Un merci spécial à Cori Sanders aux conceptions IROC pour la préparation des illustrations et de Kris Reddi à l&#39;UCLA pour la mise en place des cultures d&#39;échantillons de chiffres. Le financement de ce projet a été fourni par HHMI (HHMI Grant n ° 52006944).

<ol>
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Je n&#39;ai rien à communiquer.

Une technique aseptique se réfère à une série de procédures de routine effectuées afin de prévenir des solutions stériles et des cultures de devenir contaminés par des micro-organismes indésirables dans les laboratoires. Ces techniques sont indispensables pour des expériences qui nécessitent des cellules en croissance. Bien qu&#39;un cadre de travail qui est complètement stérile ne peut être atteint, des procédures telles que la désinfection des surfaces de laboratoire, la création d&#39;un champ stérile à l&#39;aide d&#39;un bec Bunsen, en limitant l&#39;exposition des cultures non plafonnés et les médias à l&#39;air, de stérilisation de matériaux tels que des bouteilles, tubes et pipettes en verre, et en évitant tout contact avec des instruments stériles non-stériles surfaces réduit la possibilité de contamination des solutions et des cultures dans une expérience. L&#39;objectif est pour ces mesures de précaution pour devenir une seconde nature, ce qui est livré avec la formation et la pratique tout en travaillant dans un laboratoire. Transferts de volume avec des solutions stériles et des cultures en utilisant des instruments tels que pipettes sérologiques et des microropipettors sont l&#39;un des nombreux types de techniques de routine effectués dans un laboratoire. Différentes applications expérimentales appel à des instruments capables de transférer des volumes distincts, mais précis et exacts. Pipettes sérologiques sont utilisés dans les laboratoires de microbiologie pour préparer les cultures cellulaires nécessitant des préparations des médias portant sur des volumes millilitre, alors que micropipettes sont indispensables pour des expériences de biologie moléculaire qui ont besoin de montants ne microlitres de solutions. Lorsque la technique aseptique est pratiquée avec ces instruments, la contamination est réduit au minimum pendant les transferts de volume indépendamment de la quantité de liquide ou de type d&#39;expérience. Bien que n&#39;étant pas discuté dans le présent protocole, un autre moyen couramment utilisés pour prévenir la contamination est de travailler au sein d&#39;une hotte à flux laminaire (Figure 10). Cet équipement est essentiel pour la culture de tissus et pour des expériences effectuées avec des micro-organismes classés comme BLS-2 ou plus. Une hotte à flux laminaire contient un filtre HEPA (haute efficacitéparticulaire de l&#39;air) de filtre qui supprime les contaminants en suspension dans l&#39;air s&#39;écoulant le capot tout en empêchant l&#39;air non filtré de la chambre de perméation de l&#39;espace de travail. Fait à noter, un bec Bunsen ne peuvent pas être utilisés à l&#39;intérieur d&#39;une hotte à flux laminaire, car la chaleur de la flamme perturbe l&#39;écoulement de l&#39;air indispensable à la fonctionnalité de la hotte. Il est souvent utile de vérifier la qualité de votre technique aseptique lors de la réalisation d&#39;expériences. Pour valider des solutions, et des milieux de culture ne se contaminent au cours des manipulations expérimentales, toujours préparer un contrôle négatif. Par exemple, si la préparation des tubes de bouillon pour la croissance des cultures bactériennes, ne pas ensemencer un tube ne laissant que les médias stériles. Incuber le milieu aux côtés des tubes inoculés ensuite inspecter le tube témoin non inoculé des signes de contamination tels que la turbidité de la croissance de cellules indésirables involontairement introduits dans le tube. Si le tube de contrôle est contaminé, le tube d&#39;expérienceest probable sont contaminés en tant que bien, et l&#39;expérience devra être répétée. Ces mesures de précaution doit être fait avec toutes les expériences.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Bouillon LB </td><td> Difco </td><td> 244620 </td><td> Recette également disponible en référence 6 </td></tr><tr><td colspan="4"> TE Buffer: </td></tr><tr><td> Dihydraté EDTA disodique </td><td> Sigma </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> Trizma-HCl </td><td> Sigma </td><td> T-3253 </td><td></td></tr><tr><td> CiDecon </td><td> Decon Laboratories, Inc </td><td> 8504 </td><td> Désinfectant </td></tr><tr><td> L&#39;éthanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> A406 </td><td> Pour utilisation comme désinfectant, préparer 70% (v / v) avec de l&#39;eau distillée </td></tr></tbody></table>

aseptic laboratory techniques: volume transfers with serological pipettes and micropipettors

Micro-organismes sont partout - dans l&#39;air, le sol, et le corps humain ainsi que sur des surfaces inanimées comme des bancs de laboratoire et les claviers d&#39;ordinateur. L&#39;omniprésence des microbes crée une offre abondante des contaminants potentiels dans un laboratoire. Pour assurer le succès expérimental, le nombre de contaminants sur les surfaces de l&#39;équipement et les travaux doivent être minimisés. Commune parmi les nombreuses expériences en microbiologie sont des techniques associées à la mesure et le transfert des cultures contenant des cellules bactériennes ou des particules virales. Pour ce faire, sans contact avec les surfaces non stériles ou de contaminer les médias stériles exige (1) préparer un espace de travail stérile, (2) à un réglage précis et avec précision la lecture des instruments pour le transfert aseptique des liquides, et (3) correctement la manipulation des instruments, des flacons, des bouteilles et des cultures des tubes à l&#39;intérieur d&#39;un champ stérile. L&#39;apprentissage de ces procédures exige une formation et la pratique. Dans un premier temps, les actions devraient être lent, délibéré et contrôlé par l&#39;objectif étant pour t aseptiquesechnique pour devenir une seconde nature lorsque l&#39;on travaille sur le banc. Nous présentons ici les étapes à suivre pour mesurer les volumes utilisant des pipettes sérologiques et Micropipettes dans un champ stérile créée par un bec Bunsen. Plage de volumes de microlitres (ul) en millilitres (ml) en fonction de l&#39;instrument utilisé. Liquides couramment transférés comprennent bouillon stérile ou des solutions chimiques, ainsi que des cultures bactériennes et des stocks de phages. En suivant ces procédures, les élèves devraient être en mesure de: <ul><li> Le travail au sein du champ stérile créée par la flamme du brûleur Bunsen. </li><li> N&#39;utiliser que des pipettes sérologiques sans compromettre la stérilité instrument. </li><li> Aspirer des liquides avec des pipettes sérologiques, précisément la lecture des volumes calibrés en alignant le ménisque formé par le liquide à des marques de graduation de la pipette. </li><li> Conservez les bouteilles, flacons, culture tubes et leurs casquettes respectives stériles lors des transferts de liquides. </li><li> Identifier les différentes applications pour le plastique contre verre sérologique pipettes. </li><li> Limites de précision d&#39;État pour micropipettes. </li><li> Précisément, et régler avec précision des volumes sur micropipettes. </li><li> Savoir comment utiliser correctement l&#39;arrêt de première et deuxième sur une micropipette pour aspirer et transférer des volumes corrects. </li></ul>

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Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

Lorsque vous travaillez dans un laboratoire, il est impératif de minimiser les sources de contamination. Une technique aseptique se réfère aux procédures qui permettent le transfert des cultures et des réactifs, tout en évitant le contact avec les surfaces non stériles. Pipettes sérologiques et Micropipettes sont utilisés pour mesurer des volumes précis sans compromettre la stérilité des solutions utilisées dans les expériences.

Techniques de laboratoire aseptiques: Transferts en volume avec pipettes sérologiques et Micropipettes

Microorganisms are everywhere - in the air, soil, and human body as well as on inanimate surfaces like laboratory benches and computer keyboards. The ...

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161.5K vues.  University of California, Los Angeles. Lorsque vous travaillez dans un laboratoire, il est impératif de minimiser les sources de contamination. Une technique aseptique se réfère aux procédures qui permettent le transfert des cultures et des réactifs, tout en évitant le contact avec les surfaces non stériles. Pipettes sérologiques et Micropipettes sont utilisés pour mesurer des volumes précis sans compromettre la stérilité des solutions utilisées dans les expériences.