Les auteurs tiennent à remercier tous les membres Jarvis laboratoire qui ont amélioré le protocole au fil des ans.

<ol>
	<li>Clayton, D. F., Huecas, M. E., Sinclair-Thompson, E. Y., Nastiuk, K. L., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probes+for+rare+mRNAs+reveal+distributed+cell+subsets+in+canary+brain.">Probes for rare mRNAs reveal distributed cell subsets in canary brain.</a> Neuron. 1, 249-261 (1988).</li><li>Wada, K., Sakaguchi, H., Jarvis, E. D., Hagiwara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+glutamate+receptors+in+avian+neural+pathways+for+learned+vocalization.">Differential expression of glutamate receptors in avian neural pathways for learned vocalization.</a> J. Comp. Neurol. 476, 44-64 (2004).</li><li>Haesler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxP2+expression+in+avian+vocal+learners+and+non-learners.">FoxP2 expression in avian vocal learners and non-learners.</a> J. Neurosci. 24, 3164-3175 (2004).</li><li>Jarvis, E. D., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor-driven+gene+expression.">Motor-driven gene expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 4097-4102 (1997).</li><li>Holzenberger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expression+of+insulin-like+growth+factor+II+in+the+songbird+brain.">Selective expression of insulin-like growth factor II in the songbird brain.</a> J. Neurosci. 17, 6974-6987 (1997).</li><li>Mahmood, R., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+hybridization+of+radioactive+riboprobes+to+RNA+in+tissue+sections.">In-situ hybridization of radioactive riboprobes to RNA in tissue sections.</a> Methods Mol. Biol. 461, 675-686 (2008).</li><li>Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+messenger+RNA+by+in+situ+hybridization+to+tissue+sections+and+whole+mounts.">Detection of messenger RNA by in situ hybridization to tissue sections and whole mounts.</a> Methods Enzymol. 225, 361-373 (1993).</li><li>Acloque, H., Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+analysis+of+chick+embryos+in+whole-mount+and+tissue+sections.">In situ hybridization analysis of chick embryos in whole-mount and tissue sections.</a> Methods Cell Biol. 87, 169-185 (2008).</li><li>Moorman, A. F., Houweling, A. C., de Boer, P. A., Christoffels, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+nonradioactive+detection+of+mRNA+in+tissue+sections:+novel+application+of+the+whole-mount+in+situ+hybridization+protocol.">Sensitive nonradioactive detection of mRNA in tissue sections: novel application of the whole-mount in situ hybridization protocol.</a> J. Histochem. Cytochem. 49, 1-8 (2001).</li><li>Horita, H., Wada, K., Rivas, M. V., Hara, E., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dusp1+immediate+early+gene+is+regulated+by+natural+stimuli+predominantly+in+sensory+input+neurons.">The dusp1 immediate early gene is regulated by natural stimuli predominantly in sensory input neurons.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2873-2901 (2010).</li><li>Braissant, O., Wahli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+in+situ+hybridization+protocol+using+non-radioactively+labelled+probes+to+detect+abundant+and+rare+mRNAs+on+tissue+sections.">A simplified in situ hybridization protocol using non-radioactively labelled probes to detect abundant and rare mRNAs on tissue sections.</a> Biochemica. 1, 10-16 (1998).</li><li>Kubikova, L., Wada, K., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+receptors+in+a+songbird+brain.">Dopamine receptors in a songbird brain.</a> J. Comp. Neurol. 518, 741-769 (2010).</li><li>Wada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+neuroethological+approach+for+identifying+and+characterizing+a+cascade+of+behaviorally+regulated+genes.">A molecular neuroethological approach for identifying and characterizing a cascade of behaviorally regulated genes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 15212-15217 (2006).</li><li>Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avian+brains+and+a+new+understanding+of+vertebrate+brain+evolution.">Avian brains and a new understanding of vertebrate brain evolution.</a> Nat. Rev. Neurosci. 6, 151-159 (2005).</li><li>Hoke, K. L., Ryan, M. J., Wilczynski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+cues+shift+functional+connectivity+in+the+hypothalamus.">Social cues shift functional connectivity in the hypothalamus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 10712-10717 (2005).</li><li>Burmeister, S. S., Jarvis, E. D., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+behavioral+and+genomic+responses+to+social+opportunity.">Rapid behavioral and genomic responses to social opportunity.</a> PLoS. Biol. 3, e363 (2005).</li><li>Jarvis, E. D., Schwabl, H., Ribeiro, S., Mello, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+gene+regulation+by+territorial+singing+behavior+in+freely+ranging+songbirds.">Brain gene regulation by territorial singing behavior in freely ranging songbirds.</a> Neuroreport. 8, 2073-2077 (1997).</li><li>Jarvis, E. D., Scharff, C., Grossman, M. R., Ramos, J. A., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+whom+the+bird+sings:+context-dependent+gene+expression.">For whom the bird sings: context-dependent gene expression.</a> Neuron. 21, 775-788 (1998).</li><li>Feenders, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mapping+of+movement-associated+areas+in+the+avian+brain:+a+motor+theory+for+vocal+learning+origin.">Molecular mapping of movement-associated areas in the avian brain: a motor theory for vocal learning origin.</a> PLoS One. 3, e1768 (2008).</li><li>Chen, C. C., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distributions+of+two+gonadotropin-releasing+hormone+receptor+types+in+a+cichlid+fish+suggest+functional+specialization.">Distributions of two gonadotropin-releasing hormone receptor types in a cichlid fish suggest functional specialization.</a> J. Comp. Neurol. 495, 314-323 (2006).</li></ol>

Nous n&#39;avons rien à communiquer.

Radioactifs hybridation in situ de l&#39;expression des ARNm est largement utilisé à des fins multiples, y compris pour l&#39;étude de l&#39;organisation des tissus régionaux, types de cellules, et l&#39;activité fonctionnelle du cerveau 2-5,10,12-14. L&#39;utilisation ultérieure est sur les gènes dont l&#39;expression d&#39;ARNm dans le cerveau dépend de l&#39;activité neuronale accrue, souvent appelés dépendants de l&#39;activité des gènes ou gènes précoces immédiats. Avec ces utilisations, notre méthode a été appliquée à travers de multiples espèces, y compris chez les oiseaux, les mammifères (par exemple l&#39;homme), les poissons et les amphibiens; dans de nombreux tissus, y compris le cerveau, la peau et le muscle, et les âges, y compris les nouveau-nés multiples ou les nouveau-nés, les jeunes , les adultes, et ici dans les sections d&#39;embryons entiers 2,3,5,15-17. Les caractéristiques particulières de notre protocole comprennent: (1) Elle produit un équilibre entre la spécificité anatomique et la spécificité quantitative. Afin de quantifier l&#39;expression des gènes sur le film x-ray, nous prenons des photos numériques des images (ex:. Fig 1A et 1B), utiliser le Photoshop fonction histogramme (Adobe) pour mesurer la densité de pixels dans les régions d&#39;intérêt et soustraire le bruit de fond sur le film extérieur du tissu mais encore sur la lame de verre 2,4. Pour quantifier l&#39;expression au niveau cellulaire, nous prenons des images de grains d&#39;argent sur ​​les cellules à fort grossissement (40-100X; Fig 4). Nous utilisons ensuite le seuil et les fonctions de mesure de J image par Wayne Rasband au NIH pour compter le nombre de grains d&#39;argent dans l&#39;image, il faut soustraire le nombre d&#39;arrière-plan dans un domaine similaire, sans cellules sur la lame de verre, il faut diviser par le nombre de cellules, pour obtenir un valeurs d&#39;expression par la cellule. 4,18 (2), il peut être débit relativement élevé, permettant le traitement de 100-200 lames simultanément, en raison de la lamelle d&#39;étanchéité étanche créée par le bain d&#39;huile minérale. Standard des méthodes d&#39;hybridation in situ prendre plus de temps pour sceller les diapositives avec du parafilm, vernis à ongles, et d&#39;autres moyens, où les diapositives prennent beaucoup d&#39;espace; (3) Il est trèssensibles pour les transcriptions de faible abondance en raison de sulfate de dextran et la solution de Denhardt dans le tampon d&#39;hybridation 2,13; (4) L&#39;approche d&#39;imagerie fond noir donne des images à contraste élevé en raison de prendre des photos sous un éclairage sur fond noir sur un microscope à dissection 4,5. En outre, il permet la détection sensible de petits changements dans l&#39;expression des gènes, comme dans l&#39;expression des gènes dépendant de l&#39;activité pour identifier les régions cérébrales activées lors de la perception spécifiques et la production de comportements spécifiques 19. Les limitations relatives à la non-radioactifs protocoles sont que celui-ci sont plus claires dans la résolution cellulaire et l&#39;emplacement de l&#39;ARNm dans la cellule, et en travaillant avec l&#39;émulsion est très sensible à la manipulation et la lumière. Il est possible de combiner notre méthode avec d&#39;autres méthodes, telles que la non-radioactifs hybridation in situ pour étiqueter l&#39;expression des ARNm de plus d&#39;un gène dans le tissu même 10,17,20. Il peut être combiné avec immunocytochimied&#39;étiqueter les deux ARN et expression de la protéine sur le même échantillon, afin de co-localiser l&#39;ARNm avec certains types de cellules 10. Les modifications du protocole nécessaires à ces expériences de double marquage sont décrites dans les références citées. En résumé, notre approche facilite la compréhension du calendrier et de localisation cellulaire de l&#39;expression des gènes dans le but de comprendre l&#39;organisation la région, l&#39;activité des tissus fonctionnels, et la fonction des gènes.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> L&#39;anhydride acétique </td><td> VWR </td><td> MK242002 </td><td></td></tr><tr><td> Chloroforme </td><td> VWR </td><td> BDH1109 </td><td></td></tr><tr><td> Acétate de violet de crésyl </td><td> Sigma </td><td> C5042 </td><td></td></tr><tr><td> Cryostat </td><td> Thermo Scientific </td><td> Microm HM550 </td><td></td></tr><tr><td> Formamide déionisé </td><td> Sigma </td><td> F9037 </td><td></td></tr><tr><td> TNT </td><td> Promega </td><td> P1171 </td><td> 100 mM </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> ED </td><td></td></tr><tr><td> Intégration moule </td><td> VWR </td><td> 15160-215 </td><td></td></tr><tr><td> Fisher marque SuperFrost Plus diapositive </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-034-979 </td&gt; <td></td></tr><tr><td> Formaldéhyde </td><td> VWR </td><td> BDH0506-4LP </td><td></td></tr><tr><td> Le formamide </td><td> Sigma </td><td> F7508 </td><td></td></tr><tr><td> Geneclean kit </td><td> Q-Bio gène </td><td> 1001-200 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak BioMax MR du film </td><td> Sigma </td><td> Z350370 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak NTB Emulsion </td><td> Carestream Health </td><td> 8895666 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Professional développeur D19 </td><td> Kodak </td><td> 1462593 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak professionnel Fixer </td><td> Kodak </td><td> 1971746 </td><td></td></tr><tr><td> β-mercaptoéthanol </td><td> Calbiochem </td><td> 444203 </td><td></td></tr><tr><td> Huile minérale </td><td> VWR </td><td> IC15169491 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH </td><td> VWR </td><td> SX0600-1 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldéhyde </td><td> Sigma </td><td> 76240 </td><td></td></tr><tr><td> Un Poly </td><td> Invitrogen </td><td> POLYA.GF </td><td></td></tr><tr><td> rATP </td><td> Promega </td><td> P1132 </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> rCTP </td><td> Promega </td><td> P1142 </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> rGTP </td><td> Promega </td><td> P1152 </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> RNasin </td><td> Promega </td><td> N2111 </td><td> 40Units/μl </td></tr><tr><td> S 35 UTP </td><td> PerkinElmer </td><td> NEG039C001MC </td><td></td></tr><tr><td> Sécurité-Solve solution </td><td> Sécurité Résolvez recherche Products International </td><td> 111177 </td><td></td></tr><tr><td> Acétate de sodium </td><td> Sigma </td><td> S7899 </td><td> 3M </td></tr><tr><td> Phosphate de sodium dibasique </td><td> Sigma </td><td> S3264 </td><td></td></tr><tr><td> Phosphate monosodique </td><td> Sigma </td><td> S3139 </td><td></td></tr><tr><td> SP6ARN polymérase </td><td> Promega </td><td> P1085 </td><td></td></tr><tr><td> Coloration grille métallique </td><td> Sciences Electron Microscopy </td><td> 70312-54 </td><td></td></tr><tr><td> T7 RNA polymérase </td><td> Promega </td><td> P2075 </td><td></td></tr><tr><td> Tissue-Tek octobre </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Un tampon de transcription 5x </td><td> Promega </td><td> P1181 </td><td></td></tr><tr><td> Triéthanolamine </td><td> VWR </td><td> IC15216391 </td><td></td></tr><tr><td> Tris-HCl (1 M, pH 8,0) </td><td> VWR </td><td> 101449-446 </td><td></td></tr><tr><td> ARNt </td><td> Roche </td><td> 10109509001 </td><td></td></tr></tbody></table> Solutions: <ol><li> Réactifs pour la fabrication de ribosondes: 1,5 matrice d&#39;ADN ul (0,2-0,3 pg / pl), 2 pl de tampon de transcription 5x optimisé, 1 pl de la TNT 100mm (livré avec la polymérase de Promega, mélangebien à la température ambiante), 0,3 pi de RNasin (40 unités / pl), 1,5 pi de solution AGC mélange ribonucléotide, 3,5 l de S 35 UTP, et 1 polymérase ARN ul. Apportez jusqu&#39;à 10 pi avec une eau sans nucléase. </li><li> Solution AGC mélange ribonucléotide: mélanger des quantités égales de 10 mM ATP, GTP et CTP ensemble. </li><li> Solution d&#39;acétate de sodium pour EtOH la précipitation pour éliminer gratuitement S 35 UTP: 40 pl de RNase et DNase eau libre, 5 ul d&#39;acétate de sodium 3M, et 125 ul d&#39;EtOH à 100%. </li><li> Tampon d&#39;hybridation (10ml stock): 5 ml de formamide désionisée 100%, 600 pi de NaCl 5M, 1M Tris-HCl (pH = 8,0), 240 ul d&#39;EDTA 0,5 M (pH = 8,0), 100 pi de solution de 100x Denhart, 100 pi de 1 million de TNT, 250 pi de 20mg/ml ARNt, 125 pi de 20 mg / ml de poly A, et 1 g de sodium de sulfate de dextrane. Ajouter de l&#39;eau traitée au DEPC à porter le volume total à 10 ml. Agiter vigoureusement et incuber à 55 ° C jusqu&#39;à ce que tout le sulfate de sodium dextran est dissoute. Stockez le tampon d&#39;hybridation dans-20 ° C, ce qui est bon pour environ 6 mois. </li><li> 4% solution tamponnée paraformaldéhyde: ajouter 40 g de paraformaldéhyde en ml d&#39;eau distillée 760 dans un ballon désigné pour paraformaldéhyde, la chaleur à 50 ° C sur une plaque chaude, tout en agitant. Ajouter 320 ul de NaOH 10N pour aider à dissoudre le paraformaldéhyde. Après la dissolution (~ 10 min), ajouter 100 ml de PBS 10X, et porter le volume avec de l&#39;eau distillée jusqu&#39;à 1 litre. Remuer et chauffer la solution jusqu&#39;à ce que le paraformaldéhyde est dissous. Le pH doit être de 7,4. </li><li> L&#39;acétylation de tampon: 13,6 ml de triéthanolamine plus 2,52 ml d&#39;anhydride acétique dans 1 litre d&#39;eau distillée. </li><li> 20x PESS solution: 3M NaCl, 200 mM NaH 2 PO 4-H 2 O, et 200 mM d&#39;EDTA dans l&#39;eau distillée. Ajuster la solution à pH 7,4 avec NaOH 10N. </li><li> 10x tampon PBS: 80 g de NaCl, 2,0 g de KCl, 14,4 g de Na 2 HPO 4, et 2,4 g de KH 2 PO 4 dans l&#39;eau distillée. Ajuster la solution à pH 7,0 et porter le volume total à 1 Liter. </li><li> Deuxième solution de lavage: 0,1% β-mercaptoéthanol et 50% de formamide dans 2x SSPE </li><li> Crésyl solution d&#39;acétate de violet: 3% d&#39;acétate de crésyl violet dans l&#39;eau du robinet (eau distillée empêche la coloration bonne), dissous une nuit sous agitation dans un flacon à la température ambiante. Filtrez avec aspiration par le vide à travers un papier filtre Whatman 1mm et Büchner. </li></ol>

radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue

Connaissant le calendrier, le niveau, la localisation cellulaire, et le type de cellules qu&#39;un gène est exprimé dans contribue à notre compréhension de la fonction du gène. Chacune de ces fonctionnalités peut être accompli avec l&#39;hybridation in situ d&#39;ARNm dans les cellules. Nous présentons ici une méthode radioactive dans l&#39;hybridation in situ modifié à partir de Clayton et al. (1988) 1 qui a été travaillé avec succès dans notre laboratoire depuis de nombreuses années, en particulier pour les adultes cerveaux vertébrés 2-5. Les longues complémentaires ARN (ARNc) sondes à la séquence cible permet la détection de transcrits de faible abondance 6,7. Incorporation de nucléotides radioactifs dans les sondes d&#39;ARNc permet en outre la sensibilité de détection de transcrits de faible abondance et des analyses quantitatives, soit sensible à la lumière par un film radiographique ou recouverte d&#39;une émulsion sur le tissu. Ces méthodes de détection de fournir un enregistrement de longue durée de l&#39;expression du gène cible. Par rapport à la sonde non radioactive méthods, comme DIG-étiquetage, la méthode d&#39;hybridation sonde radioactive ne nécessite pas d&#39;amplification des mesures multiples en utilisant HRP-anticorps et / ou TSA kit pour détecter des transcrits de faible abondance. Par conséquent, cette méthode fournit une relation linéaire entre l&#39;intensité du signal et des quantités d&#39;ARNm ciblés pour l&#39;analyse quantitative. Il permet de traiter simultanément les diapositives 100-200. Il fonctionne bien pour les différents stades de développement d&#39;embryons. La plupart des études de développement de l&#39;expression des gènes utiliser des embryons entiers et non-radioactifs approches 8,9, en partie parce que les tissus embryonnaires est plus fragile que le tissu adulte, avec moins de cohésion entre les cellules, ce qui rend difficile de voir les frontières entre les populations de cellules avec des coupes de tissus. En revanche, notre approche radioactifs, en raison de la plus grande plage de sensibilité, est en mesure d&#39;obtenir un contraste plus élevé dans la résolution de l&#39;expression génique entre les régions des tissus, ce qui rend plus facile à voir les limites entre les populations. En utilisant cette méthode, les chercheurs pourraient révéler lasignification possible d&#39;un gène nouvellement identifié, et en outre prédire la fonction du gène d&#39;intérêt.

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Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Ce protocole est utilisé avec succès pour détecter quantitativement les niveaux et les schémas spatiaux de l&#39;expression des ARNm de multiples types de tissus à travers les espèces de vertébrés. La méthode peut détecter des transcrits de faible abondance et permet de traiter des centaines de diapositives simultanément. Nous présentons ce protocole en utilisant le profil d&#39;expression de la formation du cerveau embryonnaire aviaire comme un exemple.

Radioactif In situ D&#39;hybridation pour détecter divers profils d&#39;expression génique dans les tissus

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

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Research

JoVE Journal

Biology

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

15.5K vues.  Duke University. Ce protocole est utilisé avec succès pour détecter quantitativement les niveaux et les schémas spatiaux de l'expression des ARNm de multiples types de tissus à travers les espèces de vertébrés. La méthode peut détecter des transcrits de faible abondance et permet de traiter des centaines de diapositives simultanément. Nous présentons ce protocole en utilisant le profil d'expression de la formation du cerveau embryonnaire aviaire comme un exemple.