Pour induire la formation de la crête neurale, remplacez le milieu de maintenance de la culture de cellules souches pluripotentes humaines par 200 microlitres de milieu A par centimètre carré de la surface du puits. Incuber la culture sous une supplémentation de 5% de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius pendant deux jours. Aspirez doucement le milieu des cellules de confluence à 100 % contenant le puits, puis pipetez environ 200 microlitres de milieu B par centimètre carré de la surface du puits.

Le quatrième jour, nourrissez les cellules avec 200 microlitres de milieu B par centimètre carré de la surface du puits. Incuber les cellules pendant deux jours supplémentaires, puis remplacer le milieu B par 400 microlitres par centimètre carré de milieu C.