Extraction d’un liquide de lavage intercellulaire à partir d’apoplaste de blé pour l’analyse d’enzymes liées à la paroi cellulaire

Pour commencer, rincez deux fois les morceaux de feuilles de blé dans de l’eau distillée pour éliminer toute contamination cytosolique des extrémités coupées. Insérez les morceaux de feuilles dans un tube de verre à paroi épaisse contenant un tampon d’extraction. À l’aide d’une pompe à jet d’eau, appliquez une infiltration sous vide pendant cinq minutes pour imprégner les feuilles avec le tampon d’extraction.

Retirez les morceaux de feuilles du tube en verre et séchez-les avec une serviette en papier. Insérez les morceaux de feuilles séchées verticalement dans un tube à centrifuger pré-refroidi équipé d’un disque perforé. Centrifugez les feuilles à 500G pendant 10 minutes à 4 degrés Celsius.

À l’aide d’une pipette de 100 microlitres, transférez le surnageant dans un tube de micro-centrifugeuse de 1,5 millilitre pré-refroidi. Conservez le surnageant collecté à moins 20 degrés Celsius jusqu’à l’utilisation.