저자는 수술 기법에 대한 지원은 Adriane 모슬리와 Libuse 위 Jerabek (스탠포드) 감사의 말씀을 전합니다.

모든 동물 실험은 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 UCLA의 동물 관리 및 사용위원회의 지침과 건강 가이드의 국립 연구소에 의해 수행되었다. 아래에 기술 된 절차의 지속 기간은 시작부터 끝까지 약 45-60 분이다. 1. 외과 분야의 제조 <ol><li> 깨끗한 동물 수술 방에서 절차를 수행합니다. </li><li> 장비 : 이소 플루 란 기화기, 가열 패드 Gaymer T 펌프. </li><li> 무균 도구 : 두 개의 곡선 포셉, 미세 가위, 바늘 홀더. </li><li> 멸균 장갑은 전체 절차를 수행하는 동안 사용되어야한다. </li></ol> 2. 동물의 준비 <ol><li> 같은 케이지에서 유사한 무게 및 크기의 동일한 유전 적 배경에서 두 남성 또는 여성 마우스, 배치하고 조화로운 공동 생활을 보장하기 위해 최소 2 주에 모니터링 할 수 있습니다. 여성 생쥐 인해 덜 공격적인 행동 선호된다. </li><li> 동물을 마취이소 플루 란 기화기를 사용하여. 포지 인감 유도 챔버에 넣고 마우스는 이소 플루 란 기화기 (4-5 % 년 V / V)에 연결. 마취가 유도되면, 이소 플루 란 (1.5 ~ 2 %의 V / V)에 연결된 코 콘을 통해 절차를 통하여 마취 모피 면도 영역에 동물을 전송하고 유지한다. 눈의 건조를 방지하기 위해 Q-팁 안과 연고를 적용합니다. </li><li> 앙와위에서 동물을 놓습니다. 철저 오른쪽이 약 1cm에 1cm 무릎 팔꿈치 위에서 시작에 배치 좌측 및 마우스의 오른쪽 측면에 배치 된 마우스의 좌측 면도. </li><li> 무균 철저 알코올 잎사귀 뒤에 베타 딘 적신 물티슈 (2 배)을 닦아 면도 영역을 준비합니다. 살균 패드로 덮여 가열 패드에서 마우스를 놓습니다. </li><li> 진통제의 경우, 각각 10 ㎎ / ㎏과 0.1 ㎎ / ㎏의 용량으로 복강 또는 피하 Carprofen 및 프레 놀핀을 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 로, 다시 다시, 그들의 편에 동물을 배치위로 향하게 면도 영역을 djacent. 외과 영역의 오염을 방지하기 위해 작업에만 영역을 노출 멸균 드레이프와 마우스를 포함한다. 수술을 수행 할 때 무균 유지 작은 주름 구멍을 만듭니다. 우리는 녹화하는 동안 더 나은보기를 가질 주름 창이 큰했다. </li></ol> 3. Parabiosis <ol><li> 날카로운 가위를 사용하여 팔꿈치 위 0.5 cm 각 동물 시작하는 면도 측면에 무릎 관절 아래 0.5 cm (그림 1)에있는 모든 방법을 길이 방향 피부 절개를 수행합니다. 절개 후, 부드럽게 곡선 포셉 한 쌍의 피부를 개최하여 피하 근막으로부터 피부를 분리하고 무료 피부의 0.5 cm를 만드는 두 번째 쌍의 근막을 분리합니다. 전체 절개를 따라 이러한 분리를 수행합니다. </li><li> 다른 오른쪽 주두에 동물의 왼쪽 주두를 부착하여 가입을 시작합니다. olecranons 및 무릎 관절은 모두 명확하게 구별 할 수있는 다음과 같은 일이다전자 피부 절개. 결합을 용이하게하기 위해, 먼저 마우스의 팔꿈치를 구부리고 주두 아래의 비 흡수성 3-0 봉합사의 바늘을 전달합니다. 마찬가지로, 두 번째 마우스의 팔꿈치를 구부리고 그 아래 같은 봉합을 전달합니다. 이중 수술 매듭으로 단단히 관절을 연결합니다. </li><li> 동일한 절차에 따라 무릎 관절을 연결합니다. </li><li> 조인트의 부착에 이어 연속 흡수성 5-0 Vicryl 봉합사가 무릎을 향해 팔꿈치으로부터 배쪽으로부터 시작이 동물의 피부를 연결한다. 피부 파열과 분리를 방지하기 위해 팔꿈치와 무릎 주변에있는 피부의 단단한 봉합 폐쇄를 수행합니다. 복부 피부 부착이 완료되면, 이중 수술 매듭을 수행합니다. 발생하기 쉬운 위치에 마우스를 놓고 두 번 수술 매듭으로 끝나는 봉합 등쪽을 계속합니다. 봉합사의 연속성을 확인하고 개구의 부족을 확인한다. </li><li> dehy을 방지하기 위해 피하 각 마우스에 0.9 % NaCl을 0.5 ㎖를 관리dration. </li></ol> 4. 수술 후 회복 <ol><li> 복구 될 때까지 가열 패드에 동물이 오지 않게하십시오. </li><li> 복구 후, 진통제 carprofen 및 부 프레 노르 핀을 제공합니다. (단계 2.5) 전술 한 바와 같은 용량에서 48 시간 동안 각각 복강 또는 피하 매 24 및 12 시간을 반복합니다. 이러한 흔들림 등의 통증과 고통의 흔적을 동물을 모니터링, 꼬리의 혼수, 씹는 등의 손질의 부족은 2 주 동안 매일, 다시 아치. </li><li> 예방, 2 mg의 외상 치료 / ㎖ +0.4 mg의 세균 감염을 방지하기 위해 10 일 동안 / ㎖ 트림 자신의 물병 설파 / 트리 메소 경구 현탁액으로 쥐를 치료​​. </li><li> 집 침구 소재의 구토물이기도를 막는 것을 방지하기 위해 모 놀리 식 침구 재료 (예를 들면 종이 타월이나 흡수성 살균 패드) 깨끗한 케이지의 각 parabiotic 쌍. 그들의 머리 위로와 흉골 드러 누움을 유지 할 수있을 때 침구 못 케이지에 동물을 반환합니다. 부담을 최소화하기 위해parabiotic 존재를 조절하면서 음식에 도달으로, 케이지 바닥에 적신 식품 알약을 배치합니다. 둥지 재료를 제공합니다. 1 ~ 2 주 parabiotic 마우스는 수술 쌍 앞과 뒷다리 - 사지에 일반적으로 ambulate하는 기능이 있습니다. </li><li> 혈액 키메라는 수술 후 10~14일 발생합니다. </li></ol> 5. 확인 및 역방향 절차 <ol><li> 2 주 혈액 키메라 (그림 3)을 확인하기 위해 유세포 분석을 위해 각 마우스의 꼬리 정맥에서 혈액을 채취 한 후. </li><li> 유세포 분석을위한 혈액 처리 : 10 mM의 EDTA 500 ㎕의 혈액 2 ~ 3 방울을 희석. (PBS에 희석) 2 % 덱스 트란의 500 μl를 추가, 철저하게 혼합하고, 30 분 동안 37 ° C에서 알을 품다. 5 분 동안 1,200 rpm에서 새로운 튜브, 스핀 뜨는을 전송하고 유세포 분석을 위해 PBS의 펠렛 세포 (또는 다른 버퍼)를 resuspend. </li><li> 실험 설계에 따라 parabiotic 쌍은 분리 될 수있다나중에 포인트를 톤. 우리의 경험, 우리는 어떤 합병증없이 9 개월 parabiosed 쌍을 유지하고있다. </li><li> 무균 수술 표면에 반대 절차를 수행합니다. (단계 2.2) 상술 한 바와 같이, 이소 플루 란 기화기 (4-5 %)에 접속하고 1.5-2 %의 이소 플루 란으로 마취를 유지 유도 챔버에 배치하여 마우스를 마취. </li><li> (2.3, 2.4 단계) 초기 봉합 주변 지역에서 머리를 제거하고 무균 전술 한 바와 같이 면도 영역을 준비합니다. </li><li> 진통제의 경우, 각각 10 ㎎ / ㎏과 0.1 ㎎ / ㎏의 용량으로 복강 또는 피하 Carprofen 및 프레 놀핀을 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> (단계 2.6) 전술 한 바와 같이 멸균 드레이프로 수술 영역을 커버. </li><li> 날카로운 가위를 사용하면, 측면 봉합을 따라 세로 절개를 통해 마우스를 분리하고 부드럽게 곡선 포셉 한 쌍의 두 생쥐 사이에 새로 형성된 근막을 분리합니다. 관절을 분리, 봉합사의 매듭을 잘라를 연결. 부드러운 가장자리를 달성하고 흡수 연속 5-0 코팅 Vicryl 봉합사로 피부를 다시 연결하는 절개를 따라 피부를 낸다. </li><li> 탈수를 방지하기 위해 각 마우스에 0.9 % 염화나트륨 피하 0.5 ㎖를 관리 할 수​​ 있습니다. 복구 될 때까지 가열 패드에 동물이 오지 않게하십시오. </li><li> 복구 후, 48 시간 동안 매 12 시간 진통 관리, carprofen (10 ㎎ / ㎏) 매 24 시간 및 부 프레 노르 핀 (0.1 ㎎ / ㎏)를 반복합니다. </li><li> 세균 감염이 10 일 동안 자신의 물병 설파 / 트리 메소 경구 현탁액 (2 밀리그램의 외상 치료 / ㎖ 0.4 밀리그램 / 밀리리터 트림)과 쥐를 치료​​ 방지합니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Bert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exp&#233;riences+et+consid&#233;rations+sur+la+greffe+animale.">Exp&#233;riences et consid&#233;rations sur la greffe animale.</a> Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 .</li><li>Bunster, E., Meyer, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+methods+of+parabiosis.">Improved methods of parabiosis.</a> Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).</li><li>Waskow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+parabiotic+mice+for+the+study+of+DC+and+DC+precursor+circulation.">Generation of parabiotic mice for the study of DC and DC precursor circulation.</a> Methods Mol. Biol. 595, 413-428 (2010).</li><li>Finerty, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parabiosis+in+physiological+studies.">Parabiosis in physiological studies.</a> Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).</li><li>Aicher, A., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonbone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells:+what+is+their+exact+location.">Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location.</a> Circ. Res. 101, e102 (2007).</li><li>Abe, S., Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+derived+from+the+circulation+contribute+to+the+repair+of+lung+injury.">Cells derived from the circulation contribute to the repair of lung injury.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170, 1158-1163 (2004).</li><li>Donskoy, E., Goldschneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymocytopoiesis+is+maintained+by+blood-borne+precursors+throughout+postnatal+life.+A+study+in+parabiotic+mice.">Thymocytopoiesis is maintained by blood-borne precursors throughout postnatal life. A study in parabiotic mice.</a> J. Immunol. 148, 1604-1612 (1992).</li><li>Powell, A. E., Anderson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fusion+between+Intestinal+epithelial+cells+and+macrophages+in+a+cancer+context+results+in+nuclear+reprogramming.">Fusion between Intestinal epithelial cells and macrophages in a cancer context results in nuclear reprogramming.</a> Cancer Res. 71, 1497-1505 (2011).</li><li>Duyverman, A. M., Kohno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transient+parabiosis+skin+transplantation+model+in+mice.">A transient parabiosis skin transplantation model in mice.</a> Nat. Protoc. 7, 763-770 (2012).</li><li>Ajami, B., Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+self-renewal+can+sustain+CNS+microglia+maintenance+and+function+throughout+adult+life.">Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life.</a> Nat. Neurosci. 10, 1538-1543 (2007).</li><li>Weissman, I. L., Jerabek, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+the+H-Y+antigen:+Requirement+for+male+T+cells,+but+not+B+cells,+to+induce+tolerance+in+neonatal+female+mice.">Tolerance and the H-Y antigen: Requirement for male T cells, but not B cells, to induce tolerance in neonatal female mice.</a> Transplantation. 37, 3-6 (1984).</li></ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없습니다.

여기서 설명하는 parabiosis 방법은 낮은 사망률 최소한의 기술적 어려움과 결과를 제시한다. 무릎 및 팔꿈치 관절의 첨부 파일 Bunster과 메이어 기술의 상당한 개선이다. 그러나, 프로 시저 따라서 수술 내내 멸균 조건의 유지가 필수적이다 침습 남아있다. 상기 수술 부위의 감염을 방지하기 위해서는 parabiosed 동물 항생제의 조합을 수신하고 주기적으로 감시하는 것이 중요하다. 회사 지원을 보장하?...

Parabiosis, 수술은이 유기체의 접합은, 제 공유 순환계를 연구하는 모델을 개발하는 방법으로 폴 버트에 의해 1864 년에 설명되고이 한 쥐의 피부와 근육 벽의 결합으로 구성 하였다. Parabiosis 염증 3의 사이트에있는 미세 혈관의 형성을 촉진하고 뇌하수체와 생식선뿐만 아니라 고혈압 4 신장의 역할 사이의 호르몬 통신 등의 생리 학적 연구에서 여러 응용 프로그램을 가지고 있습니다. 그것은 또한, 혈관 신생 4.0, 조혈 줄기 세포 (6)의 이동, 및 림프구 매매 7뿐만 아니라 종양 전이 8,9에서 염증성 또는 줄기 세포 순환의 역할과 동역학에서 전구 세포의 모집 및 통합을 조사하기 위해 사용되어왔다 및 신경 퇴행성 질환 10. parabiosis 거짓말의 한 가지 중요한 장점그의 제휴 동물 면역 반응을 유발하지 않고 세포의 이동과 혈관 신생을 허용, 일반적인 순환 항원을 공유 할 수 있습니다. 중요한 것은, 와이즈맨 등.이 남성과 여성의 생쥐 사이 parabiosis을 보여 주었다은 11 항체 안티 HY의 형성으로 이어질하지 않습니다. 폴 버트에 의해 설명 원래의 프로토콜에서 두 동물은 피부와 근육 벽 (1)의 연결을 통해 함께 합류했다. 그러나이 방법은, 동물에 상당한 부담을 야기 인해 상처의 감염에 높은 사망률의 결과. 그 이후 parabiosis 기술은 가장 지배적 인 1933 년 2 Bunster과 메이어에 의해 제안 된 프로토콜 인으로 여러 그룹에 의해 수정되었습니다. 그들의 방법은 동물에 대한 더 나은 지원 및 더 적은 고통을 허용, 견갑골의 관절, 체강, 피부의 결합 포함되어 있습니다. 동시에, 새로운 방법은 최소의 수술 치료와 유의 귀착cantly는 사망률을 감소. 여기에 설명 된 프로토콜은 덜 침습적이고 탄력이 합류 할 수 Bunster과 메이어 기술의 변형이다. 즉, 마우스는 팔꿈치, 무릎 관절뿐만 아니라 피부를 통해 연결된다. 따라서이 결합을 막고 피부의 확장과 적은 통증과 합병증의 원인이됩니다. 여기에서 우리는 마우스를 표현하는 구성 적 GFP에 야생형 (WT) 성인 마우스의 결합을 설명합니다. 우리는 수술 후 2 주 우리가 공유 순환계를 만드는이 수술의 효능을 입증 혈액 키메라 비율​​의 50 %를 달성 할 수 있음을 보여준다.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane-Phoenix</td>
			<td>Clipper</td>
			<td>NDC 57319-559-06</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Posi-Seal Induction Chamber</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0530-SM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Anesthesia System</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0007</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymer T Pump</td>
			<td>Gaymar Industries, Inc</td>
			<td>TP650</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming Blanket (Heating pad)</td>
			<td>Kent Scientific Corp</td>
			<td>TP-22G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5101</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>FST 14063-09</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>FST 12501-13</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical shaver</td>
			<td>Oster</td>
			<td>Golden A5</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

parabiosis in mice: a detailed protocol

Parabiosis 혈행의 공유를 허용하는 두 가지 생물의 연합 수술이다. 이 동물의 피부에 부착하면 염증 부위에서의 미세 혈관 형성을 촉진한다. Parabiotic 파트너는 순환 항원을 공유하고, 따라서 불리한 면역 반응의 무료입니다. 먼저 1864 년 1 폴 버트에 의해 설명, parabiosis 수술은 동물의 생존 2을 개선하기 위해 1933 년에 Bunster과 메이어에 의해 세련되었다. 현재 프로토콜에서 두 개의 마우스는 수술 Bunster과 메이어 기술의 변경 다음과 결합된다. 동물은 봉합 피부에 부담을 방지 확고한 지원을 허용하는 피부의 첨부 파일 다음에 팔꿈치와 무릎 관절을 통해 연결되어있다. 여기서, 우리는 세부 사항에서 야생형 (WT) 마우스에 마우스를 표현하는 유비쿼터스 GFP의 결합 parabiotic에 대해 설명합니다. 혈액 circulat 두 주 절차 후에, 한 쌍의 분리되고 GFP 양성 세포는 유세포 분석에 의해 검출 될 수있다WT 마우스의 이온. 혈액 키메라는 하나가 다른 하나의 동물에서 순환 세포의 기여를 조사 할 수있다.

두 생물의 parabiosis의 예상 결과는 일반적인 혈액 순환에 각 동물의 순환 시스템의 동일한 기여 (그림 2)입니다. 하나는 쉽게 유세포 분석에 의한 parabiosed WT와 GFP 긍정적 인 생쥐의 혈액의 성공적인 평형을 확인할 수 있습니다. 여기에, 정맥의 혈액은 수술 후에 2 주에 모두 parabionts의 꼬리에서 얻어진 것으로, (적혈구를 제외하는) 말초 혈액 세포에 대한 분획 하였다. 분별 조혈 유래 세?...

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Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

이 유기체의 접합 Parabiotic 공유 순환 시스템의 개발에 이르게한다. 이 프로토콜에서, 우리는 야생형 마우스와 구성 적 GFP 발현 마우스 사이 parabiotic 연결을 형성하는 수술 단계를 설명한다.

마우스의 Parabiosis : 자세한 프로토콜

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

Research

JoVE Journal

Medicine

73.8K 조회수.  University of California, Los Angeles.  이 유기체의 접합 Parabiotic 공유 순환 시스템의 개발에 이르게한다. 이 프로토콜에서, 우리는 야생형 마우스와 구성 적 GFP 발현 마우스 사이 parabiotic 연결을 형성하는 수술 단계를 설명한다. 

비디오: Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting. Protocols that allow researchers to study the biological pathways of the stress response in health and disease are fundamental to the progress of research in stress and anxiety.1 Although numerous protocols exist for inducing stress response in the laboratory, many neglect to provide a naturalistic context or to incorporate aspects of social and psychological stress. Of psychological stress protocols, meta-analysis suggests that the Trier Social Stress Test (TSST) is the most useful and appropriate standardized protocol for studies of stress hormone reactivity.2 In the original description of the TSST, researchers sought to design and evaluate a procedure capable of inducing a reliable stress response in the majority of healthy volunteers.3 These researchers found elevations in heart rate, blood pressure and several endocrine stress markers in response to the TSST (a psychological stressor) compared to a saline injection (a physical stressor).3 Although the TSST has been modified to meet the needs of various research groups, it generally consists of a waiting period upon arrival, anticipatory speech preparation, speech performance, and verbal arithmetic performance periods, followed by one or more recovery periods. The TSST requires participants to prepare and deliver a speech, and verbally respond to a challenging arithmetic problem in the presence of a socially evaluative audience.3 Social evaluation and uncontrollability have been identified as key components of stress induction by the TSST.4 In use for over a decade, the goal of the TSST is to systematically induce a stress response in order to measure differences in reactivity, anxiety and activation of the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) or sympathetic-adrenal-medullary (SAM) axis during the task.1 Researchers generally assess changes in self-reported anxiety, physiological measures (e.g. heart rate), and/or neuroendocrine indices (e.g. the stress hormone cortisol) in response to the TSST. Many investigators have adopted salivary sampling for stress markers such as cortisol and alpha-amylase (a marker of autonomic nervous system activation) as an alternative to blood sampling to reduce the confounding stress of blood-collection techniques. In addition to changes experienced by an individual completing the TSST, researchers can compare changes between different treatment groups (e.g. clinical versus healthy control samples) or the effectiveness of stress-reducing interventions.1

This article describes a protocol for inducing psychological stress in participants, which enables researchers to measure psychological, physiological and neuroendocrine responses to stress within single participants or between groups.

심리적 스트레스를 유발을위한 모금 사회 스트레스 테스트 프로토콜

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

연구

의학

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body temperature that is observed during fever. The use of hyperthermia as an adjuvant has emerged as a promising procedure for tumor regression in the field of cancer biology. For this purpose, the most important requirement is to have reliable and uniform heating protocols. We have developed a protocol for hyperthermia (whole body) in mice. In this protocol, animals are exposed to cycles of hyperthermia for 90 min followed by a rest period of 15 min. During this period mice have easy access to food and water. High body temperature spikes in the mice during first few hyperthermia exposure cycles are prevented by immobilizing the animal. Additionally, normal saline is administered in first few cycles to minimize the effects of dehydration. This protocol can simulate fever like conditions in mice up to 12-24 hr. We have used 8-12 weeks old BALB/Cj female mice to demonstrate the protocol.

This paper describes a protocol for whole body hyperthermia in mice that can stimulate fever like conditions up to 12-24 hr.

마우스의 긴 기간 온 몸이 고열에 대한 프로토콜

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

인간의 췌장을위한 컬렉션 프로토콜

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Simple Critical-sized Femoral Defect Model in Mice

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all limb bone fractures fail to heal completely due to the extent of the trauma, disease, or age of the patient. Our ability to improve bone regenerative strategies is critically dependent on the ability to mimic serious bone trauma in test animals, but the generation and stabilization of large bone lesions is technically challenging. In most cases, serious long bone trauma is mimicked experimentally by establishing a defect that will not naturally heal. This is achieved by complete removal of a bone segment that is larger than 1.5 times the diameter of the bone cross-section. The bone is then stabilized with a metal implant to maintain proper orientation of the fracture edges and allow for mobility. 
Due to their small size and the fragility of their long bones, establishment of such lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. As such, long bone defect models are confined to rats and larger animals. Nevertheless, mice afford significant research advantages in that they can be genetically modified and bred as immune-compromised strains that do not reject human cells and tissue.
Herein, we demonstrate a technique that facilitates the generation of a segmental defect in mouse femora using standard laboratory and veterinary equipment. With practice, fabrication of the fixation device and surgical implantation is feasible for the majority of trained veterinarians and animal research personnel. Using example data, we also provide methodologies for the quantitative analysis of bone healing for the model.

Animal models are frequently employed to mimic serious bone injury in biomedical research. Due to their small size, establishment of stabilized bone lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. Herein, we describe a simple method for establishing and analyzing experimental femoral defects in mice.

마우스의 간단한 임계 크기의 대퇴 결함 모델

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality of life when compared to dialysis. Although the last few decades have seen major improvements in patient outcomes following kidney transplantation, the increasing shortage of available organs represents a severe problem worldwide. To expand the donor pool, marginal kidney grafts recovered from extended criteria donors (ECD) or donated after circulatory death (DCD) are now accepted for transplantation. To further improve the postoperative outcome of these marginal grafts, research must focus on new therapeutic approaches such as alternative preservation techniques, immunomodulation, gene transfer, and stem cell administration.
Experimental studies in animal models are the final step before newly developed techniques can be translated into clinical practice. Porcine kidney transplantation is an excellent model of human transplantation and allows investigation of novel approaches. The major advantage of the porcine model is its anatomical and physiological similarity to the human body, which facilitates the rapid translation of new findings to clinical trials. This article offers a surgical step-by-step protocol for an autotransplantation model and highlights key factors to ensure experimental success. Adequate pre- and postoperative housing, attentive anesthesia, and consistent surgical techniques result in favorable postoperative outcomes. Resection of the contralateral native kidney provides the opportunity to assess post-transplant graft function. The placement of venous and urinary catheters and the use of metabolic cages allow further detailed evaluation. For long-term follow-up studies and investigation of alternative graft preservation techniques, autotransplantation models are superior to allotransplantation models, as they avoid the confounding bias posed by rejection and immunosuppressive medication.

Porcine models of organ transplantation provide an important platform to study mechanisms of organ preservation. This article describes a heterotopic porcine renal autotransplantation model, which allows investigating new approaches to improve the outcome of transplantation using marginal kidney grafts.

돼지 모델에서 이소성 신장자가 이식 : 단계별 프로토콜

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in adults in industrially developed countries. RPE transplantation appears to be a promising therapy, as it may replace dysfunctional RPE, restore its function, and thereby vision.
Here we describe a method for transplanting a cultured RPE monolayer on a scaffold into the subretinal space (SRS) of rabbits. After vitrectomy xenotransplants were delivered into the SRS using a custom made shooter consisting of a 20-gauge metallic nozzle with a polytetrafluoroethylene (PTFE) coated plunger. The current technique evolved in over 150 rabbit surgeries over 6 years. Post-operative follow-up can be obtained using non-invasive and repetitive in vivo imaging such as spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) followed by perfusion-fixed histology.
The method has well-defined steps for easy learning and high success rate. Rabbits are considered a large eye animal model useful in preclinical studies for clinical translation. In this context rabbits are a cost-efficient and perhaps convenient alternative to other large eye animal models.

Retinal pigment epithelium (RPE) replacement strategies and gene-based therapy are considered for several retinal degenerative conditions. For clinical translation, large eye animal models are required to study surgical techniques applicable in patients. Here we present a rabbit model for subretinal surgery geared towards RPE transplantation, which is versatile and cost-efficient.

토끼의 망막 수술에 대한 단계 프로토콜에 의해 단계

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.

Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.

마우스의 복부 유착의 창조

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the patients are unaware of such disorders or are having difficulty expressing their symptoms. Until now, several devices for perspiration monitoring have been developed; however, such devices tend to have a relatively large exterior, considerable power consumption, and/or less sensitivity.
Recently, we developed a small, wireless device for perspiration monitoring. The device consists of a temperature/relative humidity (T/RH) sensor, battery-driven small data logger, and silica gel as a desiccant in a small cylindrical exterior. The T/RH sensor is placed between the detection windows (through which the water vapor from the skin enters) and the silica gel. The underlying principle of the perspiration monitoring device is based on Fick&#39;s law of diffusion, which means that water vapor flux from the skin to the silica gel (i.e.&#160;transepidermal water loss and perspiration) can be captured by change in humidity at the T/RH sensor. In addition, a baseline subtraction method was adopted to distinguish perspiration and transepidermal water loss.
As shown in the previous report, the developed device can monitor the perspiration at any sites of the body in an easy, wireless manner. However, detailed methods of how to use the device have not been disclosed yet. In this article, therefore, we would like to show the point-by-point tutorials of how to use the device for perspiration monitoring, by showing the sympathetic activity test with the sympathetic skin response monitoring as an example.

Recently, we developed a small wireless device for perspiration monitoring. In this article, we present detailed protocols on how to use the device for perspiration monitoring with an example of the sympathetic activity test.

소설을 사용하여 땀 모니터링에 대한 자세한 프로토콜, 소형, 무선 장치

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

A Detailed Protocol for Physiological Parameters Acquisition and Analysis in Neurosurgical Critical Patients

Intracranial pressure (ICP) monitoring is now widely used in neurosurgical critical patients. Besides mean ICP value, the ICP derived parameters such as ICP waveform, amplitude of pulse (AMP), the correlation of ICP amplitude and ICP mean (RAP), pressure reactivity index (PRx), ICP and arterial blood pressure (ABP) wave amplitude correlation (IAAC), and so on, can reflect intracranial status, predict prognosis, and can also be used as guidance of proper treatment. However, most of the clinicians focus only on the mean ICP value while ignoring these parameters because of the limitations of the current devices. We have recently developed a multimodality monitoring system to address these drawbacks. This portable, user-friendly system will use a data collecting and storing device to continuously acquire patients&#39; physiological parameters first, i.e., ABP, ICP, and oxygen saturation, and then analyze these physiological parameters. We hope that the multimodality monitoring system will be accepted as a key measure to monitor physiological parameters, to analyze the current clinical status, and to predict the prognosis of the neurosurgical critical patients.

Recently, we have developed a portable multimodality monitoring system for the monitoring of various physiological parameters in neurosurgical critical patients. Detailed protocols on how to use this multimodality monitoring system are presented here.

생리 적인 매개 변수에 대 한 자세한 프로토콜 수집 및 신경외과 중요 한 환자 분석

Intracranial pressure (ICP) monitoring is now widely used in neurosurgical critical patients. Besides mean ICP value, the ICP derived parameters such as ...