1. rendre les normes : des Dilutions successives

1. Faire une solution concentrée de la norme. En règle générale, le composé est exactement pesé et muté quantitativement dans une fiole jaugée. Ajouter certains solvants, mélanger afin que l’échantillon se dissout, puis remplissez la ligne avec le solvant approprié.
2. Effectuer des dilutions successives. Prendre une autre fiole jaugée et déposer la quantité d’étalon pour la dilution, puis remplir la ligne avec solvant et mélanger. Une dilution dix fois est généralement faite, donc, pour une fiole jaugée de 10 mL, ajouter 1 mL de la dilution antérieure.
3. Continuer selon les besoins pour des dilutions plus, pipetage de l’ancienne solution à diluer pour faire l’échantillon suivant. Pour une courbe d’étalonnage bon, au moins 5 concentrations sont nécessaires.

2. exécuter les exemples de la courbe d’étalonnage et de l’inconnu

1. Exécuter les exemples avec le spectrophotomètre UV-Vis pour déterminer la réponse instrumentale pour la courbe d’étalonnage.
2. Effectuer la lecture avec le premier échantillon. C’est une bonne idée d’exécuter les exemples dans un ordre aléatoire (c'est-à-dire pas plus élevé au plus faible ou plus bas au plus élevé) dans le cas où il y a des erreurs systématiques. Pour obtenir une estimation du bruit, répéter la lecture sur n’importe quel échantillon donné 3 – 5 x.
3. Exécuter les exemples standards supplémentaires, en répétant les mesures pour chaque échantillon obtenir une estimation du bruit. Enregistrer les données pour créer un terrain plus tard.
4. Exécutez des échantillons inconnus. Utiliser dans des conditions similaires pour les normes en cours d’exécution possible. Ainsi, la matrice de l’échantillon ou le tampon doit être la même, le pH devrait être le même, et la concentration doit être dans la gamme des normes exécutée.

3. rendre la courbe d’étalonnage

1. Enregistrer les données dans une feuille de calcul et utiliser un programme d’ordinateur pour tracer la concentration de vs de données. Si au moins trois mesures ont été prises pour chaque point, les barres d’erreur peuvent être tracées de l’écart de ces mesures à l’estimation de l’erreur de chaque point. Pour quelques courbes, les données devrez peut-être être tracées avec un axe sous un log pour obtenir une ligne. L’équation qui régit la courbe d’étalonnage est généralement connue d’avance, donc un journal-terrain est utilisé lorsqu’il y a un journal dans l’équation.
2. Examiner la courbe d’étalonnage. Est-il linéaire ? A-t-il une partie qui ressemble non linéaire (c'est-à-dire atteint la limite de la réponse instrumentale) ? Pour vérifier, monter toutes les données à une régression linéaire en utilisant le logiciel. Si le coefficient de détermination (R²) n’est pas élevé, supprimer certains points au début ou à la fin de la courbe qui ne semblent pas s’adapter à la ligne et d’effectuer la régression linéaire à nouveau. Il n’est pas acceptable d’enlever des points au milieu juste parce qu’ils ont un bar faute grossière. De cette analyse, décidez quelle portion de la courbe est linéaire.
3. La sortie de la linéaire doit être une équation du format y = mx + b, où m est la pente et b l’ordonnée à l’origine. Les unités pour la pente sont l’unité de l’axe y/concentration, dans cet exemple (Figure 1) absorbance/μM. Les unités pour l’ordonnée à l’origine sont les unités de l’axe des ordonnées. On obtient un coefficient de détermination (R²). Plus le R² plus l’ajustement ; un ajustement parfait donne un R² de 1. Le programme peut également être en mesure de donner une estimation de l’erreur sur la pente et l’ordonnée à l’origine.

4. résultats : Courbe d’étalonnage de l’Absorbance du colorant bleu #1

1. La courbe d’étalonnage de l’absorbance du colorant bleu #1 (à 631 nm) est indiqué ci-dessous (Figure 1). La réponse est linéaire de 0 à 10 µM. ci-dessus que concentration le signal commence à niveau car la réponse est hors de la gamme linéaire du spectrophotomètre UV-Vis.
2. Calculer la limite de détection. De la pente de la courbe d’étalonnage, la limite de détection est 3*S.D. (bruit) / m. Pour cette courbe d’étalonnage, le bruit a été obtenu en prenant une déviation standard de mesures répétées et était 0,021. La limite de détection serait 3*0.021/.109=0.58 µM.
3. Calculer le ndd. La LDD est 10*S.D. (bruit) / m. Pour cette courbe d’étalonnage, NdD est 10*0.021/.109 = 1,93 µM.
4. Calculer la concentration de l’inconnu. L’équation de la ligne permet de calculer la concentration de l’échantillon inconnu. La courbe d’étalonnage est uniquement valide si l’inconnu se trouve dans la fourchette linéaire des échantillons standards. Si les lectures sont trop élevés, la dilution peut être nécessaire. Dans cet exemple, la boisson pour sportifs inconnu a été dilué 1:1. L’absorbance a été 0,243 et cela correspond à une concentration de 2,02 µM. Ainsi la concentration finale de colorant bleu #1 dans les dans les sports boisson était 4,04 µM.

Figure 1. Courbes d’étalonnage de l’absorbance UV-Vis du colorant bleu. Gauche : l’absorbance est mesurée de différentes concentrations de colorant bleu #1. Les réponses se stabiliser après 10 µM, lorsque l’absorption est supérieure à 1. Les barres d’erreur sont des mesures répétées du même échantillon et écarts-types. Droit : La partie linéaire de la courbe d’étalonnage est dotée d’une ligne, y = 0,109 * x + 0,0286. Les données inconnues sont affichées en noir. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.