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Un protocole standard est décrit pour étudier l’activité antitumorale et la toxicité associée de l’IL-1α dans un modèle murin syngénique de HNSCC.
La thérapie par cytokines est une stratégie immunothérapeutique prometteuse qui peut produire des réponses immunitaires antitumorales robustes chez les patients cancéreux. La cytokine pro-inflammatoire interleukine-1 alpha (IL-1α) a été évaluée comme agent anticancéreux dans plusieurs études précliniques et cliniques. Cependant, les toxicités limitant la dose, y compris les symptômes pseudo-grippaux et l’hypotension, ont refroidi l’enthousiasme pour cette stratégie thérapeutique. L’administration d’IL-1α à base de nanoparticules de polyanhydride (NP) représenterait une approche efficace dans ce contexte, car elle pourrait permettre une libération lente et contrôlée de l’IL-1α par voie systémique tout en réduisant les effets secondaires toxiques. Ici, une analyse de l’activité antitumorale des NPs polyanhydride chargés en IL-1α dans un modèle murin syngénique de carcinome épidermoïde de la tête et du cou (HNSCC) est décrite. Des cellules épithéliales oropharyngées murines exprimant de manière stable HPV16 E6/E7 ainsi que des cellules hRAS et luciférase (mEERL) ont été injectées par voie sous-cutanée dans le flanc droit de souris C57BL/6J. Une fois que les tumeurs ont atteint 3-4 mm dans n’importe quelle direction, une formulation de 1,5% d’IL-1a - chargée 20:80 1,8-bis(p-carboxyphénoxy)-3,6-dioxaoctane:1,6-bis(p-carboxyphénoxy)hexane (CPTEG: CPH) nanoparticule (IL-1α-NP) a été administrée à des souris par voie intrapéritonéale. La taille de la tumeur et le poids corporel ont été mesurés en continu jusqu’à ce que la taille de la tumeur ou la perte de poids atteigne les critères d’euthanasie. Des échantillons de sang ont été prélevés pour évaluer les réponses immunitaires antitumorales par ponction veineuse sous-maxillaire, et les cytokines inflammatoires ont été mesurées par des tests multiplex de cytokines. Les ganglions lymphatiques tumoraux et inguinaux ont été réséqués et homogénéisés en une suspension unicellulaire pour analyser diverses cellules immunitaires par cytométrie en flux multicolore. Ces méthodes standard permettront aux chercheurs d’étudier la réponse immunitaire antitumorale et le mécanisme potentiel des NP immunostimulantes et d’autres agents d’immunothérapie pour le traitement du cancer.
L’un des domaines émergents de l’immunothérapie du cancer est l’utilisation de cytokines inflammatoires pour activer le système immunitaire des patients contre leurs cellules tumorales. Plusieurs cytokines pro-inflammatoires (c’est-à-dire l’interféron alpha (IFNα), l’interleukine-2 (IL-2) et l’interleukine-1 (IL-1)) peuvent développer une immunité antitumorale significative, ce qui a suscité un intérêt pour l’exploration des propriétés antitumorales ainsi que de la sécurité des médicaments à base de cytokines. L’interleukine-1 alpha (IL-1α) en particulier, est une cytokine pro-inflammatoire connue sous le nom de cytokine maîtresse de l’inflammation1<....
Toutes les procédures in vivo utilisées dans cette étude ont été approuvées par l’Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) de l’Université de l’Iowa.
1. Préparation et maintenance de la lignée cellulaire HNSCC
REMARQUE: Dans cette étude, la lignée cellulaire épithéliale oropharyngée murine transformée de manière stable avec HPV E6 et E7 avec hRas et luciférase (mEERL) sera utilisée. Cette lignée cellulaire a été développée à partir de la souche de souris C57BL/6J et a été offerte par le Dr Paola D. Vermeer (Département de chirurgie, École de médecine Sanford de l’Université du Dakota du Sud, Dak....
Dans cette étude, l’activité antitumorale du polyanhydride IL-1α dans un modèle murin syngénique de HNSCC a été étudiée. L’IL-1α recombinante (rIL-1α) a significativement ralenti la croissance tumorale de mEERL (Figure 1A), bien qu’une perte de poids ait été observée chez les souris traitées, qui a été restaurée après l’arrêt du traitement (Figure 1B). Les IL-1α-NPs n’ont pas induit d’effet antitumoral significatif par rapport au.......
Ce protocole permettra à tout chercheur d’étudier l’activité antitumorale et certains des mécanismes sous-jacents des médicaments immunomodulateurs dans un système modèle murin tumoral in vivo . Ici, un modèle de tumeur sous-cutanée syngénique a été utilisé, qui présente plusieurs avantages par rapport aux modèles orthotopiques, notamment son protocole techniquement simple, une surveillance facile de la croissance tumorale, une morbidité animale moindre et une productivité plus élevée. Les.......
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Ce travail a été soutenu en partie par le Merit Review Award #I01BX004829 des États-Unis (É.-U.) Département des anciens combattants, Service de recherche et de développement en laboratoire biomédical et soutenu par le programme de prix Mezhir par l’intermédiaire du Holden Comprehensive Cancer Center de l’Université de l’Iowa.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Bio-Plex 200 Systems | Bio-Rad | The system was provided from the Flow Cytometry Facility University of IOWA Health Care | |
Bio-Plex Pro Mouse Cytokine 23-plex Assay | Bio-Rad | M60009RDPD | |
C57BL/6J Mice | Jakson Labs | 664 | 4 to 6 weeks old |
DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) | Thermo Fisher Scientific | 11965092 | |
DMEM/Hams F12 (Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12) | Thermo Fisher Scientific | 11320033 | |
EGF | Millipore Sigma | SRP3196-500UG | |
Fetal Bovine Serum | Millipore Sigma | 12103C-500ML | |
Gentamycin sulfate solution | IBI Scientific | IB02030 | |
gentleMACS Dissociator | Miltenyi biotec | ||
Hand-Held Magnetic Plate Washer | Thermo Fisher Scientific | EPX-55555-000 | |
Hydrocortisone | Millipore Sigma | H6909-10ML | |
Insulin | Millipore Sigma | I0516-5ML | |
Ketamine/xylazine | Injectable anesthesia | ||
MEERL cell line | Murine oropharyngeal epithelial cells stably expressing HPV16 E6/E7 together with hRAS and luciferase (mEERL) cells | ||
Portable Balances | Ohaus | ||
Scienceware Digi-Max slide caliper | Millipore Sigma | Z503576-1EA | |
Sterile alcohol prep pad (70% isopropyl alcohol) | Cardinal | COV5110.PMP | |
Transferrin Human | Millipore Sigma | T8158-100MG | |
Tri-iodothyronin | Millipore Sigma | T5516-1MG |
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