Pour commencer, récoltez les graines des plantes mutantes et X134, et laissez-les sécher naturellement à température ambiante jusqu’à ce que le taux d’humidité atteigne environ 13 à 15%Après avoir activé la machine à éplucher, introduisez 10 g de grains de riz dans la mangeoire pour retirer efficacement la coquille de la glume. Transférez les graines de riz pelées dans le moulin à riz et faites fonctionner la machine pendant 60 secondes pour éliminer la couche d’aleurone donnant du riz poli. Ensuite, placez le riz poli dans le broyeur à tissus.
Ajustez la fréquence de broyage à 60 Hz et faites fonctionner le moulin pendant 15 secondes pendant deux cycles pour produire de la poudre de riz. Déposez la poudre de riz moulue dans une boîte de Pétri et placez-la dans un four préchauffé réglé à 37 °C pendant 12 heures. Ajoutez ensuite 100 mg de poudre de riz dans un tube de microcentrifugation de 2 ml et tapotez doucement le tube.
Ajoutez 180 L d’eau purifiée dans le tube et faites bouillir l’échantillon dans un bain-marie pendant 20 minutes. Une fois l’échantillon refroidi, introduisez 4 ml d’AMG contenant de l’alpha-amylase pancréatique dans le tube. Ensuite, mélangez le contenu sur un oscillateur vortex et incubez le tube à 37 °C pendant 16 heures avec une agitation continue.
Maintenant, ajoutez 4 ml d’éthanol et mélangez l’échantillon à l’aide d’un vortex. Ensuite, centrifugez le tube à 1 500 G pendant 10 minutes. Après avoir décanté le surnageant, ajoutez 2 ml d’éthanol à 50 %, puis 6 ml d’IMS à 50 % dans le tube et mélangez.
Après avoir centrifugé le tube, versez soigneusement le surnageant et retournez le tube pour drainer l’excès de liquide. En plaçant le tube dans un bain de glace, ajoutez-y 2 ml d’hydroxyde de potassium à 2 molaires et remuez l’échantillon pendant 20 minutes pour remettre en suspension le troupeau et dissoudre l’amidon résistant. Ajouter 8 ml de tampon d’acétate de sodium de 1,2 molaire ajusté à pH 3,8 dans le tube et mélanger à l’aide d’un agitateur magnétique.
Ensuite, introduisez immédiatement 0,1 ml d’AMG dans le mélange et mélangez soigneusement. Incuber l’échantillon pendant 30 minutes à 50 °C dans un bain-marie avec mélange intermittent à l’aide d’un vortex. Après l’incubation, centrifugez le tube à 1 500 G pendant 10 minutes.
Transférez maintenant 0,1 mL du surnageant dans un tube de verre frais. Ajouter 3 ml de réactif de glucose oxydase peroxydase et incuber l’échantillon à 50 °C pendant 20 minutes. Pipeter soigneusement 200 L de chaque solution d’échantillon à blanc et solution étalon dans une plaque à 96 puits.
Mesurez l’absorbance de chaque échantillon à 510 nm par rapport à la solution à blanc et calculez la teneur en amidon résistant à l’aide de la formule. Enfin, présentez aux participants 50 g de riz préparé avec 200 mL d’eau. Après le repas, prélevez des échantillons de sang veineux à différents moments pour effectuer une analyse de la glycémie.
La teneur en amidon résistant était significativement plus élevée chez le mutant SBEIIb avec 5,2 % par rapport au type sauvage. La consommation du riz préparé a entraîné une réponse glycémique plus lente et réduite à 15 et 30 minutes, avec des réductions de 9,7 % et 3,7 % respectivement.
