<p class="jove_content"> Este trabalho foi financiado por um Avanços Glenn / AFAR em Gerontologia e Grant Award NIH 1R01AG031108-01 a MKGS é suportado pelo NIH treinamento conceder P30AG013280. MK é um Ellison Medical Foundation Scholar novo no Envelhecimento. </p>

<p class="jove_title"> Parte 1: Prepare nematóide crescimento media (NGM) placas </p><p class="jove_content"> Esta seção descreve a preparação das placas NGM sólido para uso no experimento vida. A experiência de extensão básicas da vida requer dois tipos de placas: placas NGM padrão, que não contêm aditivos, e Amp / FUDR placas, que têm ampicilina (Amp) e fluorodeoxyuridine (FUDR) adicionado ao NGM. Ampicilina é usado para prevenir a contaminação bacteriana estrangeiros. FUDR inibe a divisão celular, reduz a produção de ovos, e impede que os ovos de incubação. O uso de FUDR para a análise da longevidade não afeta expectativa de vida de adultos e elimina a necessidade de transferência de worms cada poucos dias, a fim de separá-los de larva a crescer. Ambos os tipos de placas são semeados com <em>E. coli</em> OP50 bactérias, que é posteriormente morto por exposição a UV. </p><ol><li> Prepare NGM (ver secção 5 para receita e notas de armazenamento) e placas de petri rótulo. Você vai precisar de uma placa de petri 60 milímetros por 10 mL de NGM. Se você está começando com previamente preparado NGM sólida, avance para o passo 1.2. Se você está começando com NGM recém autoclavado, pule para o passo 1.4. </li><li> Derreter completamente NGM sólido por microondas em alta em 30 pulsos segundo. Media redemoinho entre os pulsos para evitar bolhas de gás pressurizado de edificação. </li><li> NGM lugar líquido em 55 ° C ou banho de água na bancada para esfriar. </li><li> Uma vez que NGM atinge 55 ° C adicionar 33 mL de 150 FUDR mM e 100 mL de 100 mg / mL por 100 mL Ampicilina NGM (para Amp / FUDR placas) e agite para misturar. Para placas NGM sem drogas adicionais prosseguir diretamente para o passo 1.5. </li><li> Utilizando uma técnica estéril, pipetar 10 mL em cada placa NGM petri 60 mm. Evite a formação de bolhas, se possível. Se as bolhas se formam, elas podem ser estalado usando uma ponta da pipeta. </li><li> Deixar as placas sobre a bancada com tampas para permitir NGM para solidificar e seco. Se possível, deixe as placas no banco por 2 dias antes da adição de bactérias, mas um dia vai funcionar se as placas são necessários mais cedo. </li><li> No dia antes de terminar a secagem das placas, a semente da cultura LB líquido com uma única colônia a partir de uma raia fresca de <em>E. coli</em> OP50 bactérias em agar LB. Você deve preparar, pelo menos, 1 mL de uma cultura OP50 noite por 60 placa mm. </li><li> Cultura local OP50 em 37 ° C shaker e permitir que as bactérias cresçam overnight (a cultura deve atingir a saturação). </li><li> Pellet OP50 bactérias girando a 3.500 g por 10 minutos. </li><li> Remover 90% das bactérias sobrenadante e ressuspender concentrar cultura 10x. </li><li> Pipetar 100 mL da cultura 10x OP50 concentrada no centro de placas NGM solidificado. Placas agite cuidadosamente para espalhar cultura de bactérias se necessário (o ideal bactérias deve cobrir a área central da NGM sem chegar perto das muralhas da placa). Tente evitar tocar a ponta da pipeta na superfície da NGM, como falhas na superfície dos meios de comunicação permitirá que as minhocas burrow na NGM. </li><li> Deixe placas no banco durante a noite para permitir cultura de bactérias para secar na NGM sólido (normalmente demora cerca de 24 horas). </li><li> Depois de seco, expor a superfície das placas a uma dose UV suficiente para deter o crescimento das bactérias. Se você estiver usando uma Stratalinker UV Stratagene 2400: <ul><li> Placas lugar no Stratalinker e remover as tampas </li><li> Feche a porta e ligar o Stratalinker </li><li> &quot;Energia&quot; de imprensa </li><li> Digite &#39;9999 &#39;usando o teclado </li><li> &#39;Start&#39; imprensa </li><li> As placas serão expostos aos raios UV por aproximadamente 5 minutos </li></ul></li><li> Placas com as bactérias UV-morto pode ser armazenado de cabeça para baixo a 4 ° C por até 1 mês. </li></ol><p class="jove_title"> Parte 2: Executar um ovo cronometrados que estabelece uma idade para a aquisição sincronizada população de animais </p><p class="jove_content"> Nesta seção, vamos gerar uma população de vermes com uma data comum hatch. Isto é conseguido, permitindo que adultos reprodutivamente ativos para colocar ovos em um prato por um período definido de tempo e permitindo que os ovos se desenvolvam. </p><ol><li> (Opcional) Transferência de aproximadamente 20 vermes adultos jovens a uma placa NGM fresca sem FUDR. Deixar as placas a 25 ° C, a fim de permitir que worms se propaguem e comer através de todos os alimentos bacteriana. Depois que o alimento foi consumido bacteriana worms recém-nascidos vai entrar no estágio de crescimento preso Dauer. Você começará a ver larva Dauer em torno de uma semana, dependendo de quantos worms você transferir para a placa inicialmente. Dauer larva pode ser usado para as próximas etapas para até um mês. </li><li> (Opcional) Transferência larva Dauer 20-30 a uma placa NGM fresca sem FUDR. Na presença de larva de alimentos se tornarão adultos Dauer reprodutivamente ativa dentro de 2 dias e manter-se reprodutivamente ativa por alguns dias depois a 25 ° C. </li><li> Transferência de 10-15 adultos reprodutivamente ativa para uma placa NGM fresca sem FUDR. Esta placa é referida como a postura de ovos cronometrado (TEL) da placa. </li><li> Deixe a placa TEL a 25 ° C durante 6 horas, a fim de permitir que tele worms tempo para botar ovos. </li><li> Remover vermes adultos de placa TEL. Placa pode ser inspeccionados visualmente para os ovos antes de remover os adultos. Se os vermes não tenham estabelecido um número suficiente de ovos a placa TEL podem ser deixados a 25 ° C por até um total de 24 horas antes de retirar vermes adultos. </li><li> Colocar a placa TEL a 20 ° C até que os ovos eclodiram e os vermes desenvolveram ao estágio larval L4 (o que normalmente leva 2 dias para tipo selvagem C. elegans, mas pode demorar mais tempo para as cepas com fenótipos de desenvolvimento lento). </li></ol><p class="jove_title"> Parte 3: animais Partituras de vida </p><p class="jove_content"> Nesta seção, siga as idade sincronizado população de vermes na parte 2 até morrerem. Worms são mantidos em Amp / FUDR placas para impedir a produção de ovos ea contaminação bacteriana e são considerados mortos quando não conseguem responder a estímulos externos. </p><ol><li> Transferência de larva L4 para semeado Amp / FUDR placas. Para cada estirpe ou condição a ser testada, é típico para configurar 2-3 placas com 25-30 worms por placa. Imagens da <em>C.</em> fases da vida <em>elegans</em> são fornecidos para a referência (Figura 1) <sup>1.</sup> </li><li> Lugar Amp / FUDR placas a 20 ° C por 24 horas. </li><li> Após 24 horas, visualmente avaliar worms, mídia e bactérias. Transferência de worms para fresco Amp / FUDR placas se qualquer um dos seguintes é observado: <ul><li> Worms ter comido a maior parte dos alimentos bacteriana. No início da vida worms experimento extensão terá de ser transferida 1-2 vezes por semana para evitar que as bactérias fossem esgotados. </li><li> Um número significativo de larvas estão presentes. Isso geralmente é uma indicação de que os vermes foram transferidos para as placas Amp / FUDR como jovens adultos, em vez de L4s e foram capazes de colocar alguns ovos antes da FUDR entrou em vigor. O FUDR geralmente impedir que as larvas se transformem em adultos completa, mas, ocasionalmente, alguns vão se transformar em adultos e se confundem com os animais experimentais. </li><li> Bactérias vivas / crescentes são observadas. Geralmente, a combinação de Amp e UV-matança vai garantir que nenhuma bactéria contaminar viver a experiência, mas ocasionalmente ocorre. </li><li> Crescimento do fungo é observada na mídia. Se detectada a tempo, o crescimento de fungos geralmente podem ser cortadas usando uma ponteira ou espátula. Uma vez que cresce a ser maior do que alguns milímetros de diâmetro é geralmente mais fácil de transferir os vermes para um novo prato. </li><li> Usando o escopo de dissecação, determinar se cada um worm é vivo ou morto. </li><li> Bata suavemente a placa. O worm é vivo se move em resposta ao toque. </li><li> Se o worm não responde a tocar a placa de zoom, em na região da cabeça. </li><li> Bata suavemente a cabeça do verme com pick transferência de platina. Pontuação o worm como morto, se ele não responder movendo a cabeça. </li><li> Worms mortos pode ser removido da placa. </li></ul></li><li> Registrar a data eo número de vermes que estão vivos e mortos. </li><li> Retorno placas a 20 ° C. </li><li> Repita os passos 3,3 a 3,6 a cada 2 a 3 dias até que todos os vermes já morreram. </li></ol><p class="jove_title"> Parte 4: Resultados Representante. </p><p class="jove_content"> Os dados brutos produzidos por um período de experiência de nematóides de vida é uma lista de datas com números correspondentes de vermes que estão vivos e mortos para cada cepa testada. O número de worms que morrem em cada dia é tipicamente invertido para calcular a proporção de vermes vivos em cada dia (Figura 2A), que é plotado graficamente como uma curva de sobrevivência (Figura 2B, o dia da postura de ovos cronometrado é considerado dia 0 ). O tempo de vida para cada verme individuais no estudo pode ser calculado a partir da contagem de vermes que morrem em cada dia e usado para calcular tempo de vida média e mediana para a comparação entre as linhagens. A contagem do número de vermes vivos em cada dia não é utilizado diretamente na análise de ciclo de vida. Worms mantidos em meios sólidos irá ocasionalmente &#39;fugir&#39;, ou rastrear tanto para cima da parede da placa ou para baixo abaixo da media. O número de vermes vivos em cada dia pode ser usado para determinar quantos worms fugiram durante todo o curso do experimento. Worms que fogem são normalmente removidos da análise. Como referência, o tempo de vida típico mediana para N2, a <em>C. elegans</em> cepa do tipo selvagem, mantidos em UV-matou as bactérias a 20 ° C é de aproximadamente 25 dias, como medida de ovo. </p><p class="jove_title"> Parte 5: Soluções </p><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>Nematóide Crescimento Media (NGM), 100 mL:</strong> </td></tr><tr><td colspan="2"> Combine: </td></tr><tr><td> 0,3 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 0,25 g </td><td> Peptona </td></tr><tr><td> 2 g </td><td> Agar </td></tr><tr><td colspan="2"> <strong>Autoclave por 40 minutos e deixe esfriar até 55 ° C, em seguida, acrescentar:</strong> </td></tr><tr><td> 100 L </td><td> 1 M MgSO <sub>4</sub> </td></tr><tr><td> 100 L </td><td> Colesterol 5 mg / mL </td></tr><tr><td> 100 L </td><td> 1 M CaCl<sub>2</sub> </td></tr><tr><td> 1,625 mL </td><td> 1,5 M pH 6,0 KPI </td></tr><tr><td colspan="2"> NGM líquido pode ser usado imediatamente para derramar placas ou permissão para solidificar e armazenados a longo prazo na temperatura ambiente </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>Luria Broth (LB), 1L:</strong> </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> BactoTryptone </td></tr><tr><td> 5 g </td><td> Extrato de levedura </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> 1 M Tris pH 8,0 </td></tr><tr><td> 1 L </td><td> água deionizada </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoclave e armazenar em temperatura ambiente. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M MgSO <sub>4,</sub> 300 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 73,95 g </td><td> MgSO <sub>4</sub> </td></tr><tr><td> 300 mL </td><td> água deionizada </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoclave e armazenar em temperatura ambiente. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>Colesterol 5 mg / mL, 200 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 1 g </td><td> colesterol </td></tr><tr><td> 200 mL </td><td> Etanol 100% </td></tr><tr><td colspan="2"> Filtro de esterilizar e armazenar à temperatura ambiente. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M CaCl <sub>2,</sub> 500 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 27,75 g </td><td> CaCl <sub>2</sub> </td></tr><tr><td> 500 mL </td><td> água deionizada </td></tr><tr><td colspan="2"> Filtro de esterilizar e armazenar à temperatura ambiente. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1,5 M pH 6,0 KPI, 1L:</strong> </td></tr><tr><td colspan="2"> Combine: </td></tr><tr><td> 31,4 g </td><td> KPI dibásico </td></tr><tr><td> 179,6 g </td><td> KPI monobásico </td></tr><tr><td> 850 mL </td><td> água deionizada </td></tr><tr><td colspan="2"> De calor durante a mistura para permitir KPI para dissolver na solução. Ajustar o pH para 6,0 com NaOH 10 N. </td></tr><tr><td colspan="2"> Adicione água deionizada para 1 L. </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoclave e armazenar em temperatura ambiente. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M Tris, pH 8.0:</strong> </td></tr><tr><td> 60,57 g </td><td> Tris </td></tr><tr><td> 400 mL </td><td> água deionizada </td></tr><tr><td colspan="2"> Ajustar o pH para 8,0 com HCl. </td></tr><tr><td colspan="2"> Adicionar água deionizada até 500 mL. </td></tr><tr><td colspan="2"> Filtro de esterilizar e armazenar à temperatura ambiente. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>150 mM Fluorodeoxyuridine (FUDR), 10 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 0,3693 g </td><td> FUDR </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> água deionizada estéril </td></tr><tr><td colspan="2"> Armazenar a -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>100 mg / mL Ampicilina (AMP), 10 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 1 g </td><td> Ampicilina </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> água deionizada estéril </td></tr><tr><td colspan="2"> Armazenar a -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>50 mg / mL carbenicilina (Carb), 10 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 500 mg </td><td> Carbenicilina </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> água deionizada estéril </td></tr><tr><td colspan="2"> Armazenar a -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M isopropílico β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG), 10 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 2,38 g </td><td> IPTG </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> água deionizada estéril </td></tr><tr><td colspan="2"> Armazenar a -20 ° C. </td></tr></tbody></table><p class="jove_content"><img src="/files/ftp_upload/1152/Figure%201.png" alt="figura 1" /><br /> <strong>Figura 1.</strong> Brilhante imagens campo de <em>C.</em> fases da vida <em>elegans,</em> incluindo ovo, quatro estágios larvais (L1 - L4) e adultos. Todos os painéis mostram hermafroditas, exceto o inferior direito, o que mostra um homem adulto (Imagem de Wood (1988)). </p><p class="jove_content"><img src="/files/ftp_upload/1152/Figure%202.png" alt="figura 2" /><br /> <strong>Figura 2.</strong> Os resultados representativos de um <em>C. elegans</em> experimento tempo de vida comparando N2 linhagem selvagem tipo para uma cepa que contém uma mutação no gene <em>daf-2.</em> (A) Uma tabela mostrando os dados coletados, incluindo o número de dias desde worms foram ovos, número de vermes mortos observadas em cada dia, ea porcentagem da amostra original permanecer vivo em cada dia (como calculado a partir da contagem diária de vermes mortos) . (B) Survival curvas correspondentes aos dados de tempo de vida previsto no (A). </p><p class="jove_content"><imgsrc = &quot;/ files/ftp_upload/1152/Figure 3.jpg&quot; alt = &quot;figura 3&quot; /&gt; <br /> <strong>Figura 3.</strong> Comparação Representante da lipofuscina entre jovens e velhos adulto <em>C. elegans.</em> Imagens de campo claro são mostrados à esquerda e as imagens de fluorescência DAPI canal à direita. Painéis superiores mostram um verme 4 dias de idade e painéis de fundo mostram um worm de 11 dias de idade (medida a partir de ovo). </p>

<ol>
	<li>Wood, W. B., Wood, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>The Nematode Caenorhabditis elegans</em>. , 1-16 (1988).</li><li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+restriction+by+bacterial+deprivation+increases+life+span+in+wild-derived+nematodes.">Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes.</a> <em style='font-style: italic'>Exp Gerontol</em>. <b>43</b>, 130-135 (2008).</li><li>Garigan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+tissue+aging+in+Caenorhabditis+elegans:+a+role+for+heat-shock+factor+and+bacterial+proliferation.">Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation.</a> <em style='font-style: italic'>Genetics</em>. <b>161</b>, 1101-1112 (2002).</li><li>Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. 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<p class="jove_content"> O controle genético da longevidade tem sido estudado extensivamente em <em>C. elegans,</em> em grande parte devido à facilidade e rapidez com que expectativa de vida pode ser determinada. O protocolo discutido neste artigo descreve uma estrutura básica para a obtenção de dados de vida reprodutíveis extensão em <em>C. elegans</em> e também pode ser aplicado às espécies relatednematode. <sup>2</sup> Ao fazer algumas alterações simples desses procedimentos pode ser adaptado para medir a expectativa de vida sob ...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Agar</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0145-17-0 (214530)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ampicillin</td>
<td>Reagent</td>
<td>MidSci</td>
<td>0339</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BactoTryptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0123-17-3 (211705)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BactoPeptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0118-17-0 (211677)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CaCl<sub>2</sub></td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (JT Baker)</td>
<td>NC9699248 (1332-01)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Carbenicillin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gold BioTechnology (GBT)</td>
<td>C0109</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cholesterol</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>C75209</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorodeoxyuridine (FUDR)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F0503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isopropyl &#x03B2;-d-Thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gold BioTechnology (GBT)</td>
<td>I2481C5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KPi Dibasic</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (JT Baker)</td>
<td>5087862 (3252-01)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KPi Monobasic</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (JT Baker)</td>
<td>5087861 (3246-01)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MgSO<sub>4</sub></td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (JT Baker)</td>
<td>NC9561800 (2500-01)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NaCl</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>S251</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tris</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T1503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0886-17-0 (288620)</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
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measuring <em>caenorhabditis elegans</em> life span on solid media

<p class="jove_content">O envelhecimento é um processo degenerativo caracterizado por uma deterioração progressiva de componentes celulares e organelas, resultando em mortalidade. O nematóide<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Surgiu como um modelo principal utilizado para estudar a biologia do envelhecimento. Porque praticamente todos os subsistemas biológico sofre declínio funcional com o aumento da idade, expectativa de vida é o objetivo primário de interesse quando se considera taxa total de envelhecimento. Em nematóides, expectativa de vida é normalmente definida como o número de dias de um animal continua a responder a estímulos externos. Nematóides podem ser propagadas tanto em meios líquidos ou em meios sólidos em placas, e as técnicas foram desenvolvidas para medir o tempo de vida em ambas as condições. Aqui apresentamos um protocolo generalizada para medir tempo de vida dos nematóides mantidos em meio de crescimento sólido de nematóides e alimentados com uma dieta de UV-morto bactérias. Estes procedimentos podem ser facilmente adaptado a vida útil do ensaio sob várias condições comuns, incluindo uma dieta composta de bactérias vivas, a restrição alimentar e interferência de RNA.</p>

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Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

<p class="jove_content">Neste artigo apresentamos um protocolo geral para medir a expectativa de vida dos nematóides mantidos em meios sólidos com alimentos UV-morto bacteriana.</p>

Medição<em> Caenorhabditis elegans</em> Expectativa de Vida em meios sólidos

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The nematode ...

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Research

JoVE Journal

Biology

Measuring <em>Caenorhabditis elegans</em> Life Span on Solid Media

29.5K visualizações.  University of Washington. Neste artigo apresentamos um protocolo geral para medir a expectativa de vida dos nematóides mantidos em meios sólidos com alimentos UV-morto bacteriana.

Medição Caenorhabditis elegans Expectativa de Vida em meios sólidos