Diese Arbeit wurde durch ein Glenn / AFAR Durchbrüche in der Gerontologie Award und NIH Grant 1R01AG031108-01 bis MKGS wird durch NIH Ausbildungsförderung P30AG013280 unterstützt werden. MK ist eine Ellison Medical Foundation New Scholar in Aging.

Teil 1: Bereiten Nematoden Nährmedien (NGM)-Platten Dieser Abschnitt beschreibt die Herstellung der festen NGM-Platten für den Einsatz in der Lebensdauer zu experimentieren. Eine grundlegende Lebensdauer Experiment erfordert zwei Arten von Platten: Standard NGM-Platten, die keine Zusatzstoffe und Amp / FUDR Platten, die sowohl Ampicillin (Amp) und Fluordeoxyuridin (FUDR) hinzugefügt, um die NGM haben enthalten. Ampicillin wird verwendet, um ausländische bakterielle Kontamination zu vermeiden. FUDR hemmt die Zellteilung, reduziert Eierproduktion, und verhindert, dass Eier aus dem Schlüpfen. Die Verwendung von FUDR für Langlebigkeit Analyse hat keinen Einfluss auf das Erwachsenenleben Spannweite und beseitigt die Notwendigkeit, Würmer übertragen alle paar Tage, um sie von der wachsenden Larve zu trennen. Beide Arten von Platten sind mit E. ausgesät coli OP50 Bakterien, die anschließend durch Bestrahlung mit UV getötet wird. <ol><li> Bereiten NGM (siehe Abschnitt 5 für die Rezept-und Storage-Noten) und Label-Petrischalen. Sie benötigen 1 60 mm Petrischale pro 10 ml NGM. Wenn Sie mit den zuvor hergestellten festen NGM beginnen, weiter auf 1,2 Schritt. Wenn Sie mit frisch autoklaviert NGM ab, fahren bis 1,4 Schritt. </li><li> Vollständig zu schmelzen solide NGM durch die Mikrowelle auf hoher in 30 Sekunden Impulse. Swirl Medien zwischen den Impulsen, um Druck Gasblasen aus dem Aufbau zu verhindern. </li><li> Legen Flüssigkeit NGM in 55 ° C Wasserbad oder auf der Bank, um abzukühlen. </li><li> Sobald NGM erreicht 55 ° C add 33 ul 150 mM FUDR und 100 ul von 100 mg / mL Ampicillin pro 100 ml NGM (für Amp / FUDR Platten) und wirbeln zu mischen. Für NGM-Platten ohne zusätzliche Medikamente gehen direkt bis 1,5 Schritt. </li><li> Mit einer sterilen Technik Pipette 10 mL NGM in jede 60 mm Petrischale. Vermeiden Sie Blasen bildet, wenn möglich. Wenn sich Blasen bilden, können sie tauchte mit einer Pipettenspitze werden. </li><li> Lassen Platten auf dem Arbeitstisch mit Deckel auf, damit NGM zu festigen und zu trocknen. Wenn möglich, die Platten auf Sitzbank für 2 Tage vor dem Hinzufügen von Bakterien, aber 1 Tag funktioniert, wenn die Platten früher benötigt werden. </li><li> Am Tag, bevor die Platten fertig Trocknen, Samenflüssigkeit LB-Kultur mit einer einzelnen Kolonie von einer frischen Spur von E. coli OP50 Bakterien auf LB-Agar. Sie sollten mindestens 1 mL einer Übernachtkultur OP50 Kultur pro 60 mm-Platte vorbereiten. </li><li> Legen Sie OP50 Kultur in 37 ° C Schüttler und lassen Bakterien wachsen über Nacht (Kultur sollte Sättigung zu erreichen). </li><li> Pellet OP50 Bakterien durch Spinnen bei 3.500 g für 10 Minuten. </li><li> Nehmen Sie 90% der Überstand und resuspendieren Bakterien zu konzentrieren Kultur 10x. </li><li> Je 100 ul von 10x konzentriert OP50 Kultur in den Mittelpunkt verfestigt NGM-Platten. Swirl Platten vorsichtig, um sich auszubreiten Bakterienkultur, wenn nötig (idealerweise Bakterien sollte der zentrale Bereich der NGM, ohne kommenden nahe der Platte Wände bedecken). Versuchen Sie zu vermeiden, berühren die Pipettenspitze an die Oberfläche der NGM, wie Fehler in der Oberfläche der Medien die Würmer erlauben, sich in das NGM. </li><li> Lassen Platten auf dem Arbeitstisch über Nacht zu ermöglichen Bakterienkultur auf der soliden NGM (dauert in der Regel etwa 24 Stunden) trocknen lassen. </li><li> Nach dem Trocknen aussetzen die Oberfläche der Platten mit einer UV-Dosis ausreichend, um das Wachstum der Bakterien zu verhaften. Wenn Sie einen Stratagene UV Stratalinker 2400: <ul><li> Legen Platten in der Stratalinker und entfernen Deckel </li><li> Schließen Sie die Tür und schalten Sie den Stratalinker </li><li> Drücken Sie &#39;Energy&#39; </li><li> Geben Sie &#39;9999 &#39;über die Tastatur </li><li> Drücken Sie &#39;Start&#39; </li><li> Die Platten werden mit UV für ca. 5 Minuten ausgesetzt werden </li></ul></li><li> Platten mit UV-abgetöteten Bakterien können auf den Kopf bei 4 ° C gelagert werden bis zu 1 Monat. </li></ol> Teil 2: Führen Sie eine zeitgesteuerte Eiablage zu einem Alter synchronisierten Population von Tieren zu erwerben In diesem Abschnitt erzeugen wir eine Bevölkerung von Würmern mit einem gemeinsamen Luke-date. Dies wird erreicht, indem reproduktiv aktiven Erwachsenen, Eier auf einem Teller legen für einen definierten Zeitraum und damit die Eier zu entwickeln durchgeführt. <ol><li> (Optional) Transfer ca. 20 jungen erwachsenen Würmer eine frische NGM Platte ohne FUDR. Lassen Platten bei 25 ° C, damit Würmer zu verbreiten und durch alle bakteriellen essen. Nach der bakteriellen Lebensmittel verbraucht worden ist frisch geschlüpften Würmer treten wird das Wachstum verhaftet dauer Bühne. Sie beginnt zu dauer Larve um zu sehen innerhalb einer Woche, je nachdem, wie viele Würmer man die Platte zunächst zu übertragen. Dauer Larve kann für die nächsten Schritte für bis zu 1 Monat verwendet werden. </li><li> (Optional) Transfer von 20 bis 30 dauer Larve eine frische NGM Platte ohne FUDR. In Anwesenheit von Nahrung dauer Larve wird reproduktiv aktiven Erwachsenen werden innerhalb von 2 Tagen und bleiben reproduktiv aktiv für ein paar Tage danach bei 25 ° C. </li><li> Übertragung von 10 bis 15 reproduktiv aktiven Erwachsenen eine frische NGM Platte ohne FUDR. Diese Platte wird als zeitlich Eiablage (TEL) Platte bezeichnet. </li><li> Verlassen Sie die TEL Platte bei 25 ° C für 6 Stunden, um t erlaubener Würmer Zeit, um Eier zu legen. </li><li> Entfernen erwachsenen Würmer aus TEL Platte. Platte kann visuell für Eier vor dem Entfernen Erwachsenen kontrolliert werden. Wenn die Würmer nicht eine ausreichende Zahl der gelegten Eier haben die TEL Platte kann bei 25 ° C für bis zu einer Gesamtzahl von 24 Stunden vor dem Entfernen von erwachsenen Würmer links. </li><li> Ort TEL Platte bei 20 ° C, bis die Eier ausgebrütet haben und die Würmer haben die L4 Larvenstadium (dies dauert in der Regel 2 Tage für Wildtyp C. elegans, kann aber länger dauern, Stämme mit langsamen Entwicklung Phänotypen) entwickelt. </li></ol> Teil 3: Ergebnis Tiere Lebensdauer In diesem Abschnitt folgen wir dem Alter synchronisiert Bevölkerung von Würmern aus Teil 2, bis sie sterben. Worms auf Amp / FUDR Platten gehalten, um die Eiererzeugung und bakterielle Kontamination zu vermeiden und sind tot, wenn sie auf äußere Reize reagieren, nicht berücksichtigt. <ol><li> Transfer-L4 Larve zur ausgesät Amp / FUDR Platten. Für jeden Stamm oder Bedingung getestet, ist es üblich, einrichten 2-3 Platten mit 25-30 Würmer pro Platte. Bilder von der C. elegans Lebensphasen dienen (Abbildung 1). 1 </li><li> Legen Amp / FUDR Platten bei 20 ° C für 24 Stunden. </li><li> Nach 24 Stunden visuell beurteilen Würmer, Medien und Bakterien. Transfer-Würmer an die frische Amp / FUDR Platten, wenn eine der folgenden beobachtet: <ul><li> Worms haben die meisten der bakteriellen gegessen. Früh in der Lebensdauer Experiment Würmer müssen transferiert 1 bis 2 Mal pro Woche, um die Bakterien aus zur Neige zu verhindern. </li><li> Eine beträchtliche Anzahl von Larven vorhanden sind. Dies ist normalerweise ein Indiz dafür, dass die Würmer die Amp / FUDR Platten als junge Erwachsene statt L4s übertragen wurden und konnten einige Eier zu legen, bevor die FUDR in Kraft getreten. Die FUDR wird in der Regel verhindern, dass die Larven von Hineinwachsen in voller Erwachsenen, aber gelegentlich ein paar werden zu Erwachsenen wachsen und nicht zu verwechseln mit den Versuchstieren. </li><li> Live / Anzucht von Bakterien beobachtet werden. Im Allgemeinen wird die Kombination von Amp und UV-Tötung sicherzustellen, dass keine lebenden Bakterien das Experiment verseuchen, aber gelegentlich auftritt. </li><li> Pilzwachstum auf den Medien beobachtet. Bei frühem genug ist, kann das Pilzwachstum in der Regel ausgeschnitten werden mit einer Pipettenspitze oder Spachtel. Sobald es wächst, größer zu sein als ein paar Millimeter im Durchmesser ist es meist einfacher, die Würmer auf eine neue Platte übertragen. </li><li> Mit der Zerlegung Umfang, festzustellen, ob jeder Wurm lebt oder tot ist. </li><li> Klopfen Sie leicht die Platte. Der Wurm lebt, wenn es in Reaktion auf das Klopfen bewegt. </li><li> Wenn der Wurm reagiert nicht auf Klopfen der Platte, zoomen Sie auf den Kopfbereich. </li><li> Klopfen Sie leicht den Wurm den Kopf mit Platin Abholservice. Ergebnis der Wurm als tot, wenn sie nicht durch Bewegungen seines Kopfes reagiert. </li><li> Tote Würmer können von der Platte entfernt werden. </li></ul></li><li> Notieren Sie den Zeitpunkt und die Anzahl der Würmer, die lebendig und tot sind. </li><li> Zurück Platten bis 20 ° C. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 3.3 bis 3,6 alle 2 bis 3 Tage, bis alle Würmer gestorben. </li></ol> Teil 4: Repräsentative Ergebnisse. Die Rohdaten von einem Nematoden Lebensdauer Experiment erzeugt wird, eine Liste von Terminen mit entsprechenden Anzahl von Würmern, die lebendig und tot für jeden Stamm getestet werden. Die Zahl der Würmer, die an jedem Tag sterben ist in der Regel umgekehrt, um den Anteil der Würmer lebend an jedem Tag (Abbildung 2A), die graphisch als Überlebensstrategie Kurve (Abbildung 2B dargestellt berechnen, der Tag der zeitlich Eiablage wird als Tag 0 ). Die Lebensdauer für jeden einzelnen Wurm in der Studie kann von der Anzahl der Würmer, die an jedem Tag sterben berechnet und verwendet werden, um mittlere und mittlere Lebensdauer für den Vergleich zwischen den Stämmen zu berechnen. Die Anzahl der Anzahl der Würmer lebend an jedem Tag wird nicht direkt in Lebensdauer-Analyse verwendet. Worms auf festen Medien gepflegt wird gelegentlich &quot;fliehen&quot;, oder kriechen entweder an der Wand der Platte oder sich unter den Medien. Die Zahl der Würmer lebend an jedem Tag können Sie bestimmen, wie viele Würmer flohen im Laufe des Experiments werden. Worms, die fliehen, sind in der Regel aus der Analyse entfernt. Als Orientierungsgröße gilt, die typische mittlere Lebensdauer für N2, die C. elegans Wildtypstamm, auf UV-abgetöteten Bakterien bei 20 ° C gehalten wird ca. 25 Tage vom Ei gemessen. Teil 5: Lösungen <table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> Nematode Growth Media (NGM), 100 ml: </td></tr><tr><td colspan="2"> Kombinieren Sie: </td></tr><tr><td> 0,3 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 0,25 g </td><td> Pepton </td></tr><tr><td> 2 g </td><td> Agar </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoklaven für 40 Minuten abkühlen lassen und auf 55 ° C, dann hinzuzufügen: </td></tr><tr><td> 100 ul </td><td> 1 M MgSO 4 </td></tr><tr><td> 100 ul </td><td> 5 mg / ml Cholesterin </td></tr><tr><td> 100 ul </td><td> 1 M CaCl2 </td></tr><tr><td> 1,625 mL </td><td> 1,5 M KPi pH 6,0 </td></tr><tr><td colspan="2"> Flüssige NGM kann sofort verwendet werden, um Platten gießen oder erstarren gelassen und langfristig aufbewahrt bei Raumtemperatur </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> Luria Broth (LB), 1L: </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> BactoTryptone </td></tr><tr><td> 5 g </td><td> Hefeextrakt </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> 1 M Tris pH 8,0 </td></tr><tr><td> 1 L </td><td> VE-Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoklaven und bei Raumtemperatur lagern. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 1 M MgSO 4, 300 ml: </td></tr><tr><td> 73,95 g </td><td> MgSO 4 </td></tr><tr><td> 300 mL </td><td> VE-Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoklaven und bei Raumtemperatur lagern. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 5 mg / ml Cholesterin, 200 ml: </td></tr><tr><td> 1 g </td><td> Cholesterin </td></tr><tr><td> 200 mL </td><td> 100% Ethanol </td></tr><tr><td colspan="2"> Filter sterilisiert und bei Raumtemperatur lagern. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 1 M CaCl 2, 500 mL: </td></tr><tr><td> 27.75 g </td><td> CaCl 2 </td></tr><tr><td> 500 mL </td><td> VE-Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Filter sterilisiert und bei Raumtemperatur lagern. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 1,5 M KPi pH 6,0, 1L: </td></tr><tr><td colspan="2"> Kombinieren Sie: </td></tr><tr><td> 31,4 g </td><td> KPi zweibasische </td></tr><tr><td> 179,6 g </td><td> KPi einbasischen </td></tr><tr><td> 850 ml </td><td> VE-Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Hitze beim Mischen zu ermöglichen KPi in Lösung aufzulösen. Der pH-Wert auf 6,0 mit 10 N NaOH. </td></tr><tr><td colspan="2"> Add entionisiertem Wasser auf 1 L. </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoklaven und bei Raumtemperatur lagern. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 1 M Tris, pH 8,0: </td></tr><tr><td> 60,57 g </td><td> Tris </td></tr><tr><td> 400 mL </td><td> VE-Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Der pH-Wert auf 8,0 mit HCl. </td></tr><tr><td colspan="2"> Add entionisiertem Wasser auf 500 mL. </td></tr><tr><td colspan="2"> Filter sterilisiert und bei Raumtemperatur lagern. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 150 mM Fluordeoxyuridin (FUDR), 10 mL: </td></tr><tr><td> 0,3693 g </td><td> FUDR </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> sterilem, deionisiertem Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Lagerung bei -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 100 mg / mL Ampicillin (Amp), 10 mL: </td></tr><tr><td> 1 g </td><td> Ampicillin </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> sterilem, deionisiertem Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Lagerung bei -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 50 mg / mL Carbenicillin (CARB), 10 mL: </td></tr><tr><td> 500 mg </td><td> Carbenicillin </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> sterilem, deionisiertem Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Lagerung bei -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 1 M Isopropyl β-D-thiogalactopyranosid (IPTG), 10 mL: </td></tr><tr><td> 2,38 g </td><td> IPTG </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> sterilem, deionisiertem Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Lagerung bei -20 ° C. </td></tr></tbody></table><img src="/files/ftp_upload/1152/Figure%201.png" alt="Abbildung 1" /> Abbildung 1. Hellfeld Bilder von C. elegans Lebensstadien, einschließlich der Eier, die vier Larvenstadien (L1 - L4) und Erwachsenen. Alle Tafeln zeigen Hermaphroditen mit Ausnahme der unteren rechten, die einem erwachsenen Mann (Image von Holz (1988)) zeigt. <img src="/files/ftp_upload/1152/Figure%202.png" alt="Abbildung 2" /> Abbildung 2. Repräsentative Ergebnisse aus einer C. elegans Lebensdauer Experiment verglichen Wildtypstamm N2 zu einem Stamm, einer Mutation in der daf-2-Gen. (A) Eine Tabelle mit den gesammelten Daten, einschließlich der Anzahl der Tage seit Würmer wurden Eier, die Anzahl der toten Würmer auf jeden Tag beobachtet, und der Prozentsatz der ursprünglichen Probe noch auf jeden Tag lebendig (wie aus der täglichen Grafen von toten Würmer berechnet) . (B) Überlebenskurven entsprechend der Lebensdauer von Daten in (A) zur Verfügung gestellt. <imgsrc = &quot;/ files/ftp_upload/1152/Figure 3.jpg&quot; alt = &quot;Bild 3&quot; /&gt; Abbildung 3. Representative Vergleich von Lipofuszin zwischen jungen und alten Erwachsenen C. elegans. Hellfeld Bilder sind auf der linken und DAPI Kanal Fluoreszenz-Aufnahmen auf der rechten Seite angezeigt. Top Tafeln zeigen eine 4 Tage alte Wurm und Bodenplatten zeigen eine 11 Tage alten Wurm (wie vom Ei gemessen).

<ol>
	<li>Wood, W. B., Wood, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Nematode Caenorhabditis elegans. , 1-16 (1988).</li><li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+restriction+by+bacterial+deprivation+increases+life+span+in+wild-derived+nematodes.">Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes.</a> Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).</li><li>Garigan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+tissue+aging+in+Caenorhabditis+elegans:+a+role+for+heat-shock+factor+and+bacterial+proliferation.">Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation.</a> Genetics. 161, 1101-1112 (2002).</li><li>Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. E., Kapahi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longevity+determined+by+developmental+arrest+genes+in+Caenorhabditis+elegans.">Longevity determined by developmental arrest genes in Caenorhabditis elegans.</a> Aging Cell. 6, 525-523 (2007).</li><li>Curran, S. P., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifespan+regulation+by+evolutionarily+conserved+genes+essential+for+viability.">Lifespan regulation by evolutionarily conserved genes essential for viability.</a> PLoS Genet. 3, e56-e56 (2007).</li><li>Dillin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rates+of+behavior+and+aging+specified+by+mitochondrial+function+during+development.">Rates of behavior and aging specified by mitochondrial function during development.</a> Science. 298, 2398-2401 (2002).</li><li>Hamilton, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+RNAi+screen+for+longevity+genes+in+C.+elegans.">A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans.</a> Genes Dev. 19, 1544-1555 (2005).</li><li>Hansen, M., Hsu, A. L., Dillin, A., Kenyon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+genes+tied+to+endocrine,+metabolic,+and+dietary+regulation+of+lifespan+from+a+Caenorhabditis+elegans+genomic+RNAi+screen.">New genes tied to endocrine, metabolic, and dietary regulation of lifespan from a Caenorhabditis elegans genomic RNAi screen.</a> PLoS Genet. 1, 119-128 (2005).</li><li>Lee, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+RNAi+screen+identifies+a+critical+role+for+mitochondria+in+C.+elegans+longevity.">A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity.</a> Nat Genet. 33, 40-48 (2003).</li><li>Smith, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-+and+calorie-independent+life+span+extension+from+dietary+restriction+by+bacterial+deprivation+in+Caenorhabditis+elegans.">Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans.</a> BMC Dev Biol. 8, 49-49 (2008).</li><li>Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nondisjunction+Mutants+of+the+Nematode+CAENORHABDITIS+ELEGANS.">Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS.</a> Genetics. 91, 67-94 (1979).</li><li>Emmons, S. W., Sternberg, P. W., Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> C. ELEGANS II. , (1997).</li><li>Lipton, J., Kleemann, G., Ghosh, R., Lints, R., Emmons, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mate+searching+in+Caenorhabditis+elegans:+a+genetic+model+for+sex+drive+in+a+simple+invertebrate.">Mate searching in Caenorhabditis elegans: a genetic model for sex drive in a simple invertebrate.</a> J Neurosci. 24, 7427-7434 (2004).</li><li>Davis, B. O., Anderson, G. L., Dusenbery, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+luminescence+spectroscopy+of+fluorescence+changes+during+aging+in+Caenorhabditis+elegans.">Total luminescence spectroscopy of fluorescence changes during aging in Caenorhabditis elegans.</a> Biochemistry. 21, 4089-4095 (1982).</li><li>Klass, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+major+biological+and+environmental+factors+influencing+life+span.">Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span.</a> Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).</li><li>Steinkraus, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+restriction+suppresses+proteotoxicity+and+enhances+longevity+by+an+hsf-1-dependent+mechanism+in+Caenorhabditis+elegans.">Dietary restriction suppresses proteotoxicity and enhances longevity by an hsf-1-dependent mechanism in Caenorhabditis elegans.</a> Aging Cell. 7, 394-404 (2008).</li></ol>

Die genetische Kontrolle der Langlebigkeit wurde ausgiebig in C. studierte elegans, vor allem wegen der Leichtigkeit und Schnelligkeit, mit der Lebensdauer bestimmt werden kann. Das Protokoll in diesem Artikel beschrieben wird ein Grundgerüst für den Erhalt von reproduzierbaren Lebensdauer von Daten in C. elegans und kann auch auf relatednematode Arten angewendet werden. 2 Durch ein paar einfache Änderungen dieser Verfahren angepasst Lebensdauer unter verschiedenen Bedingungen ge...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Agar</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0145-17-0 (214530)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ampicillin</td>
<td>Reagent</td>
<td>MidSci</td>
<td>0339</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BactoTryptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0123-17-3 (211705)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BactoPeptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0118-17-0 (211677)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CaCl2</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (JT Baker)</td>
<td>NC9699248 (1332-01)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Carbenicillin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gold BioTechnology (GBT)</td>
<td>C0109</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cholesterol</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>C75209</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorodeoxyuridine (FUDR)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F0503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isopropyl &#x03B2;-d-Thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gold BioTechnology (GBT)</td>
<td>I2481C5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KPi Dibasic</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (JT Baker)</td>
<td>5087862 (3252-01)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KPi Monobasic</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (JT Baker)</td>
<td>5087861 (3246-01)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MgSO4</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (JT Baker)</td>
<td>NC9561800 (2500-01)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NaCl</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>S251</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tris</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T1503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0886-17-0 (288620)</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

measuring caenorhabditis elegans life span on solid media

Altern ist ein degenerativer Prozess durch eine progressive Verschlechterung der zellulären Bestandteile und Organellen aufgrund der Mortalität gekennzeichnet. Der Fadenwurm<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Hat als Haupt-Modell verwendet, um die Biologie des Alterns Studie hervor. Da nahezu alle biologischen Subsystem erfährt funktionelle Rückgang mit zunehmendem Alter, das Leben ist span den primären Endpunkt von Interesse, wenn man Gesamtrate des Alterns. In Nematoden, ist Lebensdauer in der Regel als die Anzahl der Tage ein Tier reagiert weiterhin auf äußere Reize definiert. Nematoden können entweder propagierten in flüssigen Medien oder auf festen Medien in Platten, und Techniken zur Messung der Lebensdauer unter beiden Bedingungen entwickelt worden. Hier präsentieren wir eine allgemeine Verfahren zur Messung der Lebensdauer von Nematoden auf einem soliden Wachstum Nematoden Medien gepflegt und gefüttert eine Diät von UV-abgetöteten Bakterien. Diese Verfahren können leicht Assay Lebensdauer unter verschiedenen üblichen Bedingungen angepasst werden, einschließlich einer Diät, die aus lebenden Bakterien, diätetische Einschränkung und RNA-Interferenz.

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media at JoVE.com

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

In diesem Artikel präsentieren wir ein allgemeines Protokoll zur Messung der Lebensdauer von Nematoden auf festen Medien mit UV-getötet bakterielle Lebensmittel erhalten.

Messung Caenorhabditis elegans Life Span auf festen Medien

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The nematode ...

measuring-caenorhabditis-elegans-life-span-on-solid-media

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

29.7K Aufrufe.  University of Washington. In diesem Artikel präsentieren wir ein allgemeines Protokoll zur Messung der Lebensdauer von Nematoden auf festen Medien mit UV-getötet bakterielle Lebensmittel erhalten.

Serie: Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Quantifying Yeast Chronological Life Span by Outgrowth of Aged Cells

The budding yeast Saccharomyces cerevisiae has proven to be an important model organism in the field of aging research 1. The replicative and chronological life spans are two established paradigms used to study aging in yeast. Replicative aging is defined as the number of daughter cells a single yeast mother cell produces before senescence; chronological aging is defined by the length of time cells can survive in a non-dividing, quiescence-like state 2. We have developed a high-throughput method for quantitative measurement of chronological life span. This method involves aging the cells in a defined medium under agitation and at constant temperature. At each age-point, a sub-population of cells is removed from the aging culture and inoculated into rich growth medium. A high-resolution growth curve is then obtained for this sub-population of aged cells using a Bioscreen C MBR machine. An algorithm is then applied to determine the relative proportion of viable cells in each sub-population based on the growth kinetics at each age-point. This method requires substantially less time and resources compared to other chronological lifespan assays while maintaining reproducibility and precision. The high-throughput nature of this assay should allow for large-scale genetic and chemical screens to identify novel longevity modifiers for further testing in more complex organisms.

Chronological aging in yeast refers to the loss of cell viability associated with time in stationary phase. Here we describe a high-throughput method for quantitatively determining yeast chronological life span.

Die Quantifizierung der Hefe Chronologisches Life Span durch Auswachsen von gealterten Zellen

The budding yeast Saccharomyces cerevisiae has proven to be an important model organism in the field of aging research 1. The replicative and ...

Forschung

Biologie

Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The budding yeast Saccharomyces cerevisiae has been used extensively to study the biology of aging, and several determinants of yeast longevity have been shown to be conserved in multicellular eukaryotes, including worms, flies, and mice 1. Due to the lack of easily quantified age-associated phenotypes, aging in yeast has been assayed almost exclusively by measuring the life span of cells in different contexts, with two different life span paradigms in common usage 2. Chronological life span refers to the length of time that a mother cell can survive in a non-dividing, quiescence-like state, and is proposed to serve as a model for aging of post-mitotic cells in multicellular eukaryotes. Replicative life span, in contrast, refers the number of daughter cells produced by a mother cell prior to senescence, and is thought to provide a model of aging in mitotically active cells. Here we present a generalized protocol for measuring the replicative life span of budding yeast mother cells. The goal of the replicative life span assay is to determine how many times each mother cell buds. The mother and daughter cells can be easily differentiated by an experienced researcher using a standard light microscope (total magnification 160X), such as the Zeiss Axioscope 40 or another comparable model. Physical separation of daughter cells from mother cells is achieved using a manual micromanipulator equipped with a fiber-optic needle. Typical laboratory yeast strains produce 20-30 daughter cells per mother and one life span experiment requires 2-3 weeks.

In this article we present a general protocol for measuring the replicative life span of yeast mother cells.

Mess-replikative Lebensspanne in der Hefe

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The budding ...

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor mutations in components of age-regulatory pathways. If these mutations perturb the function of the age-regulatory pathway and therefore alter the lifespan of the entire organism, they provide important mechanistic insights1-3.
Another strategy to investigate the regulation of lifespan is to use small molecules to perturb age-regulatory pathways. To date, a number of molecules are known to extend lifespan in various model organisms and are used as tools to study the biology of aging4-16. The number of molecules identified thus far is small compared to the genetic "toolset" that is available to study the biology of aging.
Caenorhabditis elegans is one of the principle models used to study aging because of its excellent genetics and short lifespan of three weeks. More recently, C.elegans has emerged as a model organism for phenotype based drug screens5,7,16-20 because of its small size and its ability to grow in microtiter plates.
Here we present an assay to measure C.elegans lifespan in 96 well microtiter plates. The assay was developed and successfully used to screen large libraries for molecules that extend C.elegans lifespan7. The reliability of the assay was evaluated in multiple tests: first, by measuring the lifespan of wild type animals grown at different temperatures; second, by measuring the lifespan of mutants with altered lifespans; third, by measuring changes in lifespan in response to different concentrations of the antidepressant Mirtazepine. Mirtazepine has previously been shown to extend lifespan in C.elegans7. The results of these tests show that the assay is able to replicate previous findings from other assays and is quantitative. The microtiter format also makes this lifespan assay compatible with automated liquid handling systems and allows integration into automated platforms.

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

In this protocol we present a method to measure Caenorhabditis elegans lifespan in 96 well microtiter plates.

Messung Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Mikrotiterplatten

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor ...

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide range of species, including mammals. It also causes a decrease in body weight and fertility, as well as lower levels of plasma glucose, insulin, and IGF-1 in these animals. This treatment is often referred to as dietary restriction (DR) or caloric restriction (CR). The nematode Caenorhabditis elegans has emerged as an important model organism for studying the biology of aging. Both environmental and genetic manipulations have been used to model DR and have shown to extend lifespan in C. elegans. However, many of the reported DR studies in C. elegans were done by propagating animals in liquid media, while most of the genetic studies in the aging field were done on the standard solid agar in petri plates. Here we present a DR protocol using standard solid NGM agar-based plate with killed bacteria.

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Here we present a protocol for performing solid plate-based dietary restriction in C. elegans with killed bacteria.

Solide Plate-basierte diätetische Einschränkung in Caenorhabditis elegans</em

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has since been used extensively as a model organism 1. C. elegans possesses key attributes such as simplicity, transparency and short life cycle that have made it a suitable experimental system for fundamental biological studies for many years 2. Discoveries in this nematode have broad implications because many cellular and molecular processes that control animal development are evolutionary conserved 3.
C. elegans life cycle goes through an embryonic stage and four larval stages before animals reach adulthood. Development can take 2 to 4 days depending on the temperature. In each of the stages several characteristic traits can be observed. The knowledge of its complete cell lineage 4,5 together with the deep annotation of its genome turn this nematode into a great model in fields as diverse as the neurobiology 6, aging 7,8, stem cell biology 9 and germ line biology 10. 
An additional feature that makes C. elegans an attractive model to work with is the possibility of obtaining populations of worms synchronized at a specific stage through a relatively easy protocol. The ease of maintaining and propagating this nematode added to the possibility of synchronization provide a powerful tool to obtain large amounts of worms, which can be used for a wide variety of small or high-throughput experiments such as RNAi screens, microarrays, massive sequencing, immunoblot or in situ hybridization, among others. 
Because of its transparency, C. elegans structures can be distinguished under the microscope using Differential Interference Contrast microscopy, also known as Nomarski microscopy. The use of a fluorescent DNA binder, DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole), for instance, can lead to the specific identification and localization of individual cells, as well as subcellular structures/defects associated to them.

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

The easiness of maintaining and propagating the nematode C. elegans make it a nice model organism to work with. The possibility of synchronizing worms allows the work with a significant amount of subjects at the same developmental stage, what facilitates the study of one particular process in many animals.

Grundlegende<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Methoden: Synchronisation und Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

In this protocol, we present the required materials, and the procedure for making modified&#160;C. elegans&#160;Habituation and Reproduction media (mCeHR). Additionally, the steps for exposing and acclimatizing C. elegans grown on E. coli to axenic liquid media are described. Finally, downstream experiments that utilize axenic C. elegans illustrate the benefits of this procedure. The ability to analyze and determine C. elegans&#160;nutrient requirement was illustrated by growing N2 wild type worms in axenic liquid media with varying heme concentrations. This procedure can be replicated with other nutrients to determine the optimal concentration for worm growth and development or, to determine the toxicological effects of drug treatments. The effects of varied heme concentrations on the growth of wild type worms were determined through qualitative microscopic observation and by quantitating the number of worms that grew in each heme concentration. In addition, the effect of varied nutrient concentrations can be assayed by utilizing worms that express fluorescent sensors that respond to changes in the nutrient of interest. Furthermore, a large number of worms were easily produced for the generation of transgenic C. elegans using microparticle bombardment.

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

C. elegans is usually grown on solid agar plates or in liquid cultures seeded with E. coli. To prevent bacterial byproducts from confounding toxicological and nutritional studies, we utilized an axenic liquid medium, CeHR, to grow and synchronize a large number of worms for a range of downstream applications.

Die Züchtung<em&gt; Caenorhabditis elegans</em &gt; In Axenic Flüssige Medien und Erstellung von transgenen Worms durch Mikropartikelbeschuss

In this protocol, we present the required materials, and the procedure for making modified&#160;C. elegans&#160;Habituation and Reproduction media ...

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic human disorders, including cardiovascular and neurodegenerative diseases, diabetes, aging, and cancer. Therefore, it is important to study oxidative stress not only in cell systems but also using whole organisms. C. elegans is an attractive model organism to study the genetics of oxidative stress signal transduction pathways, which are highly evolutionarily conserved.
Here, we provide a protocol to measure oxidative stress resistance in C. elegans in liquid. Briefly, ROS-inducing reagents such as paraquat (PQ) and H2O2 are dissolved in M9 buffer, and solutions are aliquoted in the wells of a 96 well microtiter plate. Synchronized L4/young adult C. elegans animals are transferred to the wells (5-8 animals/well) and survival is measured every hour until most worms are dead. When performing an oxidative stress resistance assay using a low concentration of stressors in plates, aging might influence the behavior of animals upon oxidative stress, which could lead to an incorrect interpretation of the data. However, in the assay described herein, this problem is unlikely to occur since only L4/young adult animals are being used. Moreover, this protocol is inexpensive and results are obtained in one day, which renders this technique attractive for genetic screens. Overall, this will help to understand oxidative stress signal transduction pathways, which could be translated into better characterization of oxidative stress-associated human disorders.

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

C. elegans is an attractive model organism to study signal transduction pathways involved in oxidative stress resistance. Here we provide a protocol to measure oxidative stress resistance of C. elegans animals in liquid phase, using several oxidizing agents in 96 well plates.

Mess Oxidativer Stress Widerstandsrat<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; In 96-Well-Mikrotiterplatten

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic ...

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, sequester or eliminate damaged proteins to maintain a healthy proteome, thus ensuring cellular proteostasis and preventing further protein damage. Because of redundant functions within the proteostasis network, screening for detectable phenotypes using knockdown or mutations in chaperone-encoding genes in the multicellular organism Caenorhabditis elegans results in the detection of minor or no phenotypes in most cases. We have developed a targeted screening strategy to identify chaperones required for a specific function and thus bridge the gap between phenotype and function. Specifically, we monitor novel chaperone interactions using RNAi synthetic interaction screens, knocking-down chaperone expression, one chaperone at a time, in animals carrying a mutation in a chaperone-encoding gene or over-expressing a chaperone of interest. By disrupting two chaperones that individually present no gross phenotype, we can identify chaperones that aggravate or expose a specific phenotype when both perturbed. We demonstrate that this approach can identify specific sets of chaperones that function together to modulate the folding of a protein or protein complexes associated with a given phenotype.

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

To study chaperone-chaperone and chaperone-substrate interactions, we perform synthetic interaction screens in Caenorhabditis elegans using RNA interference in combination with mild mutations or over-expression of chaperones and monitor tissue-specific protein dysfunction at the organismal level.

Verwendung von Caenorhabditis elegans zum Screening auf gewebespezifische Chaperon-Interaktionen

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, ...

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits obesity and many associated diseases including cardiovascular disorders, type II diabetes, and cancer. To advance the current understanding of lipid metabolic regulation, quantitative methods to precisely measure in vivo lipid storage levels in time and space have become increasingly important and useful. Traditional approaches to analyze lipid storage are semi-quantitative for microscopic assessment or lacking spatio-temporal information for biochemical measurement. Stimulated Raman scattering (SRS) microscopy is a label-free chemical imaging technology that enables rapid and quantitative detection of lipids in live cells with a subcellular resolution. As the contrast is exploited from intrinsic molecular vibrations, SRS microscopy also permits four-dimensional tracking of lipids in live animals. In the last decade, SRS microscopy has been widely used for small molecule imaging in biomedical research and overcome the major limitations of conventional fluorescent staining and lipid extraction methods. In the laboratory, we have combined SRS microscopy with the genetic and biochemical tools available to the powerful model organism, Caenorhabditis elegans, to investigate the distribution and heterogeneity of lipid droplets across different cells and tissues and ultimately to discover novel conserved signaling pathways that modulate lipid metabolism. Here, we present the working principles and the detailed setup of the SRS microscope and provide methods for its use in quantifying lipid storage at distinct developmental timepoints of wild-type and insulin signaling deficient mutant C. elegans.

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Stimulated Raman scattering (SRS) microscopy allows selective, label-free imaging of specific chemical moieties and it has been effectively employed to image lipid molecules in vivo. Here, we provide a brief introduction to the principle of SRS microscopy and describe methods for its use in imaging lipid storage in Caenorhabditis elegans.

Markierungsfreie Bildgebung der Lipidspeicherdynamik in Caenorhabditis elegans mit stimulierter Raman-Streumikroskopie

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits ...

High-Throughput Screening of Microbial Isolates with Impact on Caenorhabditis elegans Health

With its small size, short lifespan, and easy genetics, Caenorhabditis elegans offers a convenient platform to study the impact of microbial isolates on host physiology. It also fluoresces in blue when dying, providing a convenient means of pinpointing death. This property has been exploited to develop high-throughput label-free C. elegans survival assays (LFASS). These involve time-lapse fluorescence recording of worm populations set in multiwell plates, from which population median time of death can be derived. The present study adopts the LFASS approach to screen multiple microbial isolates at once for the effects on C. elegans susceptibility to severe heat and oxidative stresses. Such microbial screening pipeline, which can notably be used to prescreen probiotics, using severe stress resistance as a proxy for host health is reported here. The protocol describes how to grow both C. elegans gut microbiota isolate collections and synchronous worm populations in multiwell arrays before combining them for the assays. The example provided covers the testing of 47 bacterial isolates and one control strain on two worm strains, in two stress assays in parallel. However, the approach pipeline is readily scalable and applicable to the screening of many other modalities. Thus, it provides a versatile setup to rapidly survey a multiparametric landscape of biological and biochemical conditions that impact C. elegans health.

High-Throughput Screening of Microbial Isolates with Impact on Caenorhabditis elegans Health

Gut microbes may positively or negatively impact the health of their host via specific or conserved mechanisms. Caenorhabditis elegans is a convenient platform to screen for such microbes. The present protocol describes high-throughput screening of 48 bacterial isolates for impact on nematode stress resistance, used as a proxy for worm health.

Hochdurchsatz-Screening mikrobieller Isolate mit Auswirkungen auf die Gesundheit von Caenorhabditis elegans

With its small size, short lifespan, and easy genetics, Caenorhabditis elegans offers a convenient platform to study the impact of microbial isolates on ...

Methods Article

Messung Caenorhabditis elegans Life Span auf festen Medien