Per indurre la formazione della cresta neurale, sostituire il terreno di mantenimento della coltura di cellule staminali pluripotenti umane con 200 microlitri di terreno A per centimetro quadrato della superficie del pozzetto. Incubare la coltura con un'integrazione di anidride carbonica al 5% a 37 gradi Celsius per due giorni. Aspirare delicatamente il terreno dalle celle di confluenza al 100% ben contenute, quindi pipettare circa 200 microlitri di terreno B per centimetro quadrato di superficie del pozzetto.
Il quarto giorno, nutri le cellule con 200 microlitri di B medio per centimetro quadrato di superficie del pozzo. Incubare le cellule per altri due giorni, quindi sostituire il terreno B con 400 microlitri per centimetro quadrato di terreno C.
