Agradecimentos especiais a Cori Sanders em projetos da IROC para a preparação de ilustrações e Kris Reddi na UCLA para a criação de culturas de amostras para as figuras. O financiamento para este projeto foi fornecido pelo HHMI (HHMI Grant No. 52006944).

<ol>
	<li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> At the Bench: A Laboratory Navigator. , (1998).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL). , (2009).</li><li>Bykowski, T., Stevenson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aseptic+Technique.">Aseptic Technique.</a> Current Protocols in Microbiology. Appendix 4, Appendix 4D (2008).</li><li>Cot&#233;, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aseptic+Technique+for+Cell+Culture.">Aseptic Technique for Cell Culture.</a> Current Protocols in Cell Biology. Chapter 1, Unit 1.3 (2001).</li><li>Grimes, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+basic+laboratory+manual+for+the+small-scale+production+and+testing+of+I-2+Newcastle+disease+vaccine.">A basic laboratory manual for the small-scale production and testing of I-2 Newcastle disease vaccine.</a> RAP Publication. AC802/E, 12-13 (2002).</li><li>Guzman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pipetting:+A+Practical+Guide.">Pipetting: A Practical Guide.</a> The American Biology Teacher. 63 (2), 128-131 (2001).</li><li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual. , (2008).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cloning - A Laboratory Manual. , 978-087969576 (2001).</li><li>Seidman, L. A., Moore, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Basic Laboratory Methods for Biotechnology: Textbook and Laboratory Reference. , (2000).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> PIPETMAN P User's Guide. , (2012).</li></ol>

Não tenho nada para revelar.

A técnica asséptica refere-se a um conjunto de procedimentos de rotina feito para prevenir soluções estéreis e culturas de ser contaminado por microorganismos indesejados no laboratório. Tais técnicas são essenciais para as experiências que requerem células em crescimento. Embora um ambiente de trabalho que é completamente estéril não pode ser alcançado, os procedimentos, tais como desinfecção de superfícies de laboratório, criando um campo esterilizado usando um bico de Bunsen, limitando a exposição de culturas não niveladas e meios de comunicação para o ar, esterilizando materiais, tais como frascos, tubos e pipetas de vidro, e evitar o contato de instrumentos esterilizados com os não-estéreis superfícies reduz a possibilidade de contaminação de soluções e culturas em um experimento. O objetivo é que esses procedimentos de precaução para se tornar uma segunda natureza, o que vem com treino e prática, enquanto trabalhava em um laboratório. Transferências de volume com soluções estéreis e culturas, usando instrumentos como pipetas sorológicas e microfoneropipettors são um de muitos tipos de técnicas de rotina feitas em laboratório. Diferentes aplicações experimentais chamar de instrumentos capazes de transferir volumes distintos, mas precisos e exatos. Pipetas serológicos são utilizados em laboratórios de microbiologia para preparar culturas de células que requerem meios preparações envolvem volumes mililitros, enquanto micropipetas são essenciais para as experiências de biologia molecular que necessitam apenas quantidades microlitros de soluções. Quando uma técnica asséptica é praticado com estes instrumentos, a contaminação é minimizado durante as transferências de volume independentemente da quantidade de líquido ou tipo de experimento. Apesar de não ser discutido neste protocolo, um meio de outros vulgarmente utilizados para prevenir a contaminação é trabalhar dentro de uma câmara de fluxo laminar (Figura 10). Este equipamento é crítico para a cultura de tecidos e para experiências realizadas com microorganismos classificados como BLS-2 ou superior. A capela de fluxo laminar contém um HEPA (alta eficiênciaar filtro de partículas) que remove contaminantes do ar a partir do ar que flui para o capô, evitando ar não filtrado a partir da sala de permeando o espaço de trabalho. Digno de nota, um bico de Bunsen não pode ser utilizado dentro de uma câmara de fluxo laminar porque o calor da chama interrompe o fluxo de ar essencial para a funcionalidade do capuz. Muitas vezes, é útil para verificar a qualidade de sua técnica asséptica ao realizar experimentos. Para confirmar as soluções e meios de cultura não ficam contaminados durante a manipulações experimentais, sempre preparar um controlo negativo. Por exemplo, se a preparação de tubos de caldo para o crescimento de culturas bacterianas, não inocular um tubo deixando apenas meios estéreis. Incubar o meio ao lado dos tubos inoculados em seguida inspeccionar tubo de controlo não inoculado para sinais de contaminação, tais como turbidez de crescimento das células não desejadas não intencionalmente introduzido dentro do tubo. Se o tubo de controlo está contaminado, o tubo experimentalé provável estão contaminados, bem como, a experiência e terá que ser repetido. Estas medidas de precaução deve ser feito com cada experimento.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Caldo LB </td><td> Difco </td><td> 244620 </td><td> Receita também disponível em referência 6 </td></tr><tr><td colspan="4"> TE Buffer: </td></tr><tr><td> EDTA sal dissódico dihidratado </td><td> Sigma </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> Trizma-HCl </td><td> Sigma </td><td> T-3253 </td><td></td></tr><tr><td> CiDecon </td><td> Decon Laboratories, Inc. </td><td> 8504 </td><td> Desinfetante </td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> A406 </td><td> Para utilização como desinfectante, preparar a 70% (v / v) com água destilada </td></tr></tbody></table>

aseptic laboratory techniques: volume transfers with serological pipettes and micropipettors

Os microrganismos estão por toda parte - no ar, solo e corpo humano, bem como em superfícies inanimadas, como bancadas de laboratório e teclados de computador. A onipresença de micróbios cria uma fonte abundante de contaminantes potenciais em um laboratório. Para garantir o sucesso experimental, o número de contaminantes nas superfícies do equipamento e de trabalho deve ser minimizado. Comum entre muitas experiências em microbiologia são técnicas que envolvem a medição e transferência de culturas contendo células bacterianas ou de partículas virais. Para fazê-lo sem entrar em contato com superfícies não-estéreis ou contaminar meios estéreis requer (1) preparar um espaço de trabalho estéril, (2) precisamente definição e precisão de leitura de instrumentos para transferência asséptica de líquidos, e (3) adequadamente manipular instrumentos frascos, garrafas e culturas, tubos dentro de um campo estéril. Aprender esses procedimentos exige treinamento e prática. Na primeira, as acções devem ser lenta, deliberada e controlada com o objetivo de ser para t assépticasechnique para se tornar uma segunda natureza, quando trabalhava no banco. Aqui apresentamos os passos para a medição de volumes por meio de pipetas sorológicas e micropipetas de dentro de um campo estéril criado por um bico de Bunsen. Volumes variar de microlitros (ul) a mililitros (ml), dependendo do instrumento utilizado. Líquidos comummente transferidos incluem caldo estéril ou soluções químicas, bem como culturas de bactérias e stocks de fagos. Seguindo estes procedimentos, o aluno deve ser capaz de: <ul><li> Trabalhar dentro do campo esterilizado criado pela chama do queimador de Bunsen. </li><li> Usar pipetas serológicos sem comprometer a esterilidade do instrumento. </li><li> Aspirar líquidos com pipetas serológicos, precisamente a leitura volumes calibrados através do alinhamento do menisco formado pelo líquido para as marcas de graduação na pipeta. </li><li> Mantenha garrafas de cultura, frascos, tubos e suas respectivas tampas estéreis durante as transferências de líquidos. </li><li> Identificar diferentes aplicações para o plástico contra o vidro pip sorológicoettes. </li><li> Estado limitações de precisão para micropipetas. </li><li> Precisamente e precisa definir volumes de micropipetas. </li><li> Saiba como usar corretamente a primeira parada e segundo em uma micropipeta para aspirar e transferir volumes corretos. </li></ul>

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Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

Quando se trabalha num laboratório, é imperativo para minimizar fontes de contaminação. A técnica asséptica refere-se a procedimentos que permitem a transferência de culturas e reagentes evitando ao mesmo tempo o contacto com as superfícies não-estéreis. Pipetas serológicos e usar micropipetas são usados ​​para medir os volumes precisos, sem comprometer a esterilidade das soluções utilizadas em experiências.

Assépticas Técnicas de Laboratório: transferências de volume com pipetas sorológicas e micropipetas

Microorganisms are everywhere - in the air, soil, and human body as well as on inanimate surfaces like laboratory benches and computer keyboards. The ...

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161.7K visualizações.  University of California, Los Angeles. Quando se trabalha num laboratório, é imperativo para minimizar fontes de contaminação. A técnica asséptica refere-se a procedimentos que permitem a transferência de culturas e reagentes evitando ao mesmo tempo o contacto com as superfícies não-estéreis. Pipetas serológicos e usar micropipetas são usados ​​para medir os volumes precisos, sem comprometer a esterilidade das soluções utilizadas em experiências.