Source : Laboratoire du Dr B. Jill Venton - University of Virginia

Chromatographie d’échange ionique est un type de chromatographie qui sépare les analytes issu des frais. Une colonne est utilisée qui est remplie d’une phase stationnaire chargée sur un support solide, appelé une résine échangeuse d’ions. Chromatographie échangeuse de cations forts sépare préférentiellement les cations en utilisant une résine chargée négativement, tandis que la chromatographie échangeuse d’anions forts choisit préférentiellement des anions à l’aide d’une résine chargée positivement. Ce type de chromatographie est apprécié pour la préparation de l’échantillon, par exemple dans le nettoyage des protéines ou des acides nucléiques des échantillons.

Chromatographie d’échange ionique est un processus en deux étapes. Dans un premier temps, l’échantillon est chargé sur la colonne dans un tampon de charge. La liaison de l’échantillon chargée à la résine de colonne est basée sur des interactions ioniques de la résine pour attirer l’échantillon de charge opposée. Ainsi, les échantillons chargés de polarité opposée à la résine sont fortement liés. Autres molécules qui ne payent pas ou sont de charge opposée ne sont pas liés et sont lavés par le biais de la colonne. La deuxième étape consiste à éluer l’analyte qui est lié à la résine. Ceci est accompli avec un gradient de sel, où la quantité de sel dans la mémoire tampon est lentement augmentée. Fractions sont encaissées à la fin de la colonne que l’élution se produit et l’échantillon purifié d’intérêt peut être récupéré dans l’une de ces fractions. Une autre technique, telles que la spectroscopie, peut être nécessaire d’identifier quelle fraction contient l’échantillon. Chromatographie d’échange ionique est particulièrement utile dans les études de protéine, d’isoler les protéines d’intérêt qui ont une charge spécifique ou la taille, car la taille permet de déterminer le nombre d’interactions avec la résine.

Chromatographie d’échange ionique est une technique de séparation plus générale que la chromatographie d’affinité, qui est aussi souvent utilisée dans la préparation des échantillons de protéine, où un anticorps est liée à une colonne pour lier un analyte spécifique. Une nouvelle colonne d’affinité doit être achetée pour chaque analyte, tandis que le même type de colonne échangeuse d’ions, souvent atteints de différents troubles élution, peut servir à nettoyer les nombreuses protéines ayant la même charge. Chromatographie échangeuse d’ions peut également servir en conjonction avec d’autres types de chromatographie qui séparent basé sur d’autres propriétés. Par exemple, chromatographie d’exclusion stérique se sépare selon la taille et pourrait être utilisée avant la chromatographie échangeuse d’ions pour choisir composés de seulement une taille donnée.

1. préparation de l’échantillon et la colonne

1. Dans cette démonstration, un mélange de 2 protéines est séparé sur une colonne échangeuse de cations : hémoglobine et le cytochrome C. Ajouter 0,2 mL équilibration tampon (pH 8,1) dans l’échantillon de la protéine et les vortex pour bien mélanger. Centrifuger pendant 2 min enlever toute la mousse.
2. Placer la colonne échangeuse de cations dans un tube à essai pendant 5 min permettre à la résine pour s’installer. Fixer le tube à essai avec la colonne sur un

Chromatographie d’échange ionique est largement utilisée en biochimie pour isoler et purifier les échantillons de protéines. Les protéines ont plusieurs acides aminés avec groupes fonctionnels qui sont facturés. Les protéines sont séparées basé sur la charge nette, qui dépend de la pH. Certaines protéines sont facturés plus positivement tandis que d’autres portent une charge plus négative. En outre, balises de peptide peuvent être génétiquement ajoutés à une protéine pour lui donner un point iso?...