crescimento mantida a 22 graus Celsius. Escolha uma planta para observação e use fita adesiva para imobilizar totalmente a segunda folha inoculada. Em seguida, conecte o microscópio digital ao computador e inicie o software de captura de imagem.
Coloque a folha sob o microscópio. Em seguida, use o mostrador para focar na superfície da folha. Para ajustar as configurações da câmera, clique no botão de configurações.
Agora defina o brilho para 64, o contraste para 14 e a tonalidade para zero. Em seguida, ajuste o balanço de branco e, em seguida, defina a saturação para 47, nitidez para zero e gama para cinco. Clique no ícone de captura de imagem e selecione a opção de vídeo com lapso de tempo.
Em seguida, defina a captura de imagem para cada 15 minutos por um total de 24 horas. Pressione o botão Iniciar para iniciar a captura da imagem. Para salvar as imagens capturadas, selecione todas as imagens e clique no ícone salvar.
Agora escolha as opções de exportação e, em seguida, defina pontos por polegada como máximo. Uma vez salvas, exclua todas as imagens do programa. Para editar as imagens, inicie um software de edição como o ImageJ.
Clique no arquivo, selecione importar e escolha a sequência de imagens para importar as sequências de tempo das imagens de um único campo de visão. Cole o caminho do diretório de imagens salvas e pressione OK. Quando a conversão estiver concluída, o ImageJ iniciará automaticamente um player de vídeo interno exibindo o vídeo concluído.
Clique no arquivo, salve como e selecione o formato AVI para exportar o arquivo de vídeo. Quando uma pequena janela for aberta, defina a taxa de quadros para 0,3 FPS e pressione OK para salvar o vídeo como um arquivo AVI. Plantas de batata inoculadas com pelo menos três a quatro semanas de idade foram usadas para análise microscópica digital.
A mesma área na folha inoculada foi observada em intervalos de 15 minutos para determinar a ocorrência e expansão da lesão ao longo do tempo. Às 14 horas de observação, nenhuma lesão era visível. Cerca de 90 minutos depois, uma lesão visível foi registrada.
A lesão começou a se expandir duas horas depois, e continuou a expansão nas oito horas e meia seguintes.
