FACS Enrichment of Zebrafish Gut Cell Suspension for scRNAseq

Pour effectuer le tri cellulaire activé par fluorescence, ou FACS, sur les cellules intestinales isolées des larves de poisson-zèbre, utilisez l’échantillon de larves entières de type sauvage pour définir les portes de la population de cellules triées en enregistrant 3 000 cellules sur le cytomètre en flux. Utilisez une buse de 100 microns et réglez la précision de tri sur Pureté à 4 voies. Mettez le tube de prélèvement contenant 200 microlitres de PBS avec 5% de sérum de veau fœtal dans le télécopieur.

Chargez la suspension cellulaire préparée à partir des intestins isolés et, après avoir exclu les doublets dans les cellules mortes, triez les cellules individuelles vivantes ou DAPI-négatives dans le tube de prélèvement. Conservez le tube de prélèvement sur de la glace après le tri des cellules, en utilisant un contrôle de viabilité avec du bleu de trypan. Comptez le nombre de cellules dans la suspension à l’aide d’un hémocytomètre.

Les cellules sont maintenant prêtes à être traitées pour le séquençage de l’ARN unicellulaire. Utilisez environ 20 000 cellules par échantillon.