Source : Laboratoire du Dr B. Jill Venton - University of Virginia

Spectroscopie ultraviolet-visible (UV-Vis) est une des techniques analytiques plus populaires, car il est très polyvalent et capable de détecter presque chaque molécule. Avec la spectroscopie UV-Vis, la lumière UV-Vis est passée à travers un échantillon et la transmission de la lumière par un échantillon est mesurée. De la transmission (T), l’absorption peut être calculée comme une =-log (T). Un spectre d’absorbance qui montre l’absorbance d’un composé à différentes longueurs d’onde est obtenu. Le montant de l’absorbance à une longueur d’onde est due à la structure chimique de la molécule.

UV-visible peut être utilisé de manière qualitative, pour identifier les groupes fonctionnels ou de confirmer l’identité d’un composé en comparant le spectre d’absorbance. Il peut également être utilisé de manière quantitative, comme concentration de l’analyte est liée à l’absorption à l’aide de la Loi de Beer. Spectroscopie ultraviolet-visible est utilisée pour quantifier la quantité d’ADN ou de protéines dans un échantillon pour analyse de l’eau et comme un détecteur pour de nombreux types de chromatographie. Cinétique des réactions chimiques sont également mesurée par spectroscopie UV-visible en prenant des mesures répétées de l’UV-visible au fil du temps. UV-Vis sont généralement pris avec un spectrophotomètre. UV-Vis est également un détecteur très populaire pour les autres techniques d’analyse, comme la chromatographie, parce qu’il peut détecter de nombreux composés.

En général, UV-Vis n’est pas la technique de spectroscopie plus sensible, car pas beaucoup de lumière est absorbée sur une longueur de chemin d’accès court. Autres techniques de spectroscopie comme la fluorescence ont une sensibilité plus élevée, mais ils ne sont pas généralement applicables, comme la plupart des molécules ne sont pas fluorescentes. UV-Vis a une sensibilité similaire aux autres mesures d’absorbance, telles que la spectroscopie infrarouge.

1. calibrer le spectromètre

1. Allumez le spectromètre UV-Vis et laisser les feux pour se réchauffer pendant une période appropriée de temps (environ 20 min) pour stabiliser.
2. Remplir une cuvette avec le solvant pour l’échantillon et assurez-vous que l’extérieur est propre. Ceci servira comme blanc et aider à tenir compte de légères pertes en raison de la diffusion ou absorption par le solvant.
3. Placez la cuve dans le spectromètre. Veillez à aligner la cuve correctement, car souvent la cuvette

UV-visible peut être utilisé pour obtenir un éventail de composés colorés. Dans la Figure 1 a, le spectre d’absorption d’un colorant bleu apparaît. L’arrière-plan montre les couleurs de la lumière dans le spectre visible. Le colorant bleu a une absorption_maximum de λ dans l’orange/rouge. Figure 1 b montre un spectre d’un colorant rouge, avec λ_max dans le vert.

Cinétique mesurable d’u...

UV-Vis est utilisé dans de nombreuses analyses chimiques. Il est utilisé pour doser la quantité de protéines dans une solution, comme la plupart des protéines absorbent fortement à 280 nm. La figure 3 illustre un exemple de spectres du cytochrome C, qui a une forte absorbance à 280 et également à 450 en raison d’un hème du groupe. UV-Vis est également utilisé comme une technique standard pour quantifier la quantité d’ADN dans un échantillon, car toutes les bases absorbent fortement à 2...