Les auteurs tiennent à remercier Andrew J Dunn, un étudiant de premier cycle de recherche exceptionnels dans notre laboratoire, pour son aide technique et les soins aux animaux. L&#39;Institut National de la Santé et des subventions HD058834 l&#39;Université du Missouri Sciences Life Fellowship financé ce travail.

Pré-Chirurgie Instruments / Matériaux <ul><li> Pince coupante / pince </li><li> Gauze 2 x 2 &quot;tapis </li><li> Coussin chauffant </li><li> Bâtons de nitrate d&#39;argent </li><li> Gants chirurgicaux stériles </li><li> L&#39;inhalation isoflurane anesthésie </li><li> Gluconate de chlorhexidine à 4% (antiseptique lavage chirurgical) </li><li> Stérile en acier chirurgical de suture 2-0 </li><li> 25 X 5 / 8 Une aiguille de la jauge (autoclave) </li><li> Hémostatique (autoclave) </li><li> Sutures en acier chirurgical </li></ul> Procédure de chirurgie <ol><li> Créer un champ stérile. Suivez la procédure stérile. </li><li> Anesthetize souris avec 2 - 3% d&#39;isoflurane. </li><li> Placez la souris sur le coussin chauffant. </li><li> Frotter la queue avec une solution de chlorhexidine. </li><li> Localisez l&#39;espace e 5, 6, ou 7 intervertébral (entre deux bosses osseuses sur la queue, commencez à compter de la fin des poils du corps, à la base de la queue). </li><li> Utilisez hémostatique et d&#39;une aiguille 25G de faire un trou entre deux vertèbres, dans l&#39;espace intervertébral. </li><li> Utilisez la pince coupante pour couper le fil de suture en acier de 10 cm de long. </li><li> Retirer l&#39;aiguille et insérez de suture en acier à travers le trou de 5 cm de suture à chaque extrémité de la queue. </li><li> Chaque côté de la queue doit avoir + 5 cm de suture. </li><li> Placez le pouce sur la pointe de la queue. </li><li> Utilisez votre main libre et le vent de la suture en acier sur le bout de votre pouce et tordre les extrémités pour former une grande boucle. La partie la plaie ou circulaire devrait être + 3 mm de long. </li><li> Enlevez votre pouce. </li><li> Pince un brin de suture avec la pince hémostatique et le plier en une petite boucle, la fin de laquelle est attaché aussi près que possible de la torsion sur la boucle d&#39;origine grands. </li><li> Coupez l&#39;excédent de câble, et plier le fil torsadé en arrière. </li><li> S&#39;il ya un saignement excessif, vous pouvez l&#39;arrêter avec les bâtons de nitrate d&#39;argent. </li><li> Éteignez la souris isoflurane et le placer dans une cage seule maison pour récupérer pendant 5-7 jours avant le déchargement des membres postérieurs. Les anneaux de la queue s&#39;emmêler si plus d&#39;une souris est logés ensemble. </li></ol> 1. Déchargement des membres postérieurs Matériaux <ul><li> Taille 10-24 X 4 vis, un par animal. </li><li> Nylon Taille écrou de 10 à 24, un par animal. </li><li> Aile de noix de taille 10 x 24, deux par animal. </li><li> Rondelle de taille ¼ X 1, deux par animal. </li><li> Pêche pivotant avec la taille de mousqueton # 6, 1-11/16 &quot;, et un animal par. </li><li> Machine à coudre en métal canette. Un animal par. </li><li> Petit trombone en forme de S pour le crochet, un par animal </li><li> Pince. </li><li> 2 x 2 &quot;gaze. </li><li> 2 &quot;noir pinces liant papier. </li><li> Duct Tape / lab bande. </li><li> 1-3/8 &quot;barre en acier plaqué fente qui s&#39;étend légèrement au-delà sur toute la longueur de la cage </li><li> 50cm x 40cm x 20cm en cage (cage rat). </li><li> Bouteille d&#39;eau avec un tube coudé. </li><li> Fil d&#39;acier inoxydable, en forme de U pour soutenir une bouteille d&#39;eau. </li></ul> Configuration Cage <ol><li> Poser les 1-38 &quot;barre en acier plaqué fente sur le dessus de la cage, et scotchez-temporellement vers le bas avec du ruban adhésif. </li><li> Vis 1 écrou à la vis de la machine, insérer une rondelle, et insérez le creux Vis machine à la plaque d&#39;acier fendue ± 15 cm du bord de la cage. </li><li> Ajouter une autre rondelle et l&#39;écrou papillon. Serrer les écrous à oreilles à la fois, mais ne serrez pas complètement, comme il sera nécessaire de faire des ajustements ultérieurs. </li><li> Insérez la vis machine à travers le trou central de la canette. </li><li> Pour empêcher la bobine de tomber, vis-écrou en nylon à l&#39;extrémité de la vis de la machine. La canette doit pivoter librement. </li><li> Insérez le mousqueton de l&#39;émerillon de pêche à travers la partie inférieure de la canette. </li><li> Utilisez des pinces pour former un crochet en forme de S à partir du trombone. (Coupe 2cm du trombone pour former un crochet). </li><li> Insérez une extrémité de l&#39;hameçon en forme de S à travers le trou de l&#39;émerillon de pêche et une pincée le fermer avec les pinces. </li><li> Placez le fil en forme de U, parallèlement à la vis de la machine, à l&#39;intérieur de la partie cage, et plier les extrémités de retour pour soutenir une pleine bouteille d&#39;eau. </li><li> Insérer la bouteille d&#39;eau dans le fil en forme de U, avec la spicket vers le bas, mais pas toucher le fond. </li><li> Pliez les deux «liant pince ouverte, de sorte qu&#39;ils ne peuvent pas arrêter à proximité. Juste assez de tension pour tenir 3 ou 4 morceaux de nourriture en elle sans qu&#39;elle tomber. Ceci est la prévention de la force de la pince de la trituration des aliments, ou à réprimer le le nez de la souris. </li><li> Placer 3 ou 4 morceaux de rongeur chow dans la pince de liant. </li></ol> Déchargement du membre postérieur de la souris <ol><li> Insérez l&#39;extrémité ouverte du crochet en forme de S à travers le petit anneau de l&#39;anneau de la queue. </li><li> Ajustez la hauteur de la souris en serrant ou desserrant l&#39;écrou de l&#39;aile inférieure de la vis de la machine. Les extrémités inférieures ne doit pas être mise en charge. Une fois la hauteur optimale est obtenue serrer l&#39;écrou supérieur. </li><li> Repositionner la bouteille d&#39;eau, et de fil en forme de U de sorte que la souris ne peut pas monter sur le spicket avec ses membres postérieurs.<html> Fixez la bouteille d&#39;eau avec du ruban adhésif sur le côté de la cage. </li><li> Position de la pince liant avec de la nourriture sur le fond de la cage de sorte que la souris ne peut pas monter sur elle, elle ruban adhésif avec du ruban adhésif. </li><li> Répétez la même procédure si plus d&#39;un animal est déchargé des membres postérieurs de l&#39;autre côté de la cage. Chambre deux animaux par cage; l&#39;espace des animaux afin qu&#39;ils puissent se touchent presque. </li><li> Utilisez le 2 X 2 gaze pour enrouler la queue de la souris sur l&#39;émerillon de poisson. Utiliser un petit morceau de ruban à enrouler autour de la gaze, la sécurisation de la gaze à la queue. Cette étape est importante pour éviter la queue de la baisse tombantes, conduisant à l&#39;accumulation de sang dans l&#39;extrémité de la queue et que la queue se nécroser. </li><li> Ajouter une petite quantité de la literie en torchis à la cage. Ne pas ajouter de la litière trop sinon la souris à partir d&#39;un monticule de literie et de tentative de chargement postérieurs sur la literie. </li></ol> 2. Les résultats représentatifs: Pour établir le succès de la technique de la queue-anneau HU, nous avons mesuré le poids corporel des animaux avant la chirurgie anneau de la queue, et avant et après HU et la récupération, la masse du muscle soléaire, et la masse des surrénales dans tous les groupes. Le poids corporel des souris à travers l&#39;expérience sont présentés dans la figure 1. Le poids corporel des souris avant la chirurgie anneau de la queue (24,7 ± 3,5 g) n&#39;étaient pas significativement différents après 5 jours de la reprise de la chirurgie anneau de la queue (24,3 ± 2,9 g) avant de HU. N&#39;a pas non plus le poids corporel diminue considérablement immédiatement après 14 jours de HU (22,7 ± 1,9 g), 28 jours d&#39;HU (21,3 + 2,1 g) ou de récupération après 3 jours à partir de HU (24,0 ± 1,8 g). Bien HU pour les 14 et 28 jours a entraîné une légère perte (-6,8% et 12%) mais non significative de la masse corporelle, les souris complètement récupéré de leur pré-HU poids après 3 jours de récupération. La consommation alimentaire des souris contrôles ambulatoires et les souris HU est montré dans la figure 3. La ration alimentaire moyenne n&#39;était pas différente chez les souris HU plus de 28 jours par rapport aux contrôles. Nous avons observé une atrophie du muscle soléaire significatifs suivants HU pour les 14 et 28 jours (-39,1%, -46,6% et) indiquant une procédure efficace HU (figure 2). En outre, ce degré d&#39;atrophie est compatible avec les valeurs de la littérature prévu pour 2-4 semaines de HU 2, 7, 8. Après trois jours de la reprise du HU soléaire de masse significativement augmenté à 74% des valeurs de contrôle. Soleus masse dans le groupe de reprise a été significativement plus importante que les groupes HU fois, mais toujours beaucoup moins que les animaux témoins ambulatoires. Poids des surrénales a été mesurée comme un indicateur du stress des animaux; les glandes surrénales gauche et droite ont été excisés et pesés. Les poids moyens étaient comparables pour le contrôle et la souris HU souris dans tous les groupes (figure 4). Auparavant chez les rats nous avons montré que le taux de réussite pour le nombre d&#39;animaux au début de HU par rapport au nombre d&#39;animaux qui ont rempli HU sans sortir de l&#39;appareil de suspension (en raison de mâcher des animaux à travers le ruban queue de traction) était de 10 à de 12 en utilisant la technique de Morey-Holton 1. Aucune des souris (n = 54) dans cette étude jamais descendu de cette suspension avant la fin de la période de HU. Nous n&#39;avons cependant, ont une souris qui qui a développé une queue d&#39;une inflammation sévère. Lorsque l&#39;inflammation est devenu évident, nous avons retiré l&#39;anneau de queue pour permettre à la zone enflammée à guérir, et ensuite placé un autre anneau de la queue-de compléter la durée de la HU. Dans le passé, lorsque nous avons utilisé la méthode de Morey-Holton de HU, nous éliminent généralement 1-2 souris / groupe parce qu&#39;ils sortent de l&#39;appareil de suspension. Avec la méthode des sentiers torique n&#39;y avait pas d&#39;épisodes de souris par inadvertance sortant de l&#39;appareil HU pendant la période de HU pour 14 ou 28 jours (n = 54 souris). <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1. Changements de poids corporel (moyenne ± écart type). Abréviations: CON: les souris de contrôle de poids-roulement (n = 76); pré-HU: toutes les souris avant de HU (n = 54); HU14: hindlimb souris déchargée pendant 14 jours (n = 34); HU28: hindlimb souris déchargés 28 jours (n = 20); REC: souris hindlimb déchargé autorisé à récupérer la cage pour 3 jours (n = 22). Aucune différence significative du poids corporel ont été observées entre les groupes. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig2.jpg" alt="Figure 2" /> Figure 2. Atrophie du muscle soléaire (moyenne ± écart type). Abréviations: CON: les souris de contrôle de poids-roulement (n = 76); HU14: hindlimb souris déchargée pendant 14 jours (n = 34); HU28: hindlimb souris déchargée pendant 28 jours (n = 20) et REC: souris hindlimb déchargé autorisé à la cage de récupérer pendant 3 jours (n = 22). * Significativement différent (p &lt;0,001) que de poids-roulement de contrôle (CON). δSignificantly différentes (p &lt;0,01) que les groupes HU deux. 467fig3.jpg &quot;alt =&quot; Figure 3 &quot;/&gt; Consommation alimentaire Figure 3. (Moyenne ± écart type). La ration alimentaire moyenne (g / jour) pendant poids du corps et des membres postérieurs déchargement. Abréviations: les souris de contrôle de poids-roulement (n = 76); HU: souris hindlimb unloaded14 - 28 jours. Aucune différence significative entre les groupes CON et HU ont été observés. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig4.jpg" alt="Figure 4" /> Figure 4. Masse surrénalienne (moyenne ± écart type). Abréviations: CON: les souris de contrôle de poids-roulement (n = 76); HU14: hindlimb souris déchargée pendant 14 jours (n = 34); HU28: hindlimb souris déchargée pendant 28 jours (n = 20) et REC: souris hindlimb déchargé autorisé à la cage de récupérer pendant 3 jours (n = 22). Aucune différence significative n&#39;a été observée entre les groupes.

<ol>
	<li>Brown, M., Foley, A. M., Hasser, E. M., Foley, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+method+for+hindlimb+unweighting.">An alternative method for hindlimb unweighting.</a> J Gravitational Physiol. 12, 43-50 (2005).</li><li>Fitts, R. H., Metzger, J. M., Riley, D. A., Unsworth, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+disuse:+a+comparison+of+hindlimb+suspension+and+immobilization.">Models of disuse: a comparison of hindlimb suspension and immobilization.</a> J Appl Physiol. 60, 1946-1953 (1986).</li><li>Ingalls, C. P., Warren, G. L., Armstrong, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Ca2++transients+in+mouse+soleus+muscle+after+hindlimb+unloading+and+reloading.">Intracellular Ca2+ transients in mouse soleus muscle after hindlimb unloading and reloading.</a> Journal of Applied Physiology. 87, 386-390 (1999).</li><li>Morey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spaceflight+and+bone+turnover:+correlation+with+a+new+rat+model+of+weightlessness.">Spaceflight and bone turnover: correlation with a new rat model of weightlessness.</a> BioScience. 29, 168-172 (1979).</li><li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindlimb+unloading+of+growing+rats:+a+model+for+predicting+skeletal+changes+during+space+flight.">Hindlimb unloading of growing rats: a model for predicting skeletal changes during space flight.</a> Bone. 22, 83-88 (1998).</li><li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindlimb+unloading+rodent+model:+technical+aspects.">Hindlimb unloading rodent model: technical aspects.</a> J Appl Physiol. 92, 1367-1377 (2002).</li><li>Thomason, D. B., Booth, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrophy+of+the+soleus+muscle+by+hindlimb+unweighting.">Atrophy of the soleus muscle by hindlimb unweighting.</a> J Appl Physiol. 68, 1-12 (1990).</li><li>Thomason, D. B., Herrick, R. E., Surdyka, D., Baldwin, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+soleus+muscle+myosin+expression+during+hindlimb+suspension+and+recovery.">Time course of soleus muscle myosin expression during hindlimb suspension and recovery.</a> J Appl Physiol. 63, 130-137 (1987).</li></ol>

Nous avons évalué une méthode alternative de souris hindlimb déchargement, dont nous avons déterminé à être un grand succès. La méthode la queue-anneau tel que décrit ici a été utilisé pour la suspension des membres postérieurs à long terme, et d&#39;étudier HU récupération après. Sous chacune de ces conditions, il n&#39;y avait aucune preuve d&#39;incapacité à s&#39;adapter comme en témoigne la prise alimentaire stable, le poids corporel et du poids des surrénales de la souris. Cette technique queue anneau HU est facile à réaliser et peut être facilement intégrée à la pratique chirurgicale très peu. Il ya plusieurs avantages de la queue-anneau méthode par rapport à la traditionnelle Morey-Holton 5, 6 méthode. Tout d&#39;abord, la peau et du site d&#39;implantation anneau sur la queue qui sont toujours visibles, donc si des problèmes surviennent, il est évident immédiatement, non pas seulement à la fin de la période de suspension. Deuxièmement, les animaux ne sont pas en mesure de sortir de l&#39;appareil de suspension à tout moment pendant HU, évitant la nécessité de rendre une décision de savoir s&#39;il faut garder une souris ou pas dans l&#39;ensemble des données. Par ailleurs, les souris ne se soucient pas de l&#39;appareil ring et quand ils sont libérés de HU pour la reprise, ils n&#39;ont pas altérer leur queue, permettant une phase de reprise transparente après HU. Enfin, des membres postérieurs des souris déchargé avec la méthode tail-anneau de maintenir leur poids corporel supérieure des membres postérieurs des souris déchargé par le Morey-Holton queue de traction technique. Dans nos mains après 14 jours d&#39;HU, nous avons observé une légère perte (-6,8%) mais non significative de la masse corporelle. Alors Ingalls et al. Ont observé une diminution significative de -12% en poids corporel chez la souris après 14 jours d&#39;HU par la méthode de Morey-Holton 3. Bien Ingalls n&#39;ont pas fait état du poids des surrénales, il semble que notre queue anneau procédé confère moins de stress sur la souris (poids des surrénales chez nos souris HU ne sont pas différents que les contrôles) et un meilleur entretien du poids du corps pendant toute la période hindlimb déchargement. En résumé, une méthode de l&#39;anneau queue de membre postérieur déchargement a été développé et testé sur des souris HU pour les 14 et 28 jours, et sur des souris retourné à la récupération cage pour 3 jours après HU. Sur la base du poids des surrénales, la masse corporelle et la prise alimentaire, les souris semblent bien adaptés à l&#39;appareil d&#39;arrière-ring. Les membres postérieurs queue bague de déchargement méthode est utile, simple alternative à la technique traditionnelle de Morey-Holton hindlimb déchargement.

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Wire cutters/pliers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ace Hardware </td>
<td>84-056</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gauze</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>22-037-901</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sunbeam</td>
<td>Z-1228-001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silver nitrate applicators</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ARZOL</td>
<td>0001-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane,USP</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Novaplus</td>
<td>NDC 0409-3292-49</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chlorhexidine Gluconate 4%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Purdue Products L.P</td>
<td>NDC 67618-200-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile 2-0 surgical steel suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ethicon</td>
<td>SS-28</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25 X 5/8 A gauge needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Terumo</td>
<td>NN 2516R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemostat/ needle holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>12500-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Size 10-24 X 4 machine screws</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>90272</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nylon lock nut size 10 X 24</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>180141</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wing nut size 10 X 24</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>180243</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fender Washer size &frac14; X 1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>290012</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fishing swivel with snap hook size #6, 1-11/16&#x201D;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bass Pro Shop</td>
<td>38-481-554-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal sewing machine bobbin.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Singer</td>
<td>45785</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paper clip</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>221720</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2&#x201D; black paper binder clamps.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>308957</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scotch Multi-Use Duct Tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>790710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-3/8&#x201D; Plated slotted steel bar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Home Depot</td>
<td>548932</td>
<td>Extends slightly beyond the full length of the cage</td>
</tr>
<tr>
<td>50cm X 40cm X 20cm cage (rat cage</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative Design Manufacturing</td>
<td>RC88D-PC</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water Bottle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative Design Manufacturing</td>
<td>WB16FS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless Steel wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Small Parts, Inc</td>
<td>SWX-4029</td>
<td>U-shaped wire to support water bottle</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

an alternant method to the traditional nasa hindlimb unloading model in mice

Le Morey-Holton hindlimb déchargement (HU) est une méthode largement acceptée National Aeronautics and Space Administration (NASA) basé au sol modèle pour étudier désuétude-atrophie chez les rongeurs 4-6. Notre étude a évalué une méthode alternant à l&#39;étalon-or de Morey-Holton HU queue de traction technique chez la souris. Cinquante-quatre souris femelles (4-8 mo.) Ont été HU pendant 14 jours (n = 34) ou 28 jours (n = 20). Récupération de Hu a été évaluée après 3 jours de marche en cage normal après HU (n = 22). Âgés de souris apparié (n = 76) a servi de port de poids contrôles. Avant HU un anneau de queue a été formée avec un fil d&#39;acier 2-0 chirurgical stérile qui a été adoptée par la 5 ème, 6 ème, 7 ème ou de l&#39;espace disque intervertébral et façonné dans un anneau à partir de laquelle les souris ont été suspendues. Lieu vertébrale pour la queue-anneau a été sélectionné pour un juste équilibre entre le poids corporel des animaux, sans interférer avec la défécation. Nous avons déterminé le succès de cette nouvelle technique HU en évaluant le poids corporel avant et après HU, degré d&#39;atrophie du soléaire, et HU masse surrénalienne suivantes. Le poids corporel des souris avant HU (24,3 ± 2,9 g) n&#39;a pas significativement baisser immédiatement après 14j de HU (22,7 ± 1,9 g), 28d de HU (21,3 + 2,1 g), ou après trois jours de récupération (24,0 ± 1,8 g) . La masse du muscle soléaire significativement diminué (-39,1%, -46,6% et) après HU pendant 14 jours et 28 jours respectivement (p &lt;0,001). Après trois jours de la reprise de masse soléaire significativement augmenté à 74% des valeurs de contrôle. Poids des glandes surrénales de souris HU ne sont pas différents par rapport aux souris témoins. Le succès de notre méthode HU roman est attestée par le maintien du poids corporel des animaux, comparables poids des glandes surrénales, et l&#39;atrophie soléaire suivantes HU, correspondant aux valeurs littérature attendus 2, 7, 8. Les principaux avantages de cette méthode HU comprennent: 1) la facilité d&#39;un examen lors de la queue de suspension; 2) une probabilité moindre de queue cyanosée, enflammée, et / ou nécrotiques fréquemment observés avec la queue de la copie privée et HU; 3) pas de possibilité de mâcher des souris de la traction bande et sortir de l&#39;appareil de suspension et 4) une récupération rapide et de l&#39;activité normale en cage immédiatement après HU.

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An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

Nous avons développé un modèle de patte postérieure alternant le déchargement chez la souris. Le principal avantage de notre membre postérieur déchargement queue anneau de méthode au cours de la traditionnelle Morey-Holton queue de traction technique est une procédure simple et directe qui minimise le stress sur l&#39;animal.

Une méthode alternant le modèle traditionnel de la NASA hindlimb déchargement chez la souris

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying ...

an-alternant-method-to-traditional-nasa-hindlimb-unloading-model

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Biology

20.1K vues.  University of Missouri, Columbia. Nous avons développé un modèle de patte postérieure alternant le déchargement chez la souris. Le principal avantage de notre membre postérieur déchargement queue anneau de méthode au cours de la traditionnelle Morey-Holton queue de traction technique est une procédure simple et directe qui minimise le stress sur l'animal.

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Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

Modèle murin d&#39;ischémie des membres postérieurs

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Recherche

Biologie

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some plant cells have rigid cell walls, tough fibers and crystals (calcium oxalate, silica, etc.), and high water content that often disrupt tissue integrity during plant tissue sectioning.
This study establishes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method. This protocol modifies a paraffin-based sectioning technique and improves the integrity of tissue sections from different plants. Plant tissues were embedded in paraffin before sectioning in a cryostat at -16 &#176;C. Sectioning under low temperature hardened the paraffin blocks, reduced tearing and scratching, and improved tissue integrity significantly. This protocol was successfully applied to calcium oxalate-rich Phalaenopsis orchid tissues as well as recalcitrant tissues such as reproductive organs and leaves of rice, maize, and wheat. In addition, the high quality of tissue sections from Hybrid-Cut could be used in combination with in situ hybridization (ISH) to provide spatial expression patterns of genes of interest. In conclusion, this protocol is particularly useful for recalcitrant plant tissue containing high crystal or silica content. Good quality tissue sections enable morphological and other biological studies.

This protocol describes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method that is useful for recalcitrant plant tissues. Good quality tissue sections enable anatomical studies and other biological studies including in situ hybridization (ISH).

Hybrid-Cut: Une méthode Sectionnement améliorée pour les échantillons de tissus végétaux récalcitrantes

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

A Method to Assess Bacteriocin Effects on the Gut Microbiota of Mice

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the factors that contribute to maintaining the population balance. However, there are limited available methodologies to evaluate these factors. Bacteriocins are antimicrobial peptides produced by many bacteria that may confer a competitive advantage for food acquisition and/or niche establishment. Many probiotic lactic acid bacteria (LAB) strains have great potential to promote human and animal health by preventing the growth of pathogens. They can also be used for immuno-modulation, as they produce bacteriocins. However, the antagonistic activity of bacteriocins is normally determined by laboratory bioassays under well-defined but over-simplified conditions compared to the complex gut environment in humans and animals, where bacteria face multifactorial influences from the host and hundreds of microbial species sharing the same niche. This work describes a complete and efficient procedure to assess the effect of a variety of bacteriocins with different target specificities in a murine system. Changes in the microbiota composition during the bacteriocin treatment are monitored using compositional 16S rDNA sequencing. Our approach uses both the bacteriocin producers and their isogenic non-bacteriocin-producing mutants, the latter giving the ability to distinguish bacteriocin-related from non-bacteriocin-related modifications of the microbiota. The fecal DNA extraction and 16S rDNA sequencing methods are consistent and, together with the bioinformatics, constitute a powerful procedure to find faint changes in the bacterial profiles and to establish correlations, in terms of cholesterol and triglyceride concentration, between bacterial populations and health markers. Our protocol is generic and can thus be used to study other compounds or nutrients with the potential to alter the host microbiota composition, either when studying toxicity or beneficial effects.

Bacteriocins are believed to play a key role in defining microbial diversity in different ecological niches. Here, we describe an efficient procedure to assess how bacteriocins affect gut microbiota composition in an animal model.

Une méthode pour évaluer les effets de la bactériocine sur le microbiota intestinal des souris

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the ...

A Simple and Efficient Method for In Vivo Cardiac-specific Gene Manipulation by Intramyocardial Injection in Mice

Gene manipulation specifically in the heart significantly potentiate the investigation of cardiac disease pathomechanisms and their therapeutic potential. In vivo cardiac-specific gene delivery is commonly achieved by either systemic or local delivery. Systemic injection via tail vein is easy and efficient in manipulating cardiac gene expression by using recombinant adeno-associated virus 9 (AAV9). However, this method requires a relatively high amount of vector for efficient transduction, and may result in nontarget organ gene transduction. Here, we describe a simple, efficient, and time-saving method of intramyocardial injection for in vivo cardiac-specific gene manipulation in mice. Under anesthesia (without ventilation), the pectoral major and minor muscles were bluntly dissected, and the mouse heart was quickly exposed by manual externalization through a small incision at the fourth intercostal space. Subsequently, adenovirus encoding luciferase (Luc) and vitamin D receptor (VDR), or short hairpin RNA (shRNA) targeting VDR, was injected with a Hamilton syringe into the myocardium. Subsequent in vivo imaging demonstrated that luciferase was successfully overexpressed specifically in the heart. Moreover, Western blot analysis confirmed the successful overexpression or silencing of VDR in the mouse heart. Once mastered, this technique can be used for gene manipulation, as well as injection of cells or other materials such as nanogels in the mouse heart.

A Simple and Efficient Method for In Vivo Cardiac-specific Gene Manipulation by Intramyocardial Injection in Mice

Here we present a protocol for cardiac-specific gene manipulation in mice. Under anesthesia, the mouse hearts were externalized through the fourth intercostal space. Subsequently, adenoviruses encoding specific genes were injected with a syringe into the myocardium, followed by protein expression measurement via in vivo imaging and Western blot analysis.

Une méthode Simple et efficace pour la Manipulation de gène spécifique cardiaque In Vivo par intramyocardique Injection chez la souris

Gene manipulation specifically in the heart significantly potentiate the investigation of cardiac disease pathomechanisms and their therapeutic potential. ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

Analyse de spectrométrie de masse pour identifier l’ubiquité de cenp-A marqué par EYFP (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating cardiomyocytes from rabbits, guinea pigs or rats has been performed via retrograde perfusion of the heart with enzymes using a Langendorff apparatus. However, a high degree of skill is required when this method is used with a small mouse heart. An antegrade perfusion method that does not use a Langendorff apparatus was recently reported for the isolation of mouse cardiomyocytes. We herein report a complete protocol for the improved antegrade perfusion of the excised heart to isolate individual heart cells from adult mice (8 - 108 weeks old). Antegrade perfusion is performed by injecting perfusate near the apex of the left ventricle of the excised heart, the aorta of which was clamped, using an infusion pump. All procedures are carried out on a pre-warmed heater mat under a microscope, which allows for the injection and perfusion processes to be monitored. The results suggest that ventricular and atrial myocytes, and fibroblasts can be well isolated from a single adult mouse simultaneously.

We developed a simple method for isolating high quality individual mouse heart cells by the antegrade perfusion technique. This method is Langendorff-free and useful for isolating ventricular and atrial myocytes or interstitial cells, such as cardiac fibroblasts or progenitors.

Procédé de perfusion antegrade pour l’isolement de cardiomyocytes de souris

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating ...

Imaging Molecular Adhesion in Cell Rolling by Adhesion Footprint Assay

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of inflammation. This phenomenon occurs in postcapillary venules, where blood flow pushes leukocytes in a rolling motion on the endothelial cells. Stable rolling requires a delicate balance between adhesion bond formation and their mechanically-driven dissociation, allowing the cell to remain attached to the surface while rolling in the direction of flow. Unlike other adhesion processes occurring in relatively static environments, rolling adhesion is highly dynamic as the rolling cells travel over thousands of microns at tens of microns per second. Consequently, conventional mechanobiology methods such as traction force microscopy are unsuitable for measuring the individual adhesion events and the associated molecular forces due to the short timescale and high sensitivity required. Here, we describe our latest implementation of the adhesion footprint assay to image the P-selectin: PSGL-1 interactions in rolling adhesion at the molecular level. This method utilizes irreversible DNA-based tension gauge tethers to produce a permanent history of molecular adhesion events in the form of fluorescence tracks. These tracks can be imaged in two ways: (1) stitching together thousands of diffraction-limited images to produce a large field of view, enabling the extraction of adhesion footprint of each rolling cell over thousands of microns in length, (2) performing DNA-PAINT to reconstruct super-resolution images of the fluorescence tracks within a small field of view. In this study, the adhesion footprint assay was used to study HL-60 cells rolling at different shear stresses. In doing so, we were able to image the spatial distribution of the P-selectin: PSGL-1 interaction and gain insight into their molecular forces through fluorescence intensity. Thus, this method provides the groundwork for the quantitative investigation of the various cell-surface interactions involved in rolling adhesion at the molecular level.

This protocol presents the experimental procedures to perform the adhesion footprint assay to image the adhesion events during fast cell rolling adhesion.

Imagerie de l’adhésion moléculaire dans le laminage cellulaire par essai d’empreinte d’adhérence

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of ...

Bioluminescent Monitoring of Graft Survival in an Adoptive Transfer Model of Autoimmune Diabetes in Mice

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease is the transplantation of stem cell-derived beta cells. Genetic modifications, however, may be necessary to protect the transplanted cells from persistent autoimmunity. Diabetic mouse models are a useful tool for the preliminary evaluation of strategies to protect transplanted cells from autoimmune attack. Described here is a minimally invasive method for transplanting and imaging cell grafts in an adoptive transfer model of diabetes in mice. In this protocol, cells from the murine pancreatic beta cell line NIT-1 expressing the firefly luciferase transgene luc2 are transplanted subcutaneously into immunodeficient non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient (scid) mice. These mice are simultaneously injected intravenously with splenocytes from spontaneously diabetic NOD mice to transfer autoimmunity. The grafts are imaged at regular intervals via non-invasive bioluminescent imaging to monitor the cell survival. The survival of mutant cells is compared to that of control cells transplanted into the same mouse.

This protocol describes a straightforward and minimally invasive method for transplanting and imaging NIT-1 cells in non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient mice challenged with splenocytes purified from spontaneously diabetic NOD mice.

Surveillance bioluminescente de la survie du greffon dans un modèle de transfert adoptif du diabète auto-immun chez la souris

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease ...

Establishing a Diaphyseal Femur Fracture Model in Mice

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age and overall health status of the patient, failures can occur, leading to delayed union or nonunion. Due to the increasing number of fractures resulting from high-energy trauma and aging, the development of innovative therapeutic strategies to improve bone repair based on the combination of skeletal/mesenchymal stem/stromal cells and biomimetic biomaterials is urgently needed. To this end, the use of reliable animal models is fundamental to better understanding the key cellular and molecular mechanisms that determine the healing outcomes. Of all the models, the mouse is the preferred research model because it offers a wide variety of transgenic strains and reagents for experimental analysis. However, the establishment of fractures in mice may be technically challenging due to their small size. Therefore, this article aims to demonstrate the procedures for the surgical establishment of a diaphyseal femur fracture in mice, which is stabilized with an intramedullary wire and resembles the most common bone repair process, through cartilaginous callus formation.

This protocol describes a surgical procedure for the establishment of a diaphyseal fracture in the femur of mice, which is stabilized with an intramedullary wire, for fracture healing studies.

Établissement d’un modèle de fracture du fémur diaphysaire chez la souris

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age ...