Ce travail a été soutenu par une Percées Glenn / Afar en gérontologie et le Prix des subventions du NIH 1R01AG031108-01 à MKGS est soutenu par le NIH bourse de formation P30AG013280. MK est une Ellison Medical Foundation New Scholar liés au vieillissement.

Partie 1: Préparer la croissance des médias nématodes (NGM) plaques Cette section décrit la préparation des plaques NGM solide pour une utilisation dans l&#39;expérience la durée de vie. Une expérience de vie de base durée nécessite deux types de plaques: les plaques NGM standard, qui ne contiennent pas d&#39;additifs, et Amp / FUDR plaques, qui ont à la fois à l&#39;ampicilline (Amp) et fluorodésoxyuridine (FUDR) ajouté à l&#39;assemblée générale nationale. L&#39;ampicilline est utilisée pour prévenir la contamination bactérienne étrangers. FUDR inhibe la division cellulaire, réduit la production d&#39;œufs, et empêche les oeufs d&#39;éclore. L&#39;utilisation de FUDR pour l&#39;analyse de longévité n&#39;affecte pas la durée de vie adulte et élimine la nécessité de transférer les vers tous les quelques jours afin de les séparer de la larve en croissance. Les deux types de plaques sont ensemencés avec E. coli OP50 bactéries, qui est ensuite tué par l&#39;exposition aux UV. <ol><li> Préparer NGM (voir section 5 pour la recette et les notes de stockage) et des boîtes de Pétri étiquette. Vous aurez besoin d&#39;une plaque de Pétri de 60 mm par 10 mL d&#39;NGM. Si vous commencez avec le NGM solide préalablement préparées, passez à l&#39;étape 1.2. Si vous commencez avec le NGM fraîchement autoclavés, passez à l&#39;étape 1.4. </li><li> Fondre complètement NGM solide en micro-ondes sur le haut dans 30 secondes impulsions. Swirl média entre les impulsions pour éviter les bulles de gaz sous pression de s&#39;accumuler. </li><li> NGM Placez liquide dans 55 ° C ou bain d&#39;eau sur le banc pour refroidir. </li><li> Une fois atteint NGM 55 ° C ajouter 33 ul de 150 mM FUDR et 100 pi de 100 mg / ml d&#39;ampicilline par 100 mL NGM (pour Amp / FUDR plaques) et agiter pour mélanger. Pour les plaques NGM sans médicaments supplémentaires procéder directement à l&#39;étape 1.5. </li><li> En utilisant une technique stérile, une pipette 10 ml NGM dans chaque assiette de 60 mm de Pétri. Eviter la formation de bulles si possible. Si des bulles se forment, ils peuvent être sauté à l&#39;aide d&#39;une pipette. </li><li> Laisser les plaques sur le banc avec des couvercles sur NGM pour permettre de solidifier et sécher. Si possible, laissez les plaques sur le banc pour 2 jours avant d&#39;ajouter les bactéries, mais un jour ne fonctionnera que si les plaques sont nécessaires plus tôt. </li><li> Le jour avant que les plaques terminer le séchage, la culture LB semences liquide avec une seule colonie d&#39;une strie frais de E. coli OP50 bactéries sur une gélose LB. Vous devez préparer au moins 1 mL d&#39;une nuit OP50 culture par 60 plaques mm. </li><li> Placer OP50 culture à 37 ° C shaker et permettent aux bactéries de croître durant la nuit (la culture doit atteindre la saturation). </li><li> Pellet OP50 bactéries par centrifugation à 3500 g pendant 10 minutes. </li><li> Retirer 90% des bactéries surnageant et remettre à concentrer la culture 10x. </li><li> Pipeter 100 uL de 10x concentrée OP50 la culture dans le centre des assiettes NGM solidifié. Agiter doucement les plaques pour étaler la culture de bactéries, si nécessaire (idéalement bactéries devraient couvrir la zone centrale de la NGM sans venir près des murs plaque). Essayez d&#39;éviter de toucher la pointe de la pipette sur la surface de l&#39;assemblée générale nationale, comme des défauts dans la surface du média permettent les vers s&#39;enfouissent dans le NGM. </li><li> Laisser les plaques sur le banc durant la nuit pour permettre la culture des bactéries à sécher sur la NGM solides (prend environ 24 heures). </li><li> Une fois sec, exposer la surface des plaques à une dose d&#39;UV suffisante pour arrêter la croissance de la bactérie. Si vous utilisez un Stratalinker UV Stratagene 2400: <ul><li> Plaques place dans le Stratalinker et enlever les couvercles </li><li> Fermez la porte et tournez sur la Stratalinker </li><li> Appuyez sur «l&#39;énergie» </li><li> Entrez &#39;9999 &#39;aide du clavier </li><li> Appuyez sur &#39;Démarrer&#39; </li><li> Les plaques seront exposées aux UV pendant environ 5 minutes </li></ul></li><li> Plaques avec des bactéries tuées UV peuvent être stockés à l&#39;envers à 4 ° C pour un maximum de 1 mois. </li></ol> Partie 2: Effectuer un oeuf chronométré prévoyant d&#39;acquérir un âge synchronisé population d&#39;animaux Dans cette section, nous générons une population de vers de terre avec une trappe à jour commun. Ceci est accompli en permettant aux adultes reproducteurs actifs pour pondre leurs œufs sur un plateau pour une période de temps définie et permettant ces oeufs à se développer. <ol><li> (Facultatif) Le transfert d&#39;environ 20 vers adultes jeunes à une plaque de NGM frais sans FUDR. Laisser les plaques à 25 ° C afin de permettre à des vers pour se propager et à manger dans toute la nourriture bactérienne. Après la nourriture bactérienne a été consommé vers nouvellement éclos entrera dans le stade de croissance arrêtée Dauer. Vous allez commencer à voir la larve dauer autour d&#39;ici une semaine, selon le nombre de vers de vous transférer à la plaque de départ. Dauer larve peut être utilisé pour les prochaines étapes pour un maximum de 1 mois. </li><li> (Facultatif) larve dauer transfert 20 à 30 à une plaque NGM frais sans FUDR. En présence de nourriture dauer larves deviendront des adultes reproducteurs actifs dans les 2 jours et restent reproducteurs actifs pendant quelques jours puis à 25 ° C. </li><li> Transfert de 10 à 15 adultes reproducteurs actifs à une plaque de NGM frais sans FUDR. Cette plaque est appelée la ponte chronométrés (TEL) la plaque. </li><li> Laisser la plaque TEL à 25 ° C pendant 6 heures afin de permettre à til temps de vers de terre pour pondre leurs œufs. </li><li> Retirer de la plaque vers adultes TEL. Plaque peut être inspecté visuellement pour les oeufs avant de retirer les adultes. Si les vers n&#39;ont pas mis un nombre suffisant d&#39;oeufs de la plaque TEL peut être laissé à 25 ° C jusqu&#39;à un total de 24 heures avant d&#39;enlever les vers adultes. </li><li> Placer la plaque TEL à 20 ° C jusqu&#39;à ce que les oeufs ont éclos et les vers ont développé jusqu&#39;au stade L4 larvaire (ce qui prend généralement deux jours pour les sauvages de type C. elegans, mais peut prendre plus de temps pour les souches de phénotypes de développement lent). </li></ol> Partie 3: Les animaux score pour la durée de vie Dans cette section, nous suivons l&#39;âge synchronisée de la population de vers de la partie 2 jusqu&#39;à ce qu&#39;ils meurent. Worms sont maintenus sur Amp / FUDR plaques pour empêcher la production d&#39;œufs et de la contamination bactérienne et sont considérés comme morts quand ils échouent à répondre aux stimuli externes. <ol><li> Transfert L4 larve à ensemencé Amp / FUDR plaques. Pour chaque souche ou la condition d&#39;être testé, il est typique de mettre en place les plaques 2-3 avec 25-30 vers par assiette. Images du C. étapes de la vie elegans sont fournis à titre de référence (figure 1) 1. </li><li> Placez Amp / FUDR plaques à 20 ° C pendant 24 heures. </li><li> Après 24 heures, évaluer visuellement les vers, les médias, et les bactéries. Transfert vers de nouvelles Amp / FUDR plaques si l&#39;un des suivants est observé: <ul><li> Worms ont mangé la plupart de la nourriture bactérienne. Tôt dans la vie des vers de l&#39;expérience durée devront être transférés 1 à 2 fois par semaine pour empêcher les bactéries d&#39;être épuisées. </li><li> Un nombre important de larves sont présentes. C&#39;est habituellement un signe que les vers ont été transférés aux plaques Amp / FUDR que les jeunes adultes au lieu d&#39;L4S et ont pu poser quelques oeufs avant la FUDR a pris effet. Le FUDR sera généralement d&#39;éviter les larves de devenir des adultes pleinement, mais parfois un peu de devenir des adultes et de se confondre avec les animaux de laboratoire. </li><li> Des bactéries vivantes / de croissance sont observés. Généralement, la combinaison de l&#39;AMP et UV-tuant s&#39;assurera qu&#39;aucun des bactéries vivantes contaminent l&#39;expérience, mais parfois il se produit. </li><li> La croissance des champignons est observée sur les médias. Si dépisté assez tôt, la croissance des champignons peuvent généralement être coupés à l&#39;aide d&#39;une pipette ou une spatule. Une fois qu&#39;il pousse à être plus grand que quelques millimètres de diamètre, il est généralement plus facile de transférer les vers de terre pour une nouvelle plaque. </li><li> Utilisation du champ de dissection, de déterminer si chaque ver est vivant ou mort. </li><li> Tapoter doucement la plaque. Le ver est vivante si elle se déplace en réponse à la mise sur écoute. </li><li> Si le ver ne répond pas à exploiter la plaque, un zoom sur la tête de la région. </li><li> Tapoter doucement la tête de la vis sans fin avec le transfert de ramasser platine. Score le ver comme mort si elle ne répond pas en déplaçant sa tête. </li><li> Vers morts peut être retiré de la plaque. </li></ul></li><li> Notez la date et le nombre de vers qui sont vivants et morts. </li><li> Retour des plaques à 20 ° C. </li><li> Répétez les étapes 3.3 à 3.6 tous les 2 à 3 jours jusqu&#39;à ce que tous les vers sont morts. </li></ol> Partie 4: résultats représentatifs. Les données brutes produites par une expérience de durée de vie des nématodes est une liste de dates avec chiffres correspondants de vers qui sont vivants et morts pour chaque souche testée. Le nombre de vers qui meurent chaque jour est généralement inversé pour calculer la proportion de vers vivants chaque jour (figure 2A), qui est tracée graphiquement comme une courbe de survie (figure 2B, le jour de la ponte chronométré est considéré comme jour 0 ). La durée de vie de chaque individu dans le ver de l&#39;étude peut être calculée à partir du nombre de vers qui meurent chaque jour et utilisées pour calculer la durée de vie moyenne et la médiane pour la comparaison entre les souches. Le comptage du nombre de vers vivants chaque jour n&#39;est pas utilisé directement dans l&#39;analyse de la durée de vie. Worms maintenu sur un support solide sera l&#39;occasion «fuir», ou ramper soit sur le mur de la plaque ou vers le bas sous le support. Le nombre de vers vivants chaque jour peut être utilisée pour déterminer combien les vers fui pendant toute la durée de l&#39;expérience. Worms qui fuient sont généralement retirés de l&#39;analyse. Comme point de repère, la durée de vie typique médiane de N2, le C. elegans souche de type sauvage, maintenue sur le rayonnement UV-tué les bactéries à 20 ° C est d&#39;environ 25 jours, mesurée à partir d&#39;oeufs. Partie 5: Solutions <table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> Croissance nématode médias (NGM), 100 ml: </td></tr><tr><td colspan="2"> Combiner: </td></tr><tr><td> 0,3 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 0,25 g </td><td> Peptone </td></tr><tr><td> 2 g </td><td> Agar </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoclave pendant 40 minutes et laisser refroidir à 55 ° C, puis ajouter: </td></tr><tr><td> 100 uL </td><td> 1 M MgSO 4 </td></tr><tr><td> 100 uL </td><td> 5 mg / ml de cholestérol </td></tr><tr><td> 100 uL </td><td> 1 M de CaCl2 </td></tr><tr><td> 1,625 ml </td><td> 1,5 M pH 6,0 KPi </td></tr><tr><td colspan="2"> NGM liquide peut être utilisé immédiatement pour verser des plaques ou des permis de solidifier et stockées à long terme à la température ambiante </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> Luria Broth (LB), 1L: </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> Bactotryptone </td></tr><tr><td> 5 g </td><td> Extrait de levure </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 10 ml </td><td> Tris 1 M pH 8,0 </td></tr><tr><td> 1 L </td><td> l&#39;eau déminéralisée </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoclave et conserver à température ambiante. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 1 M MgSO 4, 300 ml: </td></tr><tr><td> 73,95 g </td><td> MgSO 4 </td></tr><tr><td> 300 ml </td><td> l&#39;eau déminéralisée </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoclave et conserver à température ambiante. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 5 mg / ml de cholestérol, 200 ml: </td></tr><tr><td> 1 g </td><td> le cholestérol </td></tr><tr><td> 200 ml </td><td> 100% d&#39;éthanol </td></tr><tr><td colspan="2"> Filtre stériliser et stocker à température ambiante. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 1 M de CaCl 2, 500 ml: </td></tr><tr><td> 27,75 g </td><td> CaCl 2 </td></tr><tr><td> 500 ml </td><td> l&#39;eau déminéralisée </td></tr><tr><td colspan="2"> Filtre stériliser et stocker à température ambiante. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 1,5 M pH 6,0 KPi, 1L: </td></tr><tr><td colspan="2"> Combiner: </td></tr><tr><td> 31,4 g </td><td> KPi dibasique </td></tr><tr><td> 179,6 g </td><td> KPi monobasique </td></tr><tr><td> 850 ml </td><td> l&#39;eau déminéralisée </td></tr><tr><td colspan="2"> Chauffer tout en mélangeant afin de permettre KPi de dissoudre dans la solution. Ajuster le pH à 6,0 avec NaOH 10 N. </td></tr><tr><td colspan="2"> Ajouter de l&#39;eau déminéralisée à 1 L. </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoclave et conserver à température ambiante. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> Tris 1 M, pH 8,0: </td></tr><tr><td> 60,57 g </td><td> Tris </td></tr><tr><td> 400 ml </td><td> l&#39;eau déminéralisée </td></tr><tr><td colspan="2"> Ajuster le pH à 8,0 avec HCl. </td></tr><tr><td colspan="2"> Ajouter de l&#39;eau déminéralisée à 500 mL. </td></tr><tr><td colspan="2"> Filtre stériliser et stocker à température ambiante. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 150 mM fluorodésoxyuridine (FUDR), 10 ml: </td></tr><tr><td> 0,3693 g </td><td> FUDR </td></tr><tr><td> 10 ml </td><td> l&#39;eau stérile déionisée </td></tr><tr><td colspan="2"> Conserver à -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 100 mg / ml d&#39;ampicilline (Amp), 10 ml: </td></tr><tr><td> 1 g </td><td> Ampicilline </td></tr><tr><td> 10 ml </td><td> l&#39;eau stérile déionisée </td></tr><tr><td colspan="2"> Conserver à -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 50 mg / ml de carbénicilline (Carb), 10 ml: </td></tr><tr><td> 500 mg </td><td> Carbénicilline </td></tr><tr><td> 10 ml </td><td> l&#39;eau stérile déionisée </td></tr><tr><td colspan="2"> Conserver à -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 1 M isopropylique β-D-thiogalactopyranoside (IPTG), 10 ml: </td></tr><tr><td> 2,38 g </td><td> IPTG </td></tr><tr><td> 10 ml </td><td> l&#39;eau stérile déionisée </td></tr><tr><td colspan="2"> Conserver à -20 ° C. </td></tr></tbody></table><img src="/files/ftp_upload/1152/Figure%201.png" alt="Figure 1" /> Images Figure 1. Fond clair de C. étapes de la vie elegans, y compris les œufs, les quatre stades larvaires (L1 - L4), et l&#39;adulte. Tous les panneaux montrent les hermaphrodites, sauf le coin inférieur droit, qui montre un mâle adulte (Image tirée du bois (1988)). <img src="/files/ftp_upload/1152/Figure%202.png" alt="Figure 2" /> Les résultats représentatifs Figure 2. À partir d&#39;un C. expérimentation elegans durée de vie comparant sauvages N2 souche de type à une souche contenant une mutation dans le gène daf-2. (A) Un tableau présentant les données recueillies, y compris nombre de jours depuis les vers étaient des œufs, du nombre de vers morts observées chaque jour, et le pourcentage de l&#39;échantillon initial restant en vie à chaque jour (tel que calculé à partir des chiffres quotidiens de vers morts) . (B) courbes de survie correspondant à la durée de vie des données fournies dans (A). <imgsrc = &quot;/ files/ftp_upload/1152/Figure 3.jpg&quot; alt = &quot;Figure 3&quot; /&gt; Figure 3. Comparaison Représentant de lipofuscine entre les adultes jeunes et vieux C. elegans. Images en champ clair apparaissent sur les images gauche et canal de fluorescence DAPI sur la droite. Panneaux du haut montrent un ver de 4 jours et les panneaux du bas montrent un ver 11 jours anciens (tel que mesuré à partir d&#39;œufs).

<ol>
	<li>Wood, W. B., Wood, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Nematode Caenorhabditis elegans. , 1-16 (1988).</li><li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+restriction+by+bacterial+deprivation+increases+life+span+in+wild-derived+nematodes.">Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes.</a> Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).</li><li>Garigan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+tissue+aging+in+Caenorhabditis+elegans:+a+role+for+heat-shock+factor+and+bacterial+proliferation.">Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation.</a> Genetics. 161, 1101-1112 (2002).</li><li>Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. E., Kapahi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longevity+determined+by+developmental+arrest+genes+in+Caenorhabditis+elegans.">Longevity determined by developmental arrest genes in Caenorhabditis elegans.</a> Aging Cell. 6, 525-523 (2007).</li><li>Curran, S. P., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifespan+regulation+by+evolutionarily+conserved+genes+essential+for+viability.">Lifespan regulation by evolutionarily conserved genes essential for viability.</a> PLoS Genet. 3, e56-e56 (2007).</li><li>Dillin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rates+of+behavior+and+aging+specified+by+mitochondrial+function+during+development.">Rates of behavior and aging specified by mitochondrial function during development.</a> Science. 298, 2398-2401 (2002).</li><li>Hamilton, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+RNAi+screen+for+longevity+genes+in+C.+elegans.">A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans.</a> Genes Dev. 19, 1544-1555 (2005).</li><li>Hansen, M., Hsu, A. L., Dillin, A., Kenyon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+genes+tied+to+endocrine,+metabolic,+and+dietary+regulation+of+lifespan+from+a+Caenorhabditis+elegans+genomic+RNAi+screen.">New genes tied to endocrine, metabolic, and dietary regulation of lifespan from a Caenorhabditis elegans genomic RNAi screen.</a> PLoS Genet. 1, 119-128 (2005).</li><li>Lee, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+RNAi+screen+identifies+a+critical+role+for+mitochondria+in+C.+elegans+longevity.">A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity.</a> Nat Genet. 33, 40-48 (2003).</li><li>Smith, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-+and+calorie-independent+life+span+extension+from+dietary+restriction+by+bacterial+deprivation+in+Caenorhabditis+elegans.">Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans.</a> BMC Dev Biol. 8, 49-49 (2008).</li><li>Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nondisjunction+Mutants+of+the+Nematode+CAENORHABDITIS+ELEGANS.">Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS.</a> Genetics. 91, 67-94 (1979).</li><li>Emmons, S. W., Sternberg, P. W., Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> C. ELEGANS II. , (1997).</li><li>Lipton, J., Kleemann, G., Ghosh, R., Lints, R., Emmons, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mate+searching+in+Caenorhabditis+elegans:+a+genetic+model+for+sex+drive+in+a+simple+invertebrate.">Mate searching in Caenorhabditis elegans: a genetic model for sex drive in a simple invertebrate.</a> J Neurosci. 24, 7427-7434 (2004).</li><li>Davis, B. O., Anderson, G. L., Dusenbery, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+luminescence+spectroscopy+of+fluorescence+changes+during+aging+in+Caenorhabditis+elegans.">Total luminescence spectroscopy of fluorescence changes during aging in Caenorhabditis elegans.</a> Biochemistry. 21, 4089-4095 (1982).</li><li>Klass, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+major+biological+and+environmental+factors+influencing+life+span.">Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span.</a> Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).</li><li>Steinkraus, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+restriction+suppresses+proteotoxicity+and+enhances+longevity+by+an+hsf-1-dependent+mechanism+in+Caenorhabditis+elegans.">Dietary restriction suppresses proteotoxicity and enhances longevity by an hsf-1-dependent mechanism in Caenorhabditis elegans.</a> Aging Cell. 7, 394-404 (2008).</li></ol>

Le contrôle génétique de la longévité a été largement étudié en C. elegans, largement dû à la facilité et la rapidité avec laquelle la durée de vie peut être déterminée. Le protocole abordées dans cet article décrit un cadre de base pour obtenir des données reproductibles durée de vie en C. elegans et peut également être appliquée à des espèces relatednematode. 2 En faisant quelques simples modifications de ces procédures peuvent être adaptés pour mesurer la dur?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Agar</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0145-17-0 (214530)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ampicillin</td>
<td>Reagent</td>
<td>MidSci</td>
<td>0339</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BactoTryptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0123-17-3 (211705)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BactoPeptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0118-17-0 (211677)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CaCl2</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (JT Baker)</td>
<td>NC9699248 (1332-01)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Carbenicillin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gold BioTechnology (GBT)</td>
<td>C0109</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cholesterol</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>C75209</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorodeoxyuridine (FUDR)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F0503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isopropyl &#x03B2;-d-Thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gold BioTechnology (GBT)</td>
<td>I2481C5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KPi Dibasic</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (JT Baker)</td>
<td>5087862 (3252-01)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KPi Monobasic</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (JT Baker)</td>
<td>5087861 (3246-01)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MgSO4</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (JT Baker)</td>
<td>NC9561800 (2500-01)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NaCl</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>S251</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tris</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T1503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0886-17-0 (288620)</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

measuring caenorhabditis elegans life span on solid media

Le vieillissement est un processus dégénératif caractérisé par une détérioration progressive des composants cellulaires et des organites résultant de la mortalité. Le nématode<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; A émergé comme un modèle principal utilisé pour étudier la biologie du vieillissement. Parce que pratiquement tous les sous-systèmes biologiques subit un déclin fonctionnel avec l&#39;âge, la durée de vie est le critère principal d&#39;intérêt lorsque l&#39;on considère le taux total de vieillissement. Dans les nématodes, la durée de vie est généralement défini comme le nombre de jours d&#39;un animal reste sensible aux stimuli extérieurs. Les nématodes peuvent être propagés soit dans des milieux liquides ou sur des supports solides en plaques, et les techniques ont été développées pour mesurer la durée de vie dans les deux conditions. Nous présentons ici un protocole généralisé pour mesurer la durée de vie des nématodes maintenue sur milieu solide croissance des nématodes et nourris avec un régime d&#39;UV-tué les bactéries. Ces procédures peuvent être facilement adaptés à la durée de vie de dosage dans différentes conditions communes, y compris un régime alimentaire composé de bactéries vivantes, des restrictions alimentaires, et l&#39;interférence ARN.

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media at JoVE.com

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Dans cet article nous présentons un protocole général pour la mesure de la durée de vie des nématodes maintenu sur un support solide avec UV-tué alimentaire bactérienne.

Mesure Caenorhabditis elegans</emDurée de vie> sur des milieux solides

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The nematode ...

measuring-caenorhabditis-elegans-life-span-on-solid-media

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

29.6K vues.  University of Washington. Dans cet article nous présentons un protocole général pour la mesure de la durée de vie des nématodes maintenu sur un support solide avec UV-tué alimentaire bactérienne.

Vidéo: Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Quantifying Yeast Chronological Life Span by Outgrowth of Aged Cells

The budding yeast Saccharomyces cerevisiae has proven to be an important model organism in the field of aging research 1. The replicative and chronological life spans are two established paradigms used to study aging in yeast. Replicative aging is defined as the number of daughter cells a single yeast mother cell produces before senescence; chronological aging is defined by the length of time cells can survive in a non-dividing, quiescence-like state 2. We have developed a high-throughput method for quantitative measurement of chronological life span. This method involves aging the cells in a defined medium under agitation and at constant temperature. At each age-point, a sub-population of cells is removed from the aging culture and inoculated into rich growth medium. A high-resolution growth curve is then obtained for this sub-population of aged cells using a Bioscreen C MBR machine. An algorithm is then applied to determine the relative proportion of viable cells in each sub-population based on the growth kinetics at each age-point. This method requires substantially less time and resources compared to other chronological lifespan assays while maintaining reproducibility and precision. The high-throughput nature of this assay should allow for large-scale genetic and chemical screens to identify novel longevity modifiers for further testing in more complex organisms.

Chronological aging in yeast refers to the loss of cell viability associated with time in stationary phase. Here we describe a high-throughput method for quantitatively determining yeast chronological life span.

Quantifier Life Span levure chronologique par excroissance de cellules âgées

The budding yeast Saccharomyces cerevisiae has proven to be an important model organism in the field of aging research 1. The replicative and ...

Recherche

Biologie

Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The budding yeast Saccharomyces cerevisiae has been used extensively to study the biology of aging, and several determinants of yeast longevity have been shown to be conserved in multicellular eukaryotes, including worms, flies, and mice 1. Due to the lack of easily quantified age-associated phenotypes, aging in yeast has been assayed almost exclusively by measuring the life span of cells in different contexts, with two different life span paradigms in common usage 2. Chronological life span refers to the length of time that a mother cell can survive in a non-dividing, quiescence-like state, and is proposed to serve as a model for aging of post-mitotic cells in multicellular eukaryotes. Replicative life span, in contrast, refers the number of daughter cells produced by a mother cell prior to senescence, and is thought to provide a model of aging in mitotically active cells. Here we present a generalized protocol for measuring the replicative life span of budding yeast mother cells. The goal of the replicative life span assay is to determine how many times each mother cell buds. The mother and daughter cells can be easily differentiated by an experienced researcher using a standard light microscope (total magnification 160X), such as the Zeiss Axioscope 40 or another comparable model. Physical separation of daughter cells from mother cells is achieved using a manual micromanipulator equipped with a fiber-optic needle. Typical laboratory yeast strains produce 20-30 daughter cells per mother and one life span experiment requires 2-3 weeks.

In this article we present a general protocol for measuring the replicative life span of yeast mother cells.

Mesure Life Span réplicative dans la levure bourgeonnante

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The budding ...

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor mutations in components of age-regulatory pathways. If these mutations perturb the function of the age-regulatory pathway and therefore alter the lifespan of the entire organism, they provide important mechanistic insights1-3.
Another strategy to investigate the regulation of lifespan is to use small molecules to perturb age-regulatory pathways. To date, a number of molecules are known to extend lifespan in various model organisms and are used as tools to study the biology of aging4-16. The number of molecules identified thus far is small compared to the genetic "toolset" that is available to study the biology of aging.
Caenorhabditis elegans is one of the principle models used to study aging because of its excellent genetics and short lifespan of three weeks. More recently, C.elegans has emerged as a model organism for phenotype based drug screens5,7,16-20 because of its small size and its ability to grow in microtiter plates.
Here we present an assay to measure C.elegans lifespan in 96 well microtiter plates. The assay was developed and successfully used to screen large libraries for molecules that extend C.elegans lifespan7. The reliability of the assay was evaluated in multiple tests: first, by measuring the lifespan of wild type animals grown at different temperatures; second, by measuring the lifespan of mutants with altered lifespans; third, by measuring changes in lifespan in response to different concentrations of the antidepressant Mirtazepine. Mirtazepine has previously been shown to extend lifespan in C.elegans7. The results of these tests show that the assay is able to replicate previous findings from other assays and is quantitative. The microtiter format also makes this lifespan assay compatible with automated liquid handling systems and allows integration into automated platforms.

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

In this protocol we present a method to measure Caenorhabditis elegans lifespan in 96 well microtiter plates.

Mesure Caenorhabditis elegans</emDurée de vie> à 96 plaques de microtitration bien

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor ...

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide range of species, including mammals. It also causes a decrease in body weight and fertility, as well as lower levels of plasma glucose, insulin, and IGF-1 in these animals. This treatment is often referred to as dietary restriction (DR) or caloric restriction (CR). The nematode Caenorhabditis elegans has emerged as an important model organism for studying the biology of aging. Both environmental and genetic manipulations have been used to model DR and have shown to extend lifespan in C. elegans. However, many of the reported DR studies in C. elegans were done by propagating animals in liquid media, while most of the genetic studies in the aging field were done on the standard solid agar in petri plates. Here we present a DR protocol using standard solid NGM agar-based plate with killed bacteria.

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Here we present a protocol for performing solid plate-based dietary restriction in C. elegans with killed bacteria.

Solide plaque à base de restriction alimentaire Caenorhabditis elegans</em

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has since been used extensively as a model organism 1. C. elegans possesses key attributes such as simplicity, transparency and short life cycle that have made it a suitable experimental system for fundamental biological studies for many years 2. Discoveries in this nematode have broad implications because many cellular and molecular processes that control animal development are evolutionary conserved 3.
C. elegans life cycle goes through an embryonic stage and four larval stages before animals reach adulthood. Development can take 2 to 4 days depending on the temperature. In each of the stages several characteristic traits can be observed. The knowledge of its complete cell lineage 4,5 together with the deep annotation of its genome turn this nematode into a great model in fields as diverse as the neurobiology 6, aging 7,8, stem cell biology 9 and germ line biology 10. 
An additional feature that makes C. elegans an attractive model to work with is the possibility of obtaining populations of worms synchronized at a specific stage through a relatively easy protocol. The ease of maintaining and propagating this nematode added to the possibility of synchronization provide a powerful tool to obtain large amounts of worms, which can be used for a wide variety of small or high-throughput experiments such as RNAi screens, microarrays, massive sequencing, immunoblot or in situ hybridization, among others. 
Because of its transparency, C. elegans structures can be distinguished under the microscope using Differential Interference Contrast microscopy, also known as Nomarski microscopy. The use of a fluorescent DNA binder, DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole), for instance, can lead to the specific identification and localization of individual cells, as well as subcellular structures/defects associated to them.

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

The easiness of maintaining and propagating the nematode C. elegans make it a nice model organism to work with. The possibility of synchronizing worms allows the work with a significant amount of subjects at the same developmental stage, what facilitates the study of one particular process in many animals.

De base<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Méthodes: Synchronisation et d&#39;observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

In this protocol, we present the required materials, and the procedure for making modified&#160;C. elegans&#160;Habituation and Reproduction media (mCeHR). Additionally, the steps for exposing and acclimatizing C. elegans grown on E. coli to axenic liquid media are described. Finally, downstream experiments that utilize axenic C. elegans illustrate the benefits of this procedure. The ability to analyze and determine C. elegans&#160;nutrient requirement was illustrated by growing N2 wild type worms in axenic liquid media with varying heme concentrations. This procedure can be replicated with other nutrients to determine the optimal concentration for worm growth and development or, to determine the toxicological effects of drug treatments. The effects of varied heme concentrations on the growth of wild type worms were determined through qualitative microscopic observation and by quantitating the number of worms that grew in each heme concentration. In addition, the effect of varied nutrient concentrations can be assayed by utilizing worms that express fluorescent sensors that respond to changes in the nutrient of interest. Furthermore, a large number of worms were easily produced for the generation of transgenic C. elegans using microparticle bombardment.

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

C. elegans is usually grown on solid agar plates or in liquid cultures seeded with E. coli. To prevent bacterial byproducts from confounding toxicological and nutritional studies, we utilized an axenic liquid medium, CeHR, to grow and synchronize a large number of worms for a range of downstream applications.

Culture<em&gt; Caenorhabditis elegans</em &gt; En Axenic Liquid Media et création d&#39;transgéniques Worms par bombardement de microparticules

In this protocol, we present the required materials, and the procedure for making modified&#160;C. elegans&#160;Habituation and Reproduction media ...

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic human disorders, including cardiovascular and neurodegenerative diseases, diabetes, aging, and cancer. Therefore, it is important to study oxidative stress not only in cell systems but also using whole organisms. C. elegans is an attractive model organism to study the genetics of oxidative stress signal transduction pathways, which are highly evolutionarily conserved.
Here, we provide a protocol to measure oxidative stress resistance in C. elegans in liquid. Briefly, ROS-inducing reagents such as paraquat (PQ) and H2O2 are dissolved in M9 buffer, and solutions are aliquoted in the wells of a 96 well microtiter plate. Synchronized L4/young adult C. elegans animals are transferred to the wells (5-8 animals/well) and survival is measured every hour until most worms are dead. When performing an oxidative stress resistance assay using a low concentration of stressors in plates, aging might influence the behavior of animals upon oxidative stress, which could lead to an incorrect interpretation of the data. However, in the assay described herein, this problem is unlikely to occur since only L4/young adult animals are being used. Moreover, this protocol is inexpensive and results are obtained in one day, which renders this technique attractive for genetic screens. Overall, this will help to understand oxidative stress signal transduction pathways, which could be translated into better characterization of oxidative stress-associated human disorders.

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

C. elegans is an attractive model organism to study signal transduction pathways involved in oxidative stress resistance. Here we provide a protocol to measure oxidative stress resistance of C. elegans animals in liquid phase, using several oxidizing agents in 96 well plates.

Mesurer le stress oxydatif Résistance<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; En 96 plaques de microtitration bien

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic ...

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, sequester or eliminate damaged proteins to maintain a healthy proteome, thus ensuring cellular proteostasis and preventing further protein damage. Because of redundant functions within the proteostasis network, screening for detectable phenotypes using knockdown or mutations in chaperone-encoding genes in the multicellular organism Caenorhabditis elegans results in the detection of minor or no phenotypes in most cases. We have developed a targeted screening strategy to identify chaperones required for a specific function and thus bridge the gap between phenotype and function. Specifically, we monitor novel chaperone interactions using RNAi synthetic interaction screens, knocking-down chaperone expression, one chaperone at a time, in animals carrying a mutation in a chaperone-encoding gene or over-expressing a chaperone of interest. By disrupting two chaperones that individually present no gross phenotype, we can identify chaperones that aggravate or expose a specific phenotype when both perturbed. We demonstrate that this approach can identify specific sets of chaperones that function together to modulate the folding of a protein or protein complexes associated with a given phenotype.

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

To study chaperone-chaperone and chaperone-substrate interactions, we perform synthetic interaction screens in Caenorhabditis elegans using RNA interference in combination with mild mutations or over-expression of chaperones and monitor tissue-specific protein dysfunction at the organismal level.

Utilisation de Caenorhabditis elegans pour dépister les interactions tissulaires spécifiques des chaperons

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, ...

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits obesity and many associated diseases including cardiovascular disorders, type II diabetes, and cancer. To advance the current understanding of lipid metabolic regulation, quantitative methods to precisely measure in vivo lipid storage levels in time and space have become increasingly important and useful. Traditional approaches to analyze lipid storage are semi-quantitative for microscopic assessment or lacking spatio-temporal information for biochemical measurement. Stimulated Raman scattering (SRS) microscopy is a label-free chemical imaging technology that enables rapid and quantitative detection of lipids in live cells with a subcellular resolution. As the contrast is exploited from intrinsic molecular vibrations, SRS microscopy also permits four-dimensional tracking of lipids in live animals. In the last decade, SRS microscopy has been widely used for small molecule imaging in biomedical research and overcome the major limitations of conventional fluorescent staining and lipid extraction methods. In the laboratory, we have combined SRS microscopy with the genetic and biochemical tools available to the powerful model organism, Caenorhabditis elegans, to investigate the distribution and heterogeneity of lipid droplets across different cells and tissues and ultimately to discover novel conserved signaling pathways that modulate lipid metabolism. Here, we present the working principles and the detailed setup of the SRS microscope and provide methods for its use in quantifying lipid storage at distinct developmental timepoints of wild-type and insulin signaling deficient mutant C. elegans.

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Stimulated Raman scattering (SRS) microscopy allows selective, label-free imaging of specific chemical moieties and it has been effectively employed to image lipid molecules in vivo. Here, we provide a brief introduction to the principle of SRS microscopy and describe methods for its use in imaging lipid storage in Caenorhabditis elegans.

Imagerie sans étiquette de la dynamique de stockage des lipides chez Caenorhabditis elegans à l’aide de la microscopie de diffusion Raman stimulée

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits ...

High-Throughput Screening of Microbial Isolates with Impact on Caenorhabditis elegans Health

With its small size, short lifespan, and easy genetics, Caenorhabditis elegans offers a convenient platform to study the impact of microbial isolates on host physiology. It also fluoresces in blue when dying, providing a convenient means of pinpointing death. This property has been exploited to develop high-throughput label-free C. elegans survival assays (LFASS). These involve time-lapse fluorescence recording of worm populations set in multiwell plates, from which population median time of death can be derived. The present study adopts the LFASS approach to screen multiple microbial isolates at once for the effects on C. elegans susceptibility to severe heat and oxidative stresses. Such microbial screening pipeline, which can notably be used to prescreen probiotics, using severe stress resistance as a proxy for host health is reported here. The protocol describes how to grow both C. elegans gut microbiota isolate collections and synchronous worm populations in multiwell arrays before combining them for the assays. The example provided covers the testing of 47 bacterial isolates and one control strain on two worm strains, in two stress assays in parallel. However, the approach pipeline is readily scalable and applicable to the screening of many other modalities. Thus, it provides a versatile setup to rapidly survey a multiparametric landscape of biological and biochemical conditions that impact C. elegans health.

High-Throughput Screening of Microbial Isolates with Impact on Caenorhabditis elegans Health

Gut microbes may positively or negatively impact the health of their host via specific or conserved mechanisms. Caenorhabditis elegans is a convenient platform to screen for such microbes. The present protocol describes high-throughput screening of 48 bacterial isolates for impact on nematode stress resistance, used as a proxy for worm health.

Criblage à haut débit d’isolats microbiens ayant un impact sur la santé de Caenorhabditis elegans

With its small size, short lifespan, and easy genetics, Caenorhabditis elegans offers a convenient platform to study the impact of microbial isolates on ...

Mesure Caenorhabditis elegans sur des milieux solides