まず、ウイルスに感染したジャガイモを摂氏22度に維持された成長チャンバーに移します。観察する植物を選び、粘着テープを使用して2枚目の接種した葉を完全に固定します。次に、デジタルマイクロスコープをコンピューターに接続し、画像キャプチャソフトウェアを起動します。
葉を顕微鏡の下に置きます。次に、ダイヤルを使用して葉の表面に焦点を合わせます。カメラの設定を調整するには、設定ボタンをクリックします。
次に、明るさを 64 に、コントラストを 14 に、色相を 0 に設定します。次に、ホワイトバランスを調整し、彩度を 47 に、シャープネスを 0 に、ガンマを 5 に設定します。画像キャプチャアイコンをクリックして、タイムラプスビデオオプションを選択します。
次に、15分ごとに合計24時間の画像キャプチャを設定します。スタートボタンを押すと、画像キャプチャが始まります。キャプチャした画像を保存するには、すべての画像を選択して保存アイコンをクリックします。
次に、エクスポートオプションを選択し、ドット/インチを最大に設定します。保存したら、プログラムからすべての画像を削除します。画像を編集するには、ImageJなどの編集ソフトウェアを起動します。
ファイルをクリックしてから [インポート] を選択し、[画像シーケンス] を選択して、1 つの視野から画像の時系列をインポートします。保存した画像のディレクトリのパスを貼り付けて、[OK]を押します。変換が完了すると、ImageJ は自動的に内部ビデオプレーヤーを起動し、完成したビデオを表示します。
ファイルをクリックし、名前を付けて保存し、AVI形式を選択してビデオファイルをエクスポートします。小さなウィンドウが開いたら、フレームレートを0.3 FPSに設定し、[OK]を押してビデオをAVIファイルとして保存します。少なくとも3〜4枚の葉が完全に発達した生後3〜4週間の接種済みジャガイモをデジタル顕微鏡分析に使用しました。
接種した葉の同じ領域を15分間隔で観察し、病変の発生と経時的な拡大を決定しました。14時間の観察では、病変は見られませんでした。約90分後、目に見える病変が記録されました。
病変は2時間後に拡大し始め、その後8時間半にわたって拡大を続けた。
