La recherche décrite dans cette étude a été soutenue par une subvention de la National Science Foundation (DEB-0805818) pour WAF, AWS et ID Cette étude a également été soutenue par des subventions IOS 0.845.847 à AWS, IOS-0919855 à AWS et ID-0920720 et IOS pour WAF

<html> 1. L&#39;élevage et la manipulation de l&#39;alimentation pour produire des variations dans la taille du corps et l&#39;aile de taille Rationnelle et Aperçu. L&#39;expression de relations d&#39;échelle finalement charnières sur le processus de développement réglementaire qui produisent des variations dans les organes et la taille finale du corps. Ces processus sont mieux décrites par le travail sur les insectes totalement métamorphiques (ie, holométaboles) comme D. melanogaster, où les organes grandir comme indifférencié &quot;disques imaginaux» dans le grub-comme la larve 11,15-17. Chez la drosophile, l&#39;orgue et la taille finale du corps sont régis par la croissance pendant les stades larvaires; larves se développent à travers le premier et le deuxième stade larvaire larve jusqu&#39;à ce qu&#39;ils atteignent un poids minimal viable pour Eclosion (MVW E) vers le début du troisième stade larvaire 18. La famine avant la réalisation de MVW E prévient l&#39;éclosion adulte. Cependant, les larves qui sont morts de faim au MVW E générer des adultes viables, quoique à une très petite taille. C&#39;est parce que réduite nutrition pendant le développement du corps diminue et la taille finale d&#39;orgue, et pas seulement chez les mouches, mais dans presque tous les 19 à 21 animaux. En manipulant la disponibilité des aliments après la MVW E est atteint, mais avant la nymphose a lieu, il est possible d&#39;induire une extrême plasticité phénotypique de la taille du corps qui l&#39;emportent largement sur ​​les autres sources de variation (par exemple, la variation génétique individuelle). <ol><li> Les oeufs sont recueillis auprès de la population d&#39;être phénotypés, divisées en lots de 50 et placés dans des flacons contenant 10 ml de nourriture volée standard. Parce que la ponte a lieu en permanence, les oeufs sont collectés toutes les 24 heures pendant trois jours, la production de trois cohortes d&#39;âge. </li><li> Quand la cohorte la plus âgée atteint le stade errance ou a tout juste commencé à se nymphoser, la manipulation régime est appliqué. À ce stade, la cohorte la plus âgée est bien au-delà des E MVW, la plus jeune cohorte est très proche de la MVW E et de la cohorte qui reste est quelque part entre ces extrêmes. Ainsi, la suppression de la nourriture à ce moment va produire des adultes très grande de la cohorte la plus âgée, les adultes très faible de la cohorte la plus jeune et de taille intermédiaire adultes à partir de la cohorte qui restent. Pour supprimer les larves des flacons, environ 5 ml de solution de saccharose à 40% est ajoutée à tous les flacons. Pour libérer les larves, la nourriture est agité pendant 15-20 minutes sur une table vibrante définie à une vitesse intermédiaire. </li><li> Larves flottantes sont retirés de la solution de saccharose avec une amende (00) pinceau, placés dans des flacons contenant un tampon de coton humide et autorisés à se nymphoser. Alternativement, les larves pourraient être placés sur un additif alimentaire non digestible comme la méthylcellulose 22. </li></ol> 2. Estimation de la taille du corps Rationnelle et Aperçu. Des études antérieures indiquent que la longueur du thorax est un peu moins de proxy idéal pour la taille globale du corps 22. Au lieu de cela, nous utilisons la taille nymphe comme une mesure de la taille du corps. Taille maximale est fixée à l&#39;arrêt de l&#39;alimentation qui précède la nymphose. En conséquence, il ya une corrélation étroite entre la taille de nymphe et la taille du corps adulte 23. <ol><li> Les chrysalides sont disposées face ventrale sur des lames de microscope en verre et imagée en utilisant un appareil photo numérique relié à un microscope à dissection. Chaque image est capturée, attribué un code d&#39;identification unique et transférés sur un ordinateur via un flux en direct reliant l&#39;appareil photo numérique à l&#39;ordinateur. </li><li> Imagée pupes sont déplacés à chaque 2 ml contenant 1 ml epitubes de la nourriture volée, étiquetés avec le code unique pour cette personne, et percé avec des trous d&#39;aération pour permettre l&#39;échange gazeux. </li><li> Taille nymphe est estimée comme le nombre de pixels de la silhouette chrysalide. Métriques Autre taille pourrait également être utilisé. </li></ol> 3. Estimation de la taille du Trait (aile) Rationnelle et Aperçu. Pour les ailes d&#39;image, nous utilisons une «aile de grabber&quot; 24, qui tire et détient l&#39;aile d&#39;un live, perpendiculaire volée anesthésiés à son corps. Pressé entre deux morceaux de verre, ce qui permet l&#39;aile à imager comme un objet à deux dimensions. <ol><li> Les mouches sont anesthésiés légèrement avec le CO 2 et mis en place dans la carte d&#39;acquisition d&#39;aile sur un microscope à dissection équipé d&#39;un appareil photo numérique qui est connecté à un ordinateur. </li><li> L&#39;aile est imagé et enregistré sous le code unique pour cette personne. </li><li> La taille des ailes peut être estimée en utilisant le polygone convexe minimum qui circonscrit marginale repères fixes ou comme le nombre de pixels de la silhouette des ailes. </li></ol> 4. Estimation de la relation d&#39;échelle <ol><li> Les données sont mises en commun entre les cohortes, mais séparés par sexe et log-transformées. </li><li> Relations d&#39;échelle sont adaptées à la taille des données à l&#39;aide de type II (ie, Réduction Axe Majeur) régression (voir la revue dans 12) et les paramètres estimés pour chaque groupe. </li></ol> 5. Les résultats représentatifs: tente &quot;&gt; Nos manipulations alimentation va produire un large éventail de tailles de corps (figure 1) et la taille caractéristique (figure 2). Traçage des traits transformation logarithmique uns contre les autres révèlent leur modèle de covariation dans un groupe donné biologique et permet l&#39;ajustement relation d&#39;échelle pour le groupe (Figure 3). Extraction des paramètres relation d&#39;échelle qui décrivent comment les échelles forme avec la taille du corps permet de comparer covarie façonnent la manière dont la taille entre les groupes. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/3162/3162fig1.jpg" /> Figure 1. Pupa des extrêmes de la distribution de taille produite par manipulation régime après les individus à atteindre l&#39;E MVW. Réelle des images nymphales sont affichés à gauche avec leurs silhouettes correspondant à la mesure de la taille de nymphe à droite. La barre d&#39;échelle est de 1 mm. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/3162/3162fig2.jpg" /> Ailes Figure 2. Proviennent des extrêmes de la distribution de taille du corps produit par la manipulation des individus régime après la réalisation des E MVW. Images réelles sont montré l&#39;aile gauche avec leurs silhouettes correspondant à la mesure de la taille des ailes montré sur la droite. La barre d&#39;échelle est de 1 mm. <img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/3162/3162fig3.jpg" /> Figure 3. Échelle de taille Wing-corps pour Drosophila melanogaster par sexe. Des données log-transformées pour les individus de chaque sexe qui ont été entièrement nourris (cernes), affamés un (cercles gris) ou de deux jours (cercles ouverts) que les larves. La ligne de régression de type II est indiqué pour chaque sexe. Entre chaque cohorte d&#39;âge, la baisse de la surface alaire moyenne de 0.1mm ~ (~ 7%) et ~ 0,2 (~ 8%) se produit, en augmentant l&#39;éventail des phénotypes observés. Les régressions révèlent que les femmes sont légèrement hypoallometric pour cette relation d&#39;échelle (pente de 0,96) tandis que les mâles sont légèrement hyperallometric (pente 1,06).

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W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+model+of+static+allometry+in+holometabolous+insects.">Developmental model of static allometry in holometabolous insects.</a> Proc. R. Soc. B. 275, 1875-1885 (2008).</li><li>Stern, D. L., Emlen, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+developmental+basis+of+allometry+in+insects.">The developmental basis of allometry in insects.</a> Development. 126, 1091-1101 (1999).</li><li>Emlen, D. J., Allen, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotype+to+phenotype:+Physiological+control+of+trait+size+and+scaling+in+insects.">Genotype to phenotype: Physiological control of trait size and scaling in insects.</a> Integr. Comp. 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Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

Mise à l&#39;échelle morphologique a été l&#39;objet d&#39;études approfondies en biologie évolutive depuis près d&#39;un siècle. Plus récemment, la base immédiate de la régulation de la croissance et l&#39;échelle est devenue de plus en plus important dans le développement, la physiologie et la génétique (par exemple, voir les commentaires dans 12,15,23-25). Notre méthodologie permet d&#39;estimer les relations d&#39;échelle morphologiques sur toute la gamme des caractères et des tailles de corps. Cela peut être important, comme la taille caractéristique peut ne pas l&#39;échelle linéairement avec la taille du corps (par exemple, 13,14). Toutefois, cela peut ne pas être évident si les animaux sont élevés que dans des conditions de laboratoire idéal. Bien que notre protocole a été développé explicitement pour permettre une estimation de la relation corps-aile de taille mise à l&#39;échelle de la drosophile, il peut être utilisé avec le trait spécifique de modification d&#39;estimer la relation d&#39;échelle pour un trait morphologique chez les mouches. De même, la manipulation alimentation peut vraisemblablement être utilisée pour produire la gamme complète des tailles de caractères et d&#39;autres corps dans tout les insectes métamorphiques; applications telles exigent simplement de savoir quand le E MVW est atteint et l&#39;application de la manipulation à ce point dans l&#39;ontogenèse.

experimental manipulation of body size to estimate morphological scaling relationships in drosophila

La mise à l&#39;échelle des parties du corps est un élément central de 1-7 morphologie animale. Au sein des espèces, des traits morphologiques doivent être correctement proportionné au corps pour l&#39;organisme de fonctionner; grands individus ont généralement des parties du corps plus grands et les petits individus ont généralement des parties du corps plus petits, tels que la forme générale du corps est maintenu dans un éventail de tailles de corps d&#39;adulte. L&#39;exigence de proportions correctes signifie que les individus au sein des espèces présentent généralement une faible variation dans la taille caractéristique relative. En revanche, la taille caractéristique relative peut varier considérablement selon les espèces et est un principal mécanisme par lequel la diversité morphologique est produite. Plus d&#39;un siècle de travaux comparatifs ont établi ces intra et interspécifiques motifs 3,4. Peut-être l&#39;approche la plus largement utilisée pour décrire cette variation est de calculer la relation d&#39;échelle entre la taille de deux traits morphologiques en utilisant l&#39;équation allométrique y = bxα, où x et y sont de la taille des deux traits, comme organe de la taille du corps et 8 , 9. Cette équation décrit la relation au sein du groupe d&#39;échelle (par exemple, espèce, population) entre deux traits à la fois comme varient en taille. Transformation logarithmique de cette équation donne une équation linéaire simple, connectez-vous (y) = log (b) + αlog (x) et log-log des parcelles de la taille des caractères différents chez les individus de la même espèce typiquement révéler échelle linéaire avec une interception de log (b) et une pente de α, appelé le «allométriques coefficient» 9,10. La variation morphologique entre les groupes est décrit par les différences dans intercepte relation d&#39;échelle ou de pentes pour une paire trait donné. Par conséquent, les variations dans les paramètres de l&#39;équation allométrique (b et α) décrit élégamment la variation de la forme capturée dans la relation entre les organes et la taille du corps à l&#39;intérieur et entre les groupes biologiques (voir 11,12). Pas tous les traits d&#39;échelle linéaire avec eux ou avec la taille du corps (par exemple, 13,14) Ainsi, les relations d&#39;échelle morphologiques sont plus informatifs lorsque les données sont extraites de la gamme complète des tailles trait. Nous décrivons ici comment de simples manipulations expérimentales de l&#39;alimentation peuvent être utilisés pour produire la gamme complète de la taille du corps chez les insectes. Cela permet une estimation de la relation d&#39;échelle entière de toute paire de traits, ce qui permet une description complète de covarie façonnent la manière dont la taille et une comparaison robuste de paramètres relation d&#39;échelle entre les groupes biologiques. Bien que nous nous concentrons sur la drosophile, notre méthodologie doit être applicable à presque tous les insectes totalement métamorphiques.

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Experimental Manipulation of Body Size to Estimate Morphological Scaling Relationships in Drosophila

Relations d&#39;échelle morphologiques saisir et décrire la forme des organismes. Nous présentons une méthode pour mesurer les relations d&#39;échelle morphologiques à travers la gamme naturelle de tailles de corps chez les insectes totalement métamorphiques. En utilisant une manipulation simple régime alimentaire nous augmentons la distribution des tailles de caractères, permettant la description précise de la façon dont la forme et la taille de la co-varier.

Manipulation expérimentale de la taille corporelle d&#39;estimer les relations d&#39;échelle morphologiques Drosophile</em

The scaling of body parts is a central feature of animal morphology1-7. Within species, morphological traits need to be correctly proportioned to the body ...

experimental-manipulation-body-size-to-estimate-morphological-scaling

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Experimental Manipulation of Body Size to Estimate Morphological Scaling Relationships in Drosophila

13.7K vues.  University of Houston. Relations d'échelle morphologiques saisir et décrire la forme des organismes. Nous présentons une méthode pour mesurer les relations d'échelle morphologiques à travers la gamme naturelle de tailles de corps chez les insectes totalement métamorphiques. En utilisant une manipulation simple régime alimentaire nous augmentons la distribution des tailles de caractères, permettant la description précise de la façon dont la forme et la taille de la co-varier.

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Experimental Approaches to Tissue Engineering

Approches expérimentales pour le génie tissulaire

Recherche

Biologie

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

The developing Drosophila melanogaster embryo undergoes a number of cell shape changes that are highly amenable to live confocal imaging. Cell shape changes in the fly are analogous to those in higher organisms, and they drive tissue morphogenesis. So, in many cases, their study has direct implications for understanding human disease (Table 1)1-5. On the sub-cellular scale, these cell shape changes are the product of activities ranging from gene expression to signal transduction, cell polarity, cytoskeletal remodeling and membrane trafficking. Thus, the Drosophila embryo provides not only the context to evaluate cell shape changes as they relate to tissue morphogenesis, but also offers a completely physiological environment to study the sub-cellular activities that shape cells.
The protocol described here is designed to image a specific cell shape change called cellularization. Cellularization is a process of dramatic plasma membrane growth, and it ultimately converts the syncytial embryo into the cellular blastoderm. That is, at interphase of mitotic cycle 14, the plasma membrane simultaneously invaginates around each of ~6000 cortically anchored nuclei to generate a sheet of primary epithelial cells. Counter to previous suggestions, cellularization is not driven by Myosin-2 contractility6, but is instead fueled largely by exocytosis of membrane from internal stores7. Thus, cellularization is an excellent system for studying membrane trafficking during cell shape changes that require plasma membrane invagination or expansion, such as cytokinesis or transverse-tubule (T-tubule) morphogenesis in muscle.
Note that this protocol is easily applied to the imaging of other cell shape changes in the fly embryo, and only requires slight adaptations such as changing the stage of embryo collection, or using "embryo glue" to mount the embryo in a specific orientation (Table 1)8-19. In all cases, the workflow is basically the same (Figure 1). Standard methods for cloning and Drosophila transgenesis are used to prepare stable fly stocks that express a protein of interest, fused to Green Fluorescent Protein (GFP) or its variants, and these flies provide a renewable source of embryos. Alternatively, fluorescent proteins/probes are directly introduced into fly embryos via straightforward micro-injection techniques9-10. Then, depending on the developmental event and cell shape change to be imaged, embryos are collected and staged by morphology on a dissecting microscope, and finally positioned and mounted for time-lapse imaging on a confocal microscope.

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

Early development of the fruit fly, Drosophila melanogaster, is characterized by a number of cell shape changes that are well suited for imaging approaches. This article will describe basic tools and methods required for live confocal imaging of Drosophila embryos, and will focus on a cell shape change called cellularization.

Changement de forme d&#39;imagerie cellulaire en vie Drosophile Embryons

The developing Drosophila melanogaster embryo undergoes a number of cell shape changes that are highly amenable to live confocal imaging.  Cell shape ...

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

Double-strand RNA-mediated interference (RNAi) is an effective strategy to knock down target gene expression1-3. It has been applied to many model systems including plants, invertebrates and vertebrates. There are various methods to achieve RNAi in vivo4,5. For example, the target gene may be transformed into an RNAi vector, and then either permanently or transiently transformed into cell lines or primary cells to achieve gene knockdown effects; alternatively synthesized double-strand oligonucleotides from specific target genes (RNAi oligos) may be transiently transformed into cell lines or primary cells to silence target genes; or synthesized double-strand RNA molecules may be microinjected into an organism. Since the nematode C. elegans uses bacteria as a food source, feeding the animals with bacteria expressing double-strand RNA against target genes provides a viable strategy6. Here we present an RNAi feeding method to score body size phenotype. Body size in C. elegans is regulated primarily by the TGF- &beta; - like ligand DBL-1, so this assay is appropriate for identification of TGF-&beta; signaling components7. We used different strains including two RNAi hypersensitive strains to repeat the RNAi feeding experiments. Our results showed that rrf-3 strain gave us the best expected RNAi phenotype. The method is easy to perform, reproducible, and easily quantified. Furthermore, our protocol minimizes the use of specialized equipment, so it is suitable for smaller laboratories or those at predominantly undergraduate institutions.

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

We demonstrate how to use the RNAi feeding technique to knock down target genes and score body size phenotype in C. elegans. This method could be used for a large scale screen to identify potential genetic components of interest, such as those involved in body size regulation by DBL-1/TGF-&beta; signaling.

En utilisant l&#39;ARN médiée par la stratégie d&#39;alimentation interférences à l&#39;écran pour des gènes impliqués dans le règlement de la taille du corps du nématode<em&gt; C. elegans</em

Double-strand RNA-mediated interference (RNAi) is an effective strategy to knock down target gene expression1-3. It has been applied to many model systems ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

The proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal development in all metazoan organisms. Apoptotic cell clearance is a highly dynamic process intimately associated with cell death; unengulfed apoptotic cells are barely seen in vivo under normal conditions. In order to understand the different steps of apoptotic cell clearance and to compare 'professional' phagocytes - macrophages and dendritic cells to 'non-professional' - tissue-resident neighboring cells, in vivo live imaging of the process is extremely valuable. Here we describe a protocol for studying apoptotic cell clearance in live Drosophila embryos. To follow the dynamics of different steps in phagocytosis we use specific markers for apoptotic cells and phagocytes. In addition, we can monitor two phagocyte systems in parallel: 'professional' macrophages and 'semi-professional' glia in the developing central nervous system (CNS). The method described here employs the Drosophila embryo as an excellent model for real time studies of apoptotic cell clearance.

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Here we describe an effective method for studying dynamics of apoptotic cell clearance in vivo. This method employs live Drosophila embryos as a powerful model for monitoring phagocytosis of apoptotic cells using specific labeling of apoptotic cells and phagocytes.

Vivre imagerie de dédouanement cellulaire par apoptose au cours<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryogenèse

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

An Innovative Method for Exosome Quantification and Size Measurement

Although the biological importance of exosomes has recently gained an increasing amount of scientific and clinical attention, much is still unknown about their complex pathways, their bioavailability and their diverse functions in health and disease. Current work focuses on the presence and the behavior of exosomes (in vitro as well as in vivo) in the context of different human disorders, especially in the fields of oncology, gynecology and cardiology.
Unfortunately, neither a consensus regarding a gold standard for exosome isolation exists, nor is there an agreement on such a method for their quantitative analysis. As there are many methods for the purification of exosomes and also many possibilities for their quantitative and qualitative analysis, it is difficult to determine a combination of methods for the ideal approach. 
Here, we demonstrate nanoparticle tracking analysis (NTA), a semi-automated method for the characterization of exosomes after isolation from human plasma by ultracentrifugation. The presented results show that this approach for isolation, as well as the determination of the average number and size of exosomes, delivers reproducible and valid data, as confirmed by other methods, such as scanning electron microscopy (SEM).

A method for isolation of exosomes from whole blood and further analysis by nanoparticle tracking using a semi-automatic instrument is presented in this article. The presented technology provides an extremely sensitive method for visualizing and analyzing particles in liquid suspension.

Une méthode innovante pour Exosome Quantification et Taille Mesure

Although the biological importance of exosomes has recently gained an increasing amount of scientific and clinical attention, much is still unknown about ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ecologically-important endpoints, though they are rarely considered in toxicological studies. D. melanogaster is emerging as a toxicology model for the behavioral, neurological, and genetic impacts of toxicants, to name a few. More importantly, species in the genus Drosophila can be utilized as a model system for an integrative framework approach to incorporate emergent properties and answer ecologically-relevant questions in&#160;toxicology research. The aim of this paper is to provide a protocol for exposing species in the genus Drosophila to pollutants to be used as a model system for a range of phenotypic outputs and ecologically-relevant questions. More specifically, this protocol can be used to 1) link multiple biological levels of organization and understand the impact of toxicants on both individual- and population-level fitness; 2) test the impact of toxicants at different stages of developmental exposure; 3) test multigenerational and evolutionary implications of pollutants; and 4) test multiple contaminants and stressors simultaneously.

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

In this paper, we provide a detailed protocol for exposing species in the genus Drosophila to pollutants with the goal of studying the impact of exposure on a range of phenotypic outputs at different developmental stages and for more than one generation.

Protocole expérimental pour l’utilisation de drosophile comme un système modèle d’invertébrés pour les essais de toxicité en laboratoire

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis

Here, we describe a protocol for the implementation of a heterologous mouse model in which progression of endometriosis can be assessed in real time through noninvasive monitoring of fluorescence emitted by implanted ectopic human endometrial tissue. For this purpose, biopsies of human endometrium are obtained from donor women ongoing oocyte donation. Human endometrial fragments are cultured in the presence of adenoviruses engineered to express cDNA for the reporter fluorescent protein mCherry. Upon visualization, labeled tissues with an optimal rate of fluorescence after infection are subsequently chosen for the implantation in recipient mice. One week prior to the implantation surgery, recipient mice are oophorectomized, and estradiol pellets are placed subcutaneously to sustain the survival and growth of lesions. On the day of surgery mice are anesthetized, and peritoneal cavity accessed through a small (1.5 cm) incision by the linea-alba. Fluorescently labeled implants are tweezed, briefly soaked in glue and attached to the peritoneal layer. Incisions are sutured, and animals left to recover for a couple of days. Fluorescence emitted by endometriotic implants is usually non-invasively monitored every 3 days for 4 weeks with an in vivo imaging system. Variations in the size of endometriotic implants can be estimated in real time by quantification of the mCherry signal and normalization against the initial time-point showing maximal fluorescence intensity.
Traditional preclinical rodents of models of endometriosis do not allow non-invasive monitoring of lesion in real time but rather allow evaluation of the effects of drugs assayed at the end point. This protocol allows one to track lesions in real time and is more useful to explore the therapeutic potential of drugs in preclinical models of endometriosis. The main limitation of the model thus generated is that non-invasive monitoring is not possible over long periods of time due to the episomal expression of Ad-virus.

Here, we present a protocol for live-imaging of fluorescently labeled human endometrial fragments grafted in mice. The method allows studying the effects of drugs of choice on endometriotic lesion size through monitoring and quantification of fluorescence emitted by the fluorescent reporter on real time

Surveillance non invasive de la taille de la lésion dans un modèle murin hétérologues d’endométriose

Here, we describe a protocol for the implementation of a heterologous mouse model in which progression of endometriosis can be assessed in real time ...

Establishment and Genetic Manipulation of Murine Hepatocyte Organoids

The liver is the largest organ in mammals. It plays an important role in glucose storage, protein secretion, metabolism and detoxification. As the executor for most of the liver functions, primary hepatocytes have limited proliferating capacity. This requires the establishment of ex vivo hepatocyte expansion models for liver physiological and pathological research. Here, we isolated murine hepatocytes by two steps of collagenase perfusion and established a 3D organoid culture as the 'mini-liver' to recapitulate cell-cell interactions and physical functions. The organoids consist of heterogeneous cell populations including progenitors and mature hepatocytes. We introduce the process in detailed to isolate and culture the murine hepatocytes or fetal hepatocyte to form organoids within 2-3 weeks and show how to passage them by mechanically pipetting up and down. In addition, we will also introduce how to digest the organoids into single cells for lentivirus infection of shRNA/ectopic construction, siRNA transfection and CRISPR-Cas9 engineering. The organoids can be used for drug screens, disease modelling, and basic liver research by modeling liver biology and pathobiology.

A long-term ex vitro 3D organoid culture system was established from mouse hepatocytes. These organoids can be passaged and genetically manipulated by lentivirus infection of shRNA/ectopic construction, siRNA transfection and CRISPR-Cas9 engineering.

Établissement et manipulation génétique d’organoïdes d’hépatocytes murins

The liver is the largest organ in mammals. It plays an important role in glucose storage, protein secretion, metabolism and detoxification. As the ...

Dissecting, Fixing, and Visualizing the Drosophila Pupal Notum

The pupae of Drosophila melanogaster are immobile for several days during metamorphosis, during which they develop a new body with a thin transparent adult integument. Their immobility and transparency make them ideal for in vivo live imaging experiments. Many studies have focused on the dorsal epithelial monolayer of the pupal&#160;notum because of its accessibility and relatively large size. In addition to the studies of epithelial mechanics and development, the notum has been an ideal tissue to study wound healing. After an injury, the entire epithelial repair process can be captured by live imaging over 6-12 h. Despite the popularity of the notum for live imaging, very few published studies have utilized fixed notum samples. Fixation and staining are common approaches for nearly all other Drosophila tissues, taking advantage of the large repertoire of simple cellular stains and antibodies. However, the pupal notum is fragile and prone to curling and distortion after removal from the body, making it challenging to complement live imaging. This protocol offers a straightforward method for fixing and staining the pupal notum, both intact and after laser-wounding. With this technique, the ventral side of the pupa is glued down to a coverslip to immobilize the pupa, and the notum is carefully removed, fixed, and stained. The notum epithelium is mounted on a slide or between two coverslips to facilitate imaging from the tissue&#39;s dorsal or ventral side.

Dissecting, Fixing, and Visualizing the Drosophila Pupal Notum

The present protocol details the preparation and visualization of fixed tissue of the Drosophila pupal notum. It can be used for either intact or wounded tissue, and the original architecture of the tissue is preserved. The procedures for dissecting, fixing, and staining are all described in this article.

Disséquer, fixer et visualiser la nymphe de la drosophile Notum

The pupae of Drosophila melanogaster are immobile for several days during metamorphosis, during which they develop a new body with a thin transparent ...

Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and axonal damage. Currently, there are no measures to cure MS completely, but multiple disease-modifying therapies (DMT) are available to control and mitigate disease progression. There are significant similarities between the CNS pathological features of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) and MS patients. EAE has been widely used as a representative model to determine MS drugs' efficacy and explore the development of new therapies for MS disease. Active induction of EAE in mice has a stable and reproducible effect and is particularly suitable for studying the effects of drugs or genes on autoimmune neuroinflammation. The method of immunizing C57BL/6J mice with myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG35-55) and the daily assessment of disease symptoms using a clinical scoring system is mainly shared. Given the complex etiology of MS with diverse clinical manifestations, the existing clinical scoring system can't satisfy the assessment of disease treatment. To avoid the shortcomings of a single intervention, new indicators to assess EAE based on clinical manifestations of anxiety-like moods and osteoporosis in MS patients are created to provide a more comprehensive assessment of MS treatment.

The present protocol describes the induction of experimental autoimmune encephalomyelitis in a mouse model using myelin oligodendrocyte glycoprotein and monitoring the disease process using a clinical scoring system. Experimental autoimmune encephalomyelitis-related symptoms are analyzed using mouse femur micro-computed tomography analysis and open field test to assess the disease process comprehensively.

Induction et divers indicateurs d’évaluation de l’encéphalomyélite auto-immune expérimentale

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and ...